猪MAVS基因原核表达载体的构建及其多克隆抗体的制备     

《中国兽医杂志》2017,(4)

通过RT-PCR从PK-15细胞系中扩增克隆MAVS(mitochondrial antiviral signaling protein)基因,构建原核表达载体p ET-MAVS220,转化感受态细胞Rosetta(DE3),利用IPTG诱导表达,重组MAVS经纯化后免疫4周龄昆明系小鼠制备抗线粒体抗病病毒信号蛋白(MAVS)多克隆抗体。诱导表达的最佳条件为IPTG 0.05 mmol/L,37℃诱导6 h,重组MAVS以可溶性蛋白和包涵体两种形式表达。应用该重组蛋白免疫小鼠获得的抗MAVS多克隆抗体与纯化的重组MAVS蛋白反应效价可达1∶16 000;该抗体与Poly(I∶C)刺激PK-15细胞产生的MAVS及与转染了重组MAVS基因真核表达载体pcDNA3.0-MAVS的BHK-21细胞表达的MAVS蛋白发生特异性反应,效价可达1∶1 000,特异性良好。  相似文献   

鸭坦布苏病毒NS3蛋白的原核表达及其多克隆抗血清的制备     

林霄  贺煜  程安春  汪铭书  贾仁勇  朱德康  刘马峰  杨乔  吴英  赵新新  张沙秋  黄娟  刘韵雅  张玲  潘磊昌  欧旭敏  毛塞  陈舜 《四川农业大学学报》2020,38(5)

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牛妊娠相关糖蛋白基因boPAG4的原核表达及单克隆抗体的制备     

祁文婧  张帅  赵鑫  张红星  谢远红  金君华 《河北农业大学学报》2019,42(6)

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鸡白介素18基因原核表达质粒构建   总被引：7，自引：0，他引：7  

温纳相  黄青云  陈荣光  曹素芳  陈金顶 《动物医学进展》2003,24(5):78-80

根据已发表的江西土鸡白介素 -1 8(Ch IL-1 8) c DNA编码基因序列设计引物 ,用PCR技术从 p MDCh IL-1 8质粒扩增出编码鸡IL-1 8成熟蛋白基因 ,重组于 p BV2 2 0表达载体上 ,将重组质粒转化大肠杆菌 JM1 0 9(DE3 ) ,转化子经温度诱导的表达产物 ,SDS-PAGE电泳鉴定约 2万 ,N端开头 1 5个氨基酸序列测定分析 ,证明获得了鸡 IL-1 8成熟蛋白 ,为今后深入研究鸡 IL -1 8的生物学特性及其临床应用打下了基础  相似文献   

牛朊蛋白单氨基酸变异体的原核表达     

陈建华 吴润刘湘涛  陈豪泰 《中国兽医科技》2005,35(4):245-250

应用pGEX原核表达载体构建了牛朊蛋白的1个正常重组蛋白和3个单氨基酸变异体的原核表达质粒，即pGEX-BoPrP(93～241)、pGEX-BoPrP(93～241)(S154N)、pGEX-BoPrP(93～241)(A129V)和pGEX-BoPrP(93～241)(Q234R)。经转化E．coli BL21(DE3)．均表达了预期大小约为42．4ku的融合蛋白。在优化的诱导表达条件下，各重组菌可产生表达量占细菌总蛋白量30％～45％的融合蛋白。经免疫印迹检查，所有融合蛋白均可与抗牛单克隆抗体4C11反应。表明，单氨基酸突变并不影响单抗4C11的识别表位。  相似文献   

肌抑素Myostatin突变体Pro区域的克隆、表达和活性     

杨兴元  杨树洪  侯健  陈永福 《农业生物技术学报》2004,12(1):56-60

为了检测肌抑素Myostatin突变体的Pro区域生化活性，设计引物从肌抑素突变的双肌牛皮尔蒙特(Piedmontese)的基因组中扩增得到肌抑素突变体的Pro区域，并分别将其亚克隆到pMD18-T载体上。利用基因重组技术，构建原核表达质粒。pET30a( )／Myostatin-Pro(简称pEMPro)，在大肠杆菌(Eschetichia coli)中分泌表达肌抑素突变体Pro区域，采用亲和层析法纯化表达产物，并将其共孵育于体外培养的绵羊的骨骼肌细胞。证实肌抑素的突变体Pro区蛋白具有促进肌肉细胞增殖的功能。  相似文献   

禽流感病毒H7亚型血凝素基因的原核表达及鉴定   总被引：5，自引：1，他引：4  

王传彬  多海刚孙明赵铁柱  田克恭 《中国兽医科技》2003,33(12):22-25

参考已发表的禽流感病毒(AIV)H7亚型血凝素(HA)基因序列设计引物，经RT-PCR扩增了AIV-H7亚型的HA1基因片段，再将该片段定向插入到原核表达载体pGEX-4T-2中，转化大肠埃希氏菌。重组表达栽体经酶切和测序鉴定后，用IPTG诱导表达。用Western-blotting和ELISA试验鉴定表达产物的抗原性。结果表明，融合表达蛋白能与AIV H7N1、H7N2、H7N7和H1N1亚型标准抗血清反应，而与H5N1、H9N2等其他13个亚型的抗血清无交叉反应。  相似文献   

H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立   总被引：4，自引：0，他引：4  

杨涛刘明  张云刘春国  杜绍范 《中国兽医科技》2005,35(8):585-589

采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒（AIV）A／Goose／HLJ／p46／2003（H5N1）的NSl基因，将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上，转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞，经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析，表明筛选到了重组质粒pc2X-NS1。SDS-PAGE电泳结果显示，重组质粒转化TB1大肠埃希氏菌后，经0．3mmol／L的IPTG诱导，融合蛋白MBP-NS1得到大量表达，融合蛋白以可溶形式存在，分子质量约为67ku。Western-blotting检测结果表明，融合蛋白MBP-NS1能够与H5N1亚型AIV活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应，而不能够与H5N1亚型AIV灭活疫苗免疫鸭血清发生反应。试验初步建立了以纯化的融合蛋白MBP-NS1为包被抗原的间接ELISA检测方法，为AIV灭活疫苗免疫家禽与AIV感染家禽的鉴别诊断奠定了基础。  相似文献   

猪生殖与呼吸综合征病毒M基因和N基因的表达     

赖维莉郭万柱  颜其贵韩国全 欧洋 《中国兽医科技》2005,35(10):771-774

将猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的M基因和N基因从重组质粒pMD18-T—M—N中亚克隆至pBV220原核表达栽体上，成功构建了重组表达质粒pBVM—N。将pBVM—N转化大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞．重组菌经温度敏感诱导表达，其细菌裂解物经SDS—PAGE可检测到分子质量约为19ku的目的蛋白，与M基因表达产物一致；经蛋白质分析软件Bandscan分析，其表达量可达19．1％；Western-blotting分析表明，该重组蛋白可被兔抗PRRSV血清所识别，与预期的M基因表达产物相一致，而N基因未获表达。  相似文献   

菜豆普通花叶病毒长豇豆分离物外壳蛋白基因的序列分析及原核表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

郑红英  陈炯  程晔  陈剑平  侯明生 《植物病理学报》2003,33(1):95-96

 根据普通生物学和血清学特性,长豇豆病毒病的病原被鉴定为黑眼豇豆花叶病毒(Blackeye cowpea mosaic virus,Bl CMV)、豇豆蚜传花叶病毒(Cowpea aphidborne mosaic virus,CABMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaic virus,CMV)。  相似文献