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1.
为检测猪、鸡可食性组织中喹噁啉类兽药残留标示物喹噁啉-2-羧酸(QCA)和3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQ-CA),建立了同时检测这2种残留标示物的高效液相色谱-串联质谱法.将样品碱水解,乙酸乙酯等液-液萃取,65℃氮气吹干,甲醇:0.5%甲酸水溶液(30:70)溶解,0.45μm微孔滤膜过滤后,采用高效液相色谱-串联质谱分析.结果显示,猪、鸡可食性组织中喹噁啉类兽药残留标示物MQCA和QCA检测限为0.2～0034μg/kg和0.5～0.9μg/kg,定量限为0.5～0.61μg/kg和0.77～1.31μg/kg.相对回收率在90.07%～106.8%范围内,日内变异系数≤13.69%.日间变异系数≤15.43%.MQCA和QCA在2～100μg/kg范围内具有较好的线性关系(r~2>0.99).结果表明,本方法简单、灵敏度高.适用于猪、鸡可食性组织中喹噁啉类兽药残留标示物的定量检测. 相似文献
2.
《中国兽医学报》2010,(1)
为检测猪、鸡可食性组织中喹噁啉类兽药残留标示物喹噁啉-2-羧酸(QCA)和3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQ-CA),建立了同时检测这2种残留标示物的高效液相色谱-串联质谱法。将样品碱水解,乙酸乙酯等液-液萃取,65℃氮气吹干,甲醇∶0.5%甲酸水溶液(30∶70)溶解,0.45μm微孔滤膜过滤后,采用高效液相色谱-串联质谱分析。结果显示,猪、鸡可食性组织中喹噁啉类兽药残留标示物MQCA和QCA检测限为0.2~0.34μg/kg和0.5~0.9μg/kg,定量限为0.5~0.61μg/kg和0.77~1.31μg/kg。相对回收率在90.07%~106.8%范围内,日内变异系数≤13.69%,日间变异系数≤15.43%。MQCA和QCA在2~100μg/kg范围内具有较好的线性关系(r20.99)。结果表明,本方法简单、灵敏度高,适用于猪、鸡可食性组织中喹噁啉类兽药残留标示物的定量检测。 相似文献
3.
为建立敏感、特异、快速的雌二醇（estradiol,E2）残留免疫检测方法,本研究利用雌二醇人工抗原（E2-BSA）免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备特异性雌二醇单克隆抗体,利用高效价、高特异性单克隆抗体建立间接竞争ELISA（icELISA）方法。结果显示,试验成功筛选获得一株稳定分泌抗雌二醇抗体的杂交瘤细胞株（3H3）,抗体效价可达1∶320 000,利用3H3腹水抗体优化间接竞争icELISA反应条件,检测抗体的敏感度,IC50为1.636 ng/mL,IC20~IC80线性范围为0.202~13.281 ng/mL。雌二醇腹水抗体与雌三醇、乙炔雌二醇的交叉反应率分别达0.31%和0.25%,而与雌酮、戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、炔雌醚、己烯雌酚、壬基酚的交叉反应率均<0.1%。结果表明,利用本研究制备的单克隆抗体建立雌二醇间接竞争ELISA检测方法,可满足食品中雌二醇残留高灵敏度的检测要求。 相似文献
4.
为建立动物源性食品中沙拉沙星（SAR）残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体。通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞争化学发光酶联免疫（ic-CLEIA）检测方法,并通过灵敏度、精密度、交叉反应率、添加回收试验对该方法进行评价。紫外扫描结果显示,完全免疫原偶联成功;制备的SAR单克隆抗体效价达1：4×106;包被原浓度为0.25 μg/mL,抗体稀释比为1：750 000,4 ℃包被过夜,5%脱脂乳封闭,竞争孵育1 h,酶标二抗稀释比为1：10 000,孵育1 h为ic-CLEIA最佳反应条件;建立的ic-CLEIA方法标准曲线呈线性,线性范围为0.0625~10 ng/mL,R2=0.995,灵敏度IC50为1.45 ng/mL;其平均批内和批间变异系数均<10%;除与二氟沙星的交叉反应率达到98.08%以外,与其他氟喹诺酮类药物的交叉反应率均<8%,与其他非氟喹诺酮类药物均无交叉反应;SAR标准溶液的最低检测限（LOD）为0.32 ng/mL,SAR在鸡肉样品中的LOD为0.46 μg/kg;添加回收率在88.3%~106.7%范围内,其变异系数≤12.2%。结果表明,本研究建立的ic-CLEIA方法检测速度快、灵敏度高,适用于动物源性食品中SAR残留的大量检测,为SAR残留检测提供了新的方法。 相似文献
5.
