以CP23重组蛋白为抗原建立检测微小隐孢子虫抗体间接ELISA方法的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

何宏轩  张西臣  尹继刚  李建华  杨举 《中国兽医杂志》2003,39(1):3-5

摘要：以在E.coli高效表达的微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP23为抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗，建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为1μg／孔纯化的E.coli表达的CP23抗原包被酶标板，用10％免血清进行封闭，以正常E.coli裂解上清液稀释待检血清。实验表明应用CP23重组蛋白作为诊断C.parvum抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。  相似文献   

自由放养下绵羊的营养参数     

李辉  周道玮 《四川草原》2005,(4):41-44

根据绵羊的营养参数和饲养标准,结合日增重水平,计算了不同日增重水平对应的体重月平均动态及其所对应的粗蛋白日需要量和代谢能日需要量。不同日增重水平,达到生长期望所需要的日数不同,日增重水平越高,达到生长期望总所需要的粗蛋白和代谢能越少,但月平均的日需要量越多。自由放养的东北细毛羊当年生羔羊的日增重水平仅相当于舍饲饲养日增重的100g水平,根据代谢能计算,年总需干草340kg,可以作为计算载畜量的基本参数。自由放养情况下,即使能量满足需要,粗蛋白也短缺。当年生羔羊日增重在150￣200g,9￣10月龄内体重达到46￣50kg是北方草地家畜生产的理想目标,通过补饲可以实现。  相似文献   

甘蔗黄叶病毒与花叶病毒CP基因RNAi载体构建与转化甘蔗研究     

陈利平  陈平华  陈忠伟  王恒波  许莉萍  刘迪  高三基  郭晋隆  陈如凯 《热带作物学报》2016,37(1):99-106

甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分离物CP基因序列,经过比对选取保守序列作为干扰序列。通过在序列两端添加酶切位点,合成并连接成双价甘蔗黄叶病和花叶病毒干扰序列,然后构建到中间载体p HANNIBAL上,形成双价RNAi干扰结构,最后插入到p ART27上形成干扰表达载体。利用基因枪轰击甘蔗品种福农15号愈伤组织进行转化,经G418筛选获得抗性再生植株。通过提取DNA和RNA分析,证实双价RNAi干扰结构不仅以不同拷贝整合到甘蔗基因组中,而且得到了转录表达。  相似文献   

国内外药典相对密度测定法比较研究     

马秋冉 《中国兽药杂志》2023,57(1):63-68

通过对比中国兽药典、中国药典、美国药典和欧洲药典中相对密度测定法,了解四部药典的异同点,旨为中国兽药典引入新方法提供参考。分别对四部药典的收载情况、测定法原理、应用范围等进行比较和讨论。四部药典收载的测定法略有差异,中国兽药典收载的测定法在测定黏稠液体时具有一定局限性。建议中国兽药典在充分调研基础上,引入振荡型密度计测定法。  相似文献   

四川地区猕猴桃病毒1的RT-PCR检测及外壳蛋白基因序列分析     

彭期定  吕蕊  杨婷  林宏辉  席德慧 《园艺学报》2020,47(1):120-126

为了明确近期新西兰报道的侵染猕猴桃的新病毒——猕猴桃病毒1（Actinidia virus 1,AcV-1）在四川地区猕猴桃上的发生情况及其分子特性,采用RT-PCR对来自四川6个地区疑似感染病毒的90份猕猴桃主栽品种‘红阳’和‘金果’的叶片样品进行检测。结果表明,22份样品为AcV-1阳性,检出率为24.4%。将获得的5个AcV-1分离物和已报道的新西兰分离物K75的外壳蛋白（coat protein,CP）基因序列进行比对,结果表明,分离物间核苷酸序列和氨基酸序列的相似性分别为84.8% ~ 97.1%和89.7% ~ 99.6%,其中除邛崃分离物HYH5与新西兰分离物K75的核苷酸序列相似性较高（97.1%）外,其余4个分离物均低于91%。系统进化分析结果显示,这些分离物主要聚集在3个分支上,分离物HYH5与新西兰分离物K75位于同一分支,其余分离物位于另外2个分支。  相似文献   

转基因大豆CP4-EPSPS蛋白的降解规律研究     

李允静  万丹凤  刘标  肖芳  李晓飞  武玉花  李俊  高鸿飞  沈文静  李均  朱莉  吴刚 《中国油料作物学报》2021,43(1):124-130

随着转基因技术发展和应用,转基因外源基因表达蛋白在环境中富集和降解情况成为公众关注的问题,外源蛋白在环境中的检测和监测成为转基因研究和监管的一个方向.本研究利用模拟自然降解和蛋白酶K两种方式,处理转基因大豆种子(5％GTS 40-3-2),采用Western blot、双抗夹心快速检测试纸条和酶联免疫吸附测定(ELIS...  相似文献   

抗草甘膦转基因大豆(RRS)在黑土生态系统种植的安全性研究   总被引：6，自引：0，他引：6  

吕晓波  王宏燕  刘琦  赵光  李希臣  徐广惠  张俐俐  刘佳  刘昭军  李宁  李铁  雷勃钧 《大豆科学》2009,28(2)

