犬腺病毒SY-45株不同大小蚀斑特性研究     

范泉水  夏咸柱  邱薇  黄耕  何洪彬  余春  乔军  武银莲  殷震 《动物医学进展》2001,22(4):86-87,99

应用蚀斑方法将SY－45毒株经过3次蚀斑纯化直到蚀斑大小相对稳定。从不同大小的蚀斑中挑选出三种蚀斑，大斑直径约3mm(简称LP）、中斑约2mm(简称MP）、小斑约1mm(简称SP）。分别在MDCK细胞上增殖并进行了三种不同大小斑毒对犬的毒力、免疫原性和在MDCK细胞上产毒量比较，以筛选最佳的疫苗株，试验结果表明用不同大小蚀斑病毒大剂量人工感染易感犬后，所有的试验犬临床症状和病理解剖学和病理组织学表现均正常；对挑选的4窝CAV HI抗体效价小于等于1：2的健康幼犬进行免疫试验，测定血清的中和抗体效价和血凝抑制抗体效价，结果表明：大斑毒的免疫原性要稍高于中斑毒，而明显高于小斑毒；不同大小蚀斑毒在MDKC细胞上产毒量差异很大，大斑毒可达10^7TCID50／mL、小斑毒达10^6TCID50／ml、小斑毒达10^4.5TCID^50/mL。综合所有试验结果表明：大斑毒株具有产毒量高、安全性好、免疫原性强的优点，是较为理想的疫苗株。  相似文献   

表达HAV结构基因的重组腺病毒鉴定及细胞病变分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

李嘉琦  吴娟  孙茂盛  戴长柏 《动物医学进展》2003,24(2):68-71

利用RT-PCR方法,从HAV-L8株的RNA中扩增出结构基因(vp3 vp1),克隆到穿梭质粒pXCX2NotI上。采用磷酸钙-DNA共沉淀技术,将腺病毒载体pJM17与pXCX2-CMV-HAV共转染293细胞。在光学显微镜下观察到明显的细胞病变(CPE);经RT-PCR、免疫荧光染色和蛋白印迹鉴定证明HAV的结构基因已插入到腺病毒基因组中;在电子显微镜下观察发现有二十面体的病毒颗粒。以上结果表明获得了重组腺病毒rAdHAV,纯化后的rAdHAV滴度为1×109.0TCID50/mL。  相似文献   

鸡霍乱口服弱毒疫苗的研究     

刘学贤  丁铲  于圣青  尤兆岚 《中国预防兽医学报》1997,(5)

用经过选择的禽多杀巴氏杆菌自然弱毒菌株Ｒ１－２３菌株制成的鸡霍乱固体培养口服弱毒疫苗，其安全剂量接近于２００个免疫剂量。该口服苗两次饮水免疫的最适总剂量为每羽５０亿个活菌，最佳间隔时间为４８小时。免疫鸡第二次饮苗后第３天即可产生较好的免疫保护率（７／８）。免疫鸡对异型强毒株Ｐ１０５９（８∶Ａ）、Ｐ２７２３（９∶Ａ）和同型强毒株Ｃ４８－１（５∶Ａ）滴鼻攻击的近期保护率平均为５／１０、６／１０和９／１０。６个月免疫期的平均保护率为７６．７０％（４６／６０），一万多羽鸡田间试验结果表明，免疫后２个月的平均保护率为９３．１０％（２７／２９），６个月的平均保护率为７３．５０％（２５／３４），除对产蛋率有轻度影响（下降１．２７％）外，无其它不良反应。野外大面积使用结果表明，该口服苗不但性能稳定，免疫原性优良，而且安全可靠，适用于鸡口服免疫。  相似文献   

