拟除虫菊酯类农药半抗原合成及酶联免疫分析     

胡久平  李相前  任世英  周礼红 《湖北农业科学》2013,52(5)

酶联免疫分析(ELISA)是农药残留检测的一种重要方法,具有方便快速、特异灵敏等优点.主要介绍了拟除虫菊酯类农药半抗原的合成方法,对拟除虫菊酯分子的环丙烷、氰基和芳香环进行修饰;对拟除虫菊酯水解产物进行修饰;增加一个连接臂作为半抗原.同时介绍了酶联免疫分析的研究进展,对拟除虫菊酯类农药半抗原的合成及酶联免疫分析进行了讨论和展望.酶联免疫分析在拟除虫菊酯类农药的残留检测中将起到越来越重要的作用.  相似文献   

一种烯啶虫胺新型半抗原的合成与免疫应用     

赵方方  罗金辉  谢德芳  吕岱竹 《热带作物学报》2016,37(7):1394-1398

为建立烯啶虫胺（nitenpyram,NIT）残留免疫分析方法,通过合成烯啶虫胺新型半抗原并进行紫外和质谱等技术的分析确证,分别将半抗原与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联成完全的免疫抗原和包被抗原。免疫小鼠后测定抗血清的效价,随着免疫次数的增加先逐渐升高后再逐渐降低,最高达到1 ∶ 16 000。选取抗血清效价最高的小鼠,用间接竞争ELISA法测定其灵敏度,其半抑制浓度（IC50）较低,为1.68 μg/mL,竞争效果明显。将建立的检测方法与液相色谱方法进行比较,虽线性范围和灵敏度较液相色谱方法稍低,但回收率均≥80％,无明显差异,具有明显的识别效应,为烯啶虫胺高灵敏的单克隆抗体制备及残留免疫分析奠定基础。  相似文献   

氨基脲人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备     

姚嘉赟  沈锦玉  郝贵杰  徐洋  潘晓艺  尹文林 《中国动物检疫》2009,26(1):33-35

目的合成氨基脲人工抗原并制备其多克隆抗体。方法以氨基脲(SEM)和对醛基苯甲酸(CP)为原料合成半抗原(CP-SEM),并采用碳化二亚胺法和混合酸酐法将其分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成氨基脲人工抗原。以氨基脲人工抗原(CPSEM-BSA)为免疫原免疫Balb/c小鼠,利用间接ELISA法测定其抗体效价。结果经薄层层析、红外光谱和元素分析等方法鉴定合成半抗原即为CP-SEM。紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明人工抗原合成成功。免疫获得抗氨基脲的多克隆抗体,其抗体效价为1:64000。结论氨基脲人工抗原合成成功,并获得抗氨基脲的多克隆抗体。  相似文献   

有机磷农药氯亚磷 亚胺硫磷半抗原的合成与人工抗原制备     

葛玉  刘冰  王硕 《农产品加工．学刊》2009,(12):4-6

对氯亚磷结构进行修饰,连接一个六碳的间隔臂,制得亚胺硫磷、氯亚磷的半抗原,确定最佳反应条件。利用薄层层析和质谱法,对反应进行实时监控,确定最佳反应时间为16d。通过EDC法成功制备亚胺硫磷和氯亚磷人工抗原。  相似文献   

兔抗敌百虫多克隆抗体的制备   总被引：1，自引：0，他引：1  

范世奇  曹远银  罗巧燕  邱宏伟 《湖北农业科学》2009,48(4)

根据敌百虫的结构特征,将其改造成新的半抗原,并分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)共价偶联,作为免疫原和包被原进行抗体制备及ELISA试验,其抗血清效价达到6.553 6x107.建立了闻接竞争ELISA方法,并优化了工作条件;方阵测定确定了包被抗原最佳浓度为10μg·mL-1,抗血清的最佳稀释度为1:2.048X106;建立了ELISA标准工作曲线,结果表明,在50～3 500 ng·mL-1浓度范围内,标准工作曲线呈线性关系,检测限为60ng·mL-1.  相似文献   

溴虫腈半抗原及全抗原合成与鉴定     

刘顺字  徐汉虹 《华南农业大学学报》2009,30(2)

以杀虫剂溴虫腈为起始原料,合成了半抗原4-溴-2-(对氯苯基)-1-乙氧基甲基-5-(三氟甲基)吡咯-3-甲胺(简称CFP-NH:).通过戊二醛法将该半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联得到全抗原,经紫外光谱法鉴定后,用三硝基苯磺酸法(TNBS)测得2偶联物偶联比分别为22:1和15:1.以CFP-NH2-BSA免疫新西兰白兔、CFP-NH2-OVA为包被原,对其抗血清进行间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA),测得抗血清效价为2.56×104,抗血清竞争性抑制试验表明,溴虫腈质量浓度为40 μg/mL时,其抑制率达80%以上,进一步证明抗原合成成功.  相似文献   