猪食用组织中喹喔啉-2-羧酸的高效液相色谱检测方法 总被引：6，自引：0，他引：6
为了监测猪食用组织中卡巴氧(carbadox)的残留,建立了检测猪肝脏、肾脏、肌肉等组织中卡巴氧的标示残留物喹喔啉2羧酸(Quinoxaline-2-carboxylic acid,QCA)的高效液相色谱法.组织样品经碱水解,液液分配提取,用离子交换色谱柱净化,洗脱液作浓缩后用甲醇溶解进行测定.色谱柱为ODS C18柱;流动相为甲醇-水(体积比4060),每1L中加入8 mL冰乙酸,流速为1.0 mL/min;定量分析用紫外检测器,波长320 rm,确证性分析用二极管阵列检测器,波长250～500 nm.喹喔啉-2-羧酸工作液质量浓度在0.03～0.96 mg/L范围内,药物峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数r=0.999 9.组织中添加药物的质量分数为0.015、0.03、0.06 μg/g时,肝脏样品回收率分别为(73.55士9.46)%、(80.33±14.95)%、(75.84±7.42)%;肾脏样品分别为(70.89±10.33)%、(74.89±7.19)%、(83.33±10.68)%;肌肉样品分别为(69.49±7.26)%、(66.44±5.09)%、(62.11±6.08)%.本方法条件下,3种组织中药物最低检出质量分数均为0.015 μg/g,回收率测定的日内及日间相对偏差(RSD)分别＜18%和＜20%.当组织中药物质量分数达0.06μg/g时,可检测到喹喔啉-2-羧酸的特征性紫外吸收光谱. 相似文献
6.
苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立 总被引：1，自引：1，他引：0
为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR<0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12 800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5～1 000 ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845 (R^2=0.990),其IC50为58.88 ng/mL,LOD为3.83 ng/mL,回收率在85.96%～104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。 相似文献
7.
为制备拉沙里菌素（LAS）单克隆抗体,建立针对LAS的间接竞争ELISA（Ci-ELISA）方法,试验采用了活性酯法将LAS分别与BSA和OVA偶联成LAS-BSA和LAS-OVA作为免疫原和检测原,6次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,最终筛选出一株能稳定分泌抗LAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株C11。经鉴定,C11的抗体类型为IgG1,轻链为κ链;所制腹水效价为1∶16 000,与莫能菌素钠、盐霉素钠、马杜霉素胺、头孢噻吩钠和硫酸链霉素均无交叉反应。用此单克隆抗体建立LAS Ci-ELISA检测方法显示,Ci-ELISA标准工作曲线为y=0.376x－0.2374（R2=0.9914）,LAS在5~1 000 ng/mL时,线性关系良好,IC50为90.22 ng/mL,加标回收率为81.76%~102.41%,表明方法精确度好、灵敏度高。LAS单克隆抗体的制备和Ci-ELISA方法的建立为下一步试剂盒的研发奠定了基础。 相似文献
8.
本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑制浓度(IC50)为2.1 ng/mL,牛奶中替米考星的最低检测限(LOD)为2 μg/L。在5、10和20 μg/L添加浓度下,回收率为79.2%~90.1%,变异系数不高于9.0%。与其他常见的大环内酯类药物无交叉反应。本研究建立的替米考星间接竞争ELISA方法灵敏度达到了残留限量标准要求,为开发可用于牛奶中替米考星的快速检测试剂盒奠定基础。 相似文献
9.