为明确抗草甘膦转基因大豆(RRS)在黑土生态系统种植的安全性,经过连续3年田间和盆栽试验,分析了抗草甘膦转基因漂移(漂流)可能性.及抗草甘膦转基因大豆(RRS)在黑土区对根际牛态系统微牛物数量,氮代谢和两种土壤酶活性的影响结果表明:在自然条件理花粉漂移几乎足不可能的,但如人为加大虫媒传播(大于10头·m-2),抗草甘瞵基因的漂移概率接近0.05%,漂移距离为0.7 m RRS除对根际真菌数影响不显著外,对根际土壤细菌、放线菌、氨化和硝化细菌均表现降低趋势在大豆不同生育期,RRS除对根际上壤真菌数影响不显著外,对根际士壤细菌,放线菌,氨化和硝化细菌均表现降低趋势;RRS根际士壤细菌多样性指数与均匀度指数均低于亲本RRS-S;氨化强度与RRS-S相比差异不显著,RRS根际土壤硝化强度显著低于亲本RRS-S;RRS降低了过氧化氢酶和脲酶活性.  相似文献   

转CMV—CP基因番茄后代的田间抗病性   总被引：1，自引：0，他引：1  

汪智渊  薛宝娣 《南京农业大学学报》1997,20(1):39-42

以土壤农杆菌为介导，用叶盘法转化获得的转ＣＭＶ－ＣＰ基因（黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因）番茄工程植株，通过连续选择和自交，得到Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４和Ｒ５代的转化番茄植株。１９９３－１９９４年采用人工接种和田间自然发病两种方式鉴定转化植株对ＣＭＶ病毒的田间抗性。结果表明，转基因番茄植株对ＣＭＶ侵染有高度抗性。人工接种Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４代转化植株的防病效果达５０－７３％。有５０％以上的转基因植株始终  相似文献   

甘蔗花叶病毒南城分离物外壳蛋白基因序列测定及分析     

蒋军喜  钱亚娟  谢艳  阙海勇  罗有强  向妙莲 《江西农业大学学报》2008,30(3):464-467

从江西南城甘蔗病株中获得1个甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)分离物,命名为SCMV-NCH。根据SCMV外壳蛋白(CP)基因N-端和C-端保守序列设计引物,对SCMV-NCH的CP基因进行RT-PCR扩增、克隆和测序,获得924个核苷酸(nt),推断编码308个氨基酸(aa)的近全长CP基因序列。与SCMV亚组SCMV、高粱花叶病毒(SrMV)、玉米矮花叶病毒(MDMV)、约翰逊草花叶病毒(JGMV)、玉米花叶病毒(ZeMV)、白草花叶病毒(PenMV)等6种病毒代表性株系外壳蛋白氨基酸序列同源性比较结果显示,SCMV-NCH与SCMV的同源性最高(86.2%),与其他5种病毒同源性相对较低(56.4%~72.2%)。与SCMV13个分离物外壳蛋白氨基酸序列进行同源性比较并构建关系树,结果显示SCMV-NCH与我国浙江2个分离物(Yuhang和Xiaosh)具有最近的亲缘发生关系。  相似文献   

NSvc4和CP蛋白与水稻条纹病毒的致病相关     

袁正杰  贾东升  吴祖建  魏太云  谢联辉 《中国农业科学》2013,46(1):45-53

【目的】以水稻条纹病毒（Rice stripe virus,RSV）编码的NSvc4蛋白和CP蛋白的致病功能鉴定为切入点,研究RSV的致病机理。【方法】通过农杆菌介导在本氏烟中对RSV编码的6个蛋白进行细胞定位。采用双分子荧光互补（Bimolecular fluorescence complementation,BiFC）技术鉴定NSvc4蛋白与其余5个蛋白间的互作关系,并用酵母双杂交体系（Yeast two-hybrid,YTH）对NSvc4与CP蛋白间的互作再次验证。利用马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）系统在本氏烟叶片研究NSvc4蛋白和CP蛋白的致病性,采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术验证致病性鉴定结果。【结果】RSV NSvc4蛋白能与CP蛋白互作,且蛋白复合体在本氏烟细胞中能够定位到叶绿体。致病性鉴定显示,PVX-RSV-NSvc4侵染的本氏烟表现为花叶症状;PVX-RSV-CP能够在侵染叶上诱导花叶症状,但是系统叶却恢复健康;PVX-RSV-NSvc4与PVX-RSV-CP共侵染的本氏烟和PVX-RSV-NSvc4CP侵染的本氏烟的侵染叶、系统叶均表现出了严重病症。Real-time PCR结果显示,PVX载体在各侵染本氏烟中的累积量均较低,而RSV CP和NSvc4基因的表达量与本氏烟的发病症状紧密相关。【结论】NSvc4和CP蛋白均有致病性。CP蛋白的致病力不能持久,但是与NSvc4蛋白互作后具有持久致病力,表明二者协同在RSV致病过程中发挥作用。  相似文献