牦牛源正呼肠孤病毒2型的检测和分离鉴定     

吕珽  陈虹吟  汤承  岳华 《畜牧兽医学报》2021,52(8):2361-2368

旨在调查川西北牦牛哺乳动物正呼肠孤病毒（MRV）的感染情况并分离病毒。采用RT-PCR方法，对采自川西北15个牧场的72份牦牛腹泻粪便样本和其中5个牧场的15份腹泻牦牛血清样本进行MRV检测，阳性样本进一步用分型PCR确定其血清型。结果显示，粪便样本中MRV检出率为20.83%（15/72），血清2型的比例为60%（9/15）；血清样本中MRV检出率为40%（6/15），血清2型的比例为83.33%（5/6）；未检测到其他血清型。成功地从腹泻粪便中分离到1株MRV血清2型毒株（TCID₅₀为4×10^-8.56·mL^-1），并获得长度为23 587 bp的分离株全基因组，该分离株与中国猪源毒株的遗传关系最近；与GenBank中所有的MRV S1基因相比，该分离株有4个独特的氨基酸突变。本研究从牦牛中检测到MRV，并分离到1株牛源MRV血清2型毒株，为进一步研究MRV血清2型生物学特性奠定了基础。  相似文献   

规模化猪场大肠杆菌的耐药性监测及血清流行病学调查   总被引：40，自引：0，他引：40  

刘梦元  吴斌  刘建杰  彭贵青  刘国平  陈焕春 《中国兽医学报》2004,24(1):16-18

为了调查猪致病性大肠杆菌的耐药性及流行血清型 ,从湖北、河南、江西、安徽、浙江等省的 33个猪场采集 32 1份仔猪黄、白痢病料进行细菌的分离和生化鉴定 ,结果分离到大肠杆菌 30 2株 ,其中致病性大肠杆菌 2 76株。对 112株致病性大肠杆菌进行了 15种抗生素敏感性试验 ,发现分离菌株对 15种药物均有不同程度的耐药性 :青霉素 G对其完全没有抑制作用 ;先锋霉素 抑制作用最强 (97.3% ) ,其次为呋喃妥因 (78.6 % )、痢特灵 (71.4 % )、环丙沙星(6 8.8% )、诺氟沙星 (6 5 .1% )。 112株菌中 ,有 4 7种耐药谱型 ,多数为 6耐以上的菌株 (80株 ) ,占供试菌株的 71.4 %。应用微量平板凝集试验 ,对分离的 2 76株致病菌进行了血清型鉴定 ,鉴定共有 72种血清型 ,其中优势血清型 10种 ,占能定型分离致病菌株的 5 3.7%。  相似文献   

禽腺病毒血清4型贵州株全基因序列分析     

尹德晶  张云丹  岳筠  李乔斌  何玲  李涛  王开功  程振涛 《中国畜牧兽医》2021,(1)

为了解禽腺病毒血清4型(FAdV-4)地方流行毒株的分子进化情况,基于实验室分离的2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株,分别对2株FAdV-4毒株进行PCR分段扩增,扩增产物克隆至载体,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后筛选出重组质粒进行测序,将测序结果依次拼接得到病毒的全基因组,获得FAdV-4贵州株的全基因序列,并对其进行序列和遗传进化分析。结果显示,通过PCR分段扩增成功获得了2株FAdV-4贵州株(GZ-BJ株和GZ-QL株)的全基因序列,长度分别为43352、43723 bp,FAdV-4 GZ-BJ株全基因序列长度比FAdV-4 GZ-QL株短371 bp,少6个ORF(22K、putative 9.1 ku、u-exon、ORF17、ORF28、ORF42),二者的氨基酸同源性为57.1%。2株FAdV-4贵州株同国内外不同地区FAdV-4毒株核苷酸同源性在88.7%~100%,与FAdV-4经典毒株ON1比对,2株FAdV-4贵州株和国内FAdV-4分离株均缺失ORF19、ORF27、ORF30。系统进化树分析显示,2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株仍属于Ⅰ群C种FAdV。研究结果表明,2株贵州株FAdV-4 GZ-BJ株和FAdV-4 GZ-QL株较国内外FAdV-4毒株均存在进化与突变,且FAdV-4 GZ-BJ株变化较大,但尚未改变其血清型,这为探索FAdV-4致病机理的分子机制研究提供依据。  相似文献   