以合成沙丁胺醇(SAL)完全抗原为基础获得针对SAL的多克隆抗体,建立检测SAL的间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测方法,为进一步开发SAL快速检测试剂盒奠定基础。为此,分别用混合酸酐法和活化酯法制备SAL-BSA免疫原和SAL-OVA检测原,免疫新西兰大白兔获得SAL多抗血清,建立检测SAL ic-ELISA检测方法。结果显示,成功合成了SAL-BSA和SAL-OVA,其偶联比分别为17∶1和6.4∶1;免疫后兔血清抗体效价为1∶102400,所建立ic-ELISA的半数抑制浓度(IC50)为24.84μg/L,最低检测限(IC10)为0.78μg/L,线性范围IC20~IC80为3.16μg/L~80.1μg/L;精密度(CV)%<10%,回收率在98%~110%之间。特异性鉴定结果显示,SAL多抗血清除与侧链上含有叔丁基官能团的结构类似物具有较强的交叉反应外,不存在与其他同类分子的交叉反应。以上结果表明,成功建立了检测SAL的ic-ELISA检测方法,为进一步开发SAL快速检测试剂盒奠定了基础。 相似文献
10.
为建立检测齐帕特罗(ZIL)残留物的间接竞争酶联免疫吸附试验(ic-ELISA),以获得的抗ZIL兔多抗血清为基础,以制备的完全抗原为包被源,通过优化反应条件,建立了检测ZIL残留物的ic-ELISA检测方法。结果表明,兔血清最佳稀释比例为1∶6 000,抗原最佳包被浓度为2μg/mL,半数抑制浓度(IC50)为0.317 ng/mL,线性检测范围(IC20～IC80)为0.136～1.181 ng/mL,最低检测限(LOD,IC10)为0.081 ng/mL。经优化后,检测体系最佳pH为7.4,盐浓度≤0.4 mol/L,甲醇、乙醇、丙酮和和DMSO的含量≤5%,乙腈含量≤10%,且检测基质中牛尿液浓度≤15%时能够获得较高的检测灵敏度,并且该检测方法具有良好的稳定性和特异性,批内和批间重复试验样品添加回收率分别为101%～112%和101%～120%,变异系数均低于10%,检测结果与HPLC-MS检测结果的相关系数为R2=0.990 6。该检测方法检测速度快、灵敏度强、准确... 相似文献
11.
The infection model of avian reovirus in chicken was established, which layed the ground for vaccine efficacy test.The 49-day-old chickens were inoculated with 102.0, 103.0, 103.5, 104.5and 105.5 ELD50/0.2 mL of two strains of ARV, T98 and AV2311, respectively, in foot pad inoculation method. Clinical signs were observed ten days and recorded daily. 6 days after inoculation, serum samples were taken. 10 days after inoculation, chickens were sacrificed for necropsy. Serum antibody was detected by ELISA. The results indicated that the morbidity of 105.5and 104.5 ELD50/0.2 mL were 100%, and the foot pads of chicken were swelled severely, which were dark red or purple. Symptoms of AV2311 set was a bit lighter than that of T98 strain. The morbidity of 103.5 ELD50/0.2 mL was 90% and the morbidity of 103.0and 102.0 ELD50/0.2 mL were 80%. The ELISA result indicated that only the serum efficacy of 104.5and 105.5 ELD50/0.2 mL set of two strains of ARV were positive.The experiment proved that the virulence of ARV T98 strain was strong, and had good immunogenicity. The best inoculated dose of ARV T98 strain was 104.0 ELD50/0.2 mL, which provided the important basis for researching the quality standard of chicken viral arthrilis vaccine. 相似文献
12.
为探讨酶联免疫法(ELISA)检测饲料中沙丁胺醇(salbutamol,SAL)的前处理方法,试验对提取液的pH、离子强度、有机溶剂浓度及样品稀释倍数等条件进行了考察,选取最适宜的提取液条件对2种不同类型的饲料样本进行提取,用ELISA测定样品中沙丁胺醇的残留量。结果表明,沙丁胺醇标准曲线的IC50值为0.606 ng/mL,线性范围为0.221～1.658 ng/mL,R2=0.9998,提取液的pH为7.5,PBS缓冲液最优浓度为0.06 mol/L,稀释倍数为10倍,2种不同类型的饲料样本的检测限(LOD)为5.0 ng/mL。当沙丁胺醇的添加浓度为5、10 μg/kg时,该方法的添加回收率为77%～110%,变异系数<8%。 相似文献
13.