喹喔啉-2-羧酸人工抗原合成与抗体制备     

张泽英  袁宗辉 《中国畜牧兽医》2013,40(10):152-155

试验以喹喔啉-2-羧酸(quinoxaline-2-carboxylic acid,QCA)及其与γ-氨基丁酸(ABA)的衍生物(QCA-ABA)为半抗原,将其与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成人工抗原。以QCA-BSA和QCA-ABA-BSA为免疫原,免疫大白兔制备多克隆抗体,利用紫外分光光度计分析结合物的结合情况,间接ELISA和间接竞争ELISA分析抗体特性。结果表明,以QCA-BSA、QCA-ABA-BSA为免疫原制备的抗体平均效价分别为12.8×10⁴、6.4×10⁴。2种抗体对QCA灵敏度低,IC₅₀均大于10000 ng/mL,而对QCA-ABA的灵敏度高,IC₅₀分别为14.2和7.75 ng/mL,特异性好,仅与3-甲基-喹喔啉-2-羧酸(12%)、卡巴氧(0.038%)和喹赛多(0.028%)有较低程度的交叉反应,与衍生试剂和结构类似物均无交叉反应(<0.01%)。该抗体为建立动物可食性组织中QCA残留物的快速检测方法奠定了基础。  相似文献   

Preparation of Monoclonal Antibody Against Lasalocid and Deveopment of Indirect Competitive ELISA Detection Method     

YANG Xiao-kang  ZHANG Hui-yan  GU Jian-hong  YUAN Yan  BIAN Jian-chun  LIU Zong-ping  LIU Xue-zhong 《中国畜牧兽医》2017,44(10):3049-3056

To prepare monoclonal antibodies (MAb) against lasalocid (LAS) and establish an indirect competitive ELISA (Ci-ELISA) detection method,conjuaction of LAS-BSA and LAS-OVA were synthetized as the immunogen and coating antigen by using active ester method in this experiment. After 6 times of immunization,the spleen cells of mice and myeloma cells were fused. Finally,a hybridoma cell line that could stably secrete specific MAb against LAS was screened.The immunological subtype of the MAb was identified as IgG1,and its light chain was κ type.The titer of the ascites was 1:16 000, which showed no cross activity with monensin sodium, salinomycin sodium,maduramycin,cefalotin sodium and streptomycin sulfate. Ci-ELISA method was established based on the MAb against LAS with the linear equation was y=0.376x-0.2374(R²=0.9914), and the linear range was 5 to 1 000 ng/mL and the IC₅₀ was 90.22 ng/mL. The method was used to detect LAS in spiked samples and the recovery rate was 81.76% to 102.41% within the detection range,indicating that the method was successfully established with good accuracy and high sensitivity. The preparation of MAb against LAS and the establishment of Ci-ELISA method laid the foundation for the development of LAS detection kit.  相似文献   

抗恩诺沙星噬菌体单链抗体库的构建及鉴定     

温凯  沈建忠  孟辉  吴聪明  王战辉  张素霞 《中国农业大学学报》2011,16(2):118-124

本研究以兽药恩诺沙星为对象,构建噬菌体抗体库,为低成本、快速制备目的抗体提供新的途径。以恩诺沙星-鸡卵清蛋白(ENR-OVA)为免疫原对Balb/c小鼠进行免疫,取其脾细胞提取总RNA,并分别扩增全套抗体轻、重链基因,通过重叠延伸PCR技术,以编码柔性多肽(Gly3Ser)4的基因为接头,将轻重链基因组装为完整的scFv基因,将之克隆入pCANTAB5E载体,转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13KO7对其进行超感染,构建噬菌体抗体库并进行富集、筛选和鉴定;构建了库容量约为2.2×106的抗恩诺沙星噬菌体单链抗体库,并筛选出26株阳性克隆,为表达单链抗体、建立免疫检测方法奠定基础。  相似文献   

多西环素人工抗原的合成与鉴定     

乐涛  毕丁仁 《中国兽药杂志》2010,44(1):30-34

将多西环素（doxycycline,DOX）进行化学修饰引入羧基或氨基等活性基团,然后与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联合成人工免疫原DOX—PABA—BSA、DOX—BSA和包被原DOX—PABA—OVA、DOX～OVA,并用紫外吸收（UV）、凝胶电泳（SDS—PAGE）和EUSA方法对人工抗原进行鉴定;将合成的人工抗原DOX—PABA—BSA、DOX—BSA分别免疫BALB／C小鼠,用间接ELISA方法测定多抗（pAb）效价,用竞争ELISA方法鉴定其敏感性,用交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,二个免疫组6只小鼠血清抗体效价均在1：6400以上,DOXpAb对DOX的50％抑制浓度（IC50）在39．79～53．13μg/L,抗血清与四环素类药物交叉反应很低。本实验为建立多西环素ELISA残留免疫学检测方法和并制备多西环素试剂盒奠定了基础。  相似文献