Dvl1及其突变体腺病毒载体的构建与在MSCs中表达鉴定     

王春燕  崔恒进  胡君  谢桂琴  张焕相 《广西农业生物科学》2014,(2):314-321

Dvl1及其结构缺失突变体ΔDIX（dsh and axin）和ΔDEP（dsh,Egl-10 and pleckstrin）腺病毒载体的构建并验证其在MSCs（mesenchymal stem cells）中的表达情况。将目的基因定向克隆至pAdTrack-CMV穿梭载体上,并经PmeⅠ线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒同源重组,获得重组腺病毒载体,在QBI-293A细胞中包装及扩增,实时荧光定量PCR和Western bolt验证Dvl1在MSCs中的表达情况。经PCR、PacⅠ单酶切鉴定及测序分析,成功构建Ad-Dvl1、Ad-ΔDIX和Ad-ΔDEP腺病毒载体,目的基因序列与GenBank报道一致,并选出150 MOI为最适感染MSCs的感染复数,成功构建了Ad-Dvl1、Ad-ΔDIX和Ad-ΔDEP腺病毒载体,并获得高滴度的病毒子,qPCR和Western blot证实Dvl1在MSCs中高表达并增加了β-catenin在细胞中的累积,为进一步研究Dvl1在MSCs迁移过程的作用奠定了基础。  相似文献   

禽腺病毒血清4型贵州株全基因序列分析     

尹德晶  张云丹  岳筠  李乔斌  何玲  李涛  王开功  程振涛 《中国畜牧兽医》2021,(1)

为了解禽腺病毒血清4型(FAdV-4)地方流行毒株的分子进化情况,基于实验室分离的2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株,分别对2株FAdV-4毒株进行PCR分段扩增,扩增产物克隆至载体,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后筛选出重组质粒进行测序,将测序结果依次拼接得到病毒的全基因组,获得FAdV-4贵州株的全基因序列,并对其进行序列和遗传进化分析。结果显示,通过PCR分段扩增成功获得了2株FAdV-4贵州株(GZ-BJ株和GZ-QL株)的全基因序列,长度分别为43352、43723 bp,FAdV-4 GZ-BJ株全基因序列长度比FAdV-4 GZ-QL株短371 bp,少6个ORF(22K、putative 9.1 ku、u-exon、ORF17、ORF28、ORF42),二者的氨基酸同源性为57.1%。2株FAdV-4贵州株同国内外不同地区FAdV-4毒株核苷酸同源性在88.7%~100%,与FAdV-4经典毒株ON1比对,2株FAdV-4贵州株和国内FAdV-4分离株均缺失ORF19、ORF27、ORF30。系统进化树分析显示,2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株仍属于Ⅰ群C种FAdV。研究结果表明,2株贵州株FAdV-4 GZ-BJ株和FAdV-4 GZ-QL株较国内外FAdV-4毒株均存在进化与突变,且FAdV-4 GZ-BJ株变化较大,但尚未改变其血清型,这为探索FAdV-4致病机理的分子机制研究提供依据。  相似文献   

育雏早期应用氟苯尼考对禽腺病毒感染雏鸡病情的影响     

孟凡亮  刘蒙昊  宋一诺  张慧  李焱  曹龙龙  焦秋林  肖一红  刘思当 《中国兽医学报》2021,(2):332-337

为了评价氟苯尼考的应用对禽腺病毒感染雏鸡病情的影响,本试验通过对血清4型禽腺病毒感染SPF雏鸡并应用氟苯尼考饮水给药,监测雏鸡的发病及排毒情况,并对免疫器官指数、干扰素相关基因及细胞因子基因表达情况进行检测。结果显示,病毒感染雏鸡后应用氟苯尼考能显著增加雏鸡的病死率及排毒量,加重雏鸡的病理学变化,并降低雏鸡免疫器官指数,还可降低干扰素相关基因IRF-7、2′-5′OAS、MX1和细胞因子基因IL-6、IFN-γ、TNF-α的转录水平。本试验进一步认识了氟苯尼考的毒副作用,对临床氟苯尼考的合理用药提供了相关数据支持,为进一步研究氟苯尼考的毒副作用奠定了基础。  相似文献   

Effect Comparison of Adenovirus Vector Transfer into Different Buffalo Cells     

DUAN An-qin  PANG Chun-ying  ZHU Peng  LU Xing-rong  DENG Ting-xian  LIANG Xian-wei 《中国畜牧兽医》2016,43(10):2661-2665