为了合成恩诺沙星（enrofloxacin,EFLX）完全抗原,制备兔源多克隆抗体血清,试验通过活化酯法将小分子的EFLX偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白(OVA)上,形成偶联物EFLX-BSA和EFLX-OVA,以EFLX-BSA为免疫原免疫兔,以EFLX-OVA为检测原通过ELISA方法检测兔血清效价。结果表明,免疫兔血清效价都在1∶51200以上,其中2号兔效价最高,达到1∶204800,敏感性好,半数抑制浓度IC50为169.91 ng/mL,检测范围为37.52～302.31 ng/mL。本试验成功制备了EFLX完全抗原,获得了敏感的兔源多克隆抗体血清,为以后ELISA试剂盒和胶体金试纸条的研发奠定了基础。 相似文献
14.
2013年高温季节在广东广州2个养殖场患病宝石鲈(Scortum barcoo)病灶处共分离到2株细菌Py1和Py2。宝石鲈攻毒试验结果显示2株分离菌均具有较强毒力(半致死量分别为7.42×106和1.72×106 CFU/mL),且都对罗非鱼具有高度感染性(半致死量分别为3.39×106和8.66×105 CFU/mL)。经ATB生化鉴定及cfb基因序列分析,确定分离株为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae),并对其进行了相关药敏试验检测,以期为该病的预防提供参考。 相似文献
15.
Using spectinomycin (SPE), carboxyl methyl hydroxylamine hydrochloride （CMO）， glycol diglycidyl ether （EDE）, bovine serum albumin (BSA) and ovalbumin （OVA） as the main stuff, four artificial-immunogens had been obtained by the N-hydroxysuccinimide-activated ester method and the EDE double functional group method. Ten female rabbits were immunized with this two artificial-immunogens. Animal immune test demonstrated that there were antibodies against SPE in rabbits sera. The polyclonal antibody was measured with indirect ELISA test. The titer was 1∶160000 and the IC50 was 0.484 ng/mL. This study laid the basis for further research on the immune test kit for the SPE remnant. 相似文献
16.
为了制备牛分枝杆菌的单克隆抗体,本试验利用制备的原核表达的牛分枝杆菌重要抗原蛋白MPB70作为免疫原皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。利用细胞融合技术,经过5次亚克隆与筛选,取已免疫好的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG3500的作用下进行细胞融合。筛选得到了2株分泌抗牛分枝杆菌MPB70蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为Anti-B-MPB70：8和Anti-B-MPB70：12。采用间接ELISA方法对获得的单克隆抗体进行亲和常数检测、效价分析及亚类鉴定,通过SDS-PAGE凝胶试验对单克隆抗体进行纯度分析,并检测其浓度,通过Western blotting方法对单克隆抗体的反应特性进行鉴定。结果显示,纯化后的MPB70蛋白分子质量大小为20 ku,浓度为0.5 mg/mL。两株单克隆抗体的亲和常数分别为9.95×109和9.53×108;抗体效价分别为1∶102 400和1∶12 800;抗体亚类分别为IgG2b和IgG1,轻链类型均为κ型;纯度>90%;浓度分别为3.0和2.2 mg/mL;且具有良好的反应特性。以上研究结果表明,本试验成功制备了抗MPB70蛋白单克隆抗体,可为牛结核病病原和抗体检测技术研究奠定基础。 相似文献
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BAI Yu HU Jing-yan XU Yong-peng HE Jie JIN Jun-jie LI Pei-de LIU Su-zhen 《中国畜牧兽医》2017,44(10):3100-3105
In order to establish a sensitive,specific and rapid method for the detection of estradiol (E2) residues, an indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (icELISA) based on monoclonal antibody (MAb) for E2 was developed. BALB/c mice were immunized by E2-BSA and cell fusion technology was employed to screen hybridoma cell lines. One hybridoma cell line (3H3) was isolated, which produced monoclonal antibody that could binding E2. Under the optimized conditions, the icELISA based on 3H3 for E2 showed a half maximum inhibition concentration (IC50) values of 1.636 ng/mL and detection ranges of 0.202 to 13.281 ng/mL with cross-reactivities for estriol and ethinyloestradiol of 0.31% and 0.25%, respectively, and negligible cross-reactivities with other E2 analogs including estrone, estradiol valerate, estradiol benzoate, quinestrol, diethylstilbestrol and nonylphenol. The results demonstrated that the developed method could meet the requirements of high sensitivity detection of E2 residue in food samples. 相似文献