云南和广东省流行性出血病病毒血清6型毒株(EHDV-6)的分离与遗传特性     

李占鸿  杨振兴  林栩慧  吕敏娜  肖雷  寇美玲  廖德芳  朱建波  杨恒  李华春 《华南农业大学学报》2020,41(4):8-15

【目的】分离流行于我国南方地区的流行性出血病病毒血清6型毒株(EHDV-6),掌握分离毒株的遗传特征。【方法】对设立于我国云南和广东省的哨兵动物定期采血,进行EHDV感染情况监测与病毒分离培养。通过血清中和试验确定分离EHDV的血清型,采用一步法RT-PCR对分离的EHDV-6毒株基因节段2、3、6(Seg-2、-3、-6)进行扩增与序列分析。【结果】2012—2016年,从云南省和广东省的哨兵动物中分离出25株EHDV毒株,其中,11株为EHDV-6型。中国EHDV-6型毒株的Seg-2、-3与-6均属Eastern型,核酸序列相似性分别为99.1%、98.9%和98.8%,在系统发生树上分别聚为1个独立的中国支系。在日本引起疫病暴发的EHDV-6型毒株与中国EHDV-6型毒株具有最近的亲缘关系。日本EHDV-6型毒株在系统发生树上处于中国支系内部,Seg-2、Seg-3与中国毒株的核酸序列相似性分别为98.5%和93.9%。【结论】云南和广东省流行的EHDV-6型毒株核酸与氨基酸序列高度相似;日本和中国的EHDV-6型毒株具有最近的亲缘关系,提示中日之间可能存在EHDV的流动。研究结果为进一步开展我国EHDV-6型毒株流行病学分析、致病性、病原学诊断与疫苗制备等研究提供了基础。  相似文献   

禽腺病毒血清4型感染鸡组织中NLRP3基因转录水平的实时荧光定量PCR分析     

郭慧芳  李宁  王白玉  乔麒龙  黄庆  李永涛  王增  赵军 《畜牧兽医学报》2021,52(1):195-201

旨在分析禽腺病毒血清4型（FAdV-4）感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平,本研究设计鸡NLRP3特异性引物,利用RT-PCR扩增NLRP3基因180 bp片段并克隆至pMD-18T载体,制备重组质粒pMD-18T-NLRP3。以pMD-18T-NLRP3质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。通过反应条件优化,成功建立了检测NLRP3基因的实时荧光定量PCR方法,并利用该方法对致病性FAdV-4感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平进行了分析。结果显示,所设计的NLRP3引物可特异性扩增鸡NLRP3基因,建立的实时荧光定量PCR对鸡NLRP3标准质粒的扩增曲线良好,标准品的拷贝数与Cq值呈现良好的线性关系。与对照组相比,NLRP3分子在FAdV-4感染鸡肝和脾中的转录水平极显著高于对照组（P<0.001）,在盲肠扁桃体和法氏囊的表达显著高于对照组（P<0.01）。本研究所建立的鸡NLRP3基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR可以检测FAdV-4感染鸡不同组织中NLRP3的转录水平;致病性FAdV-4感染所造成的组织炎症损伤与NLRP3分子密切相关。  相似文献   

猪胸膜肺炎放线杆菌的分离与鉴定     

刘霞  刁有祥  赵乐  孟凡磊  王辉  王妮  刘方娜  禚宝山 《家畜生态》2006,(3)

从山东省泰安市采集的38份具有严重呼吸道症状的病死猪的肺脏、气管和扁桃体进行胸膜肺炎放线杆菌(APP)的分离鉴定,其中14株菌株表现出形态多样性、革兰氏染色阴性等特点,小鼠试验显示有较强的毒力,PCR电泳结果得到了650bp的预期目的片段。系统的生物学鉴定表明,这14株分离菌为胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus Pleuropneaumoniae,APP)。对确诊的14株APP采用凝集试验进行血清型检测。结果从山东省泰安市分离到14株2个血清型的胸膜肺炎放线杆菌,其中,血清7型8株、血清5型6株,血清7型、5型为绝对优势血清型。  相似文献   

猪链球菌2型分泌性核酸酶A(SsnA)活性检测及其基因序列的克隆与测序分析     

张东  王楷宬  汤明  黄保续  范伟兴 《中国兽医学报》2007,27(6):922-926

对8株猪链球菌2型重庆分离株的核酸酶A全基因进行克隆测序,结果表明该基因长度为3 126 bp,与Gen-Bank发表的唯一的该基因的序列相比,核苷酸同源性高于98%,推导的氨基酸同源性高于94%。根据核酸酶A基因的测序结果建立扩增片段长度为301 bp的PCR检测方法,并用甲苯胺蓝DNA酶琼脂对猪链球菌分泌性核