Buffalo mammary epithelial cell,cumulus cell and fibroblasts were transfected by adenovirus vectors and compared their transfection efficiency.293 cells were transfected with pBHGloxdelE13cre and pDC316-eGFP by liposome,the virus was collected and titer was detected.Buffalo mammary epithelial cell,cumulus cell and fibroblasts were exposed to different multiplicity of infection (MOI) of adenovirus vectors.After 72 h,the cells were observed with inverted fluorescence microscope,and transfection efficiency was calculated.When the MOI was 25,50,100,200 and 400,the transfection efficiency of fibroblasts were 0.7%,7.0%,9.0%,12.5% and 34.0%,the transfection efficiency of cumulus cells were 42.5%,55.3%,57.4%,76.0% and 80.0%,the transfection efficiency of mammary epithelial cells were 88.7%,100%,100%,100% and 100%.The results showed that the transfection efficiency of mammary epithelial cell was the best,followed by cumulus cell,and fibroblast was poor.  相似文献   

禽腺病毒血清4型感染鸡组织中NLRP3基因转录水平的实时荧光定量PCR分析     

郭慧芳  李宁  王白玉  乔麒龙  黄庆  李永涛  王增  赵军 《畜牧兽医学报》2021,52(1):195-201

旨在分析禽腺病毒血清4型（FAdV-4）感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平,本研究设计鸡NLRP3特异性引物,利用RT-PCR扩增NLRP3基因180 bp片段并克隆至pMD-18T载体,制备重组质粒pMD-18T-NLRP3。以pMD-18T-NLRP3质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。通过反应条件优化,成功建立了检测NLRP3基因的实时荧光定量PCR方法,并利用该方法对致病性FAdV-4感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平进行了分析。结果显示,所设计的NLRP3引物可特异性扩增鸡NLRP3基因,建立的实时荧光定量PCR对鸡NLRP3标准质粒的扩增曲线良好,标准品的拷贝数与Cq值呈现良好的线性关系。与对照组相比,NLRP3分子在FAdV-4感染鸡肝和脾中的转录水平极显著高于对照组（P<0.001）,在盲肠扁桃体和法氏囊的表达显著高于对照组（P<0.01）。本研究所建立的鸡NLRP3基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR可以检测FAdV-4感染鸡不同组织中NLRP3的转录水平;致病性FAdV-4感染所造成的组织炎症损伤与NLRP3分子密切相关。  相似文献   

表达猪生长激素基因的重组腺病毒的构建及对猪生长的促进效果观察   总被引：1，自引：0，他引：1  

曹汉威  张春红  黄忠  阮良基  林洁 《畜牧兽医学报》2006,37(6):592-596

利用复制缺陷型重组腺病毒作为基因表达载体,将猪生长激素（pGH）基因直接转导到猪体内细胞,研究猪生长激素基因在猪体内的促生长作用.用同源重组的方法,构建含pGH基因的重组腺病毒（Ad-pGH）.将其感染293细胞和PK-15细胞,均可检测到pGH.用1 mL此重组腺病毒（1010TCID50）一次性肌肉注射60日龄的杂交长白猪.结果表明,试验组的猪平均增重比对照组的猪增加37%（注射后第4周）和19%（注射后第6周）;饲料报酬提高28%（注射后第4周）和18%（注射后第6周）.试验结果证明,由重组腺病毒表达的pGH具有生物学活性,在猪体内起到明显的促进生长的作用.重组腺病毒介导的pGH基因在猪体内的表达可维持约4周.  相似文献   

间接ELISA法对禽霍乱抗体的动态监测   总被引：5，自引：0，他引：5  

梁荣  张耀相  刘再超  曹启学  李健强 《中国预防兽医学报》1999,(6)

将40只50日龄健康禽霍乱非免疫鸡随机分为四组，每组10只。用禽霍乱蜂胶佐剂灭活疫苗对各组鸡进行不同水平的免疫，同时设非免疫对照组。各组鸡间隔5-7天采血，以间接ELISA法测定血清P／N值，并确定临界值。将P／N值在2.1-4.7的13只试验鸡以一个最小致死量（相当于10个菌／ml）进行攻毒试验，同时设攻毒对照，在1周内3只对照鸡均表现感染发病并死亡，而试验鸡均健活，从而初步证明所确定的临界值是合理的。  相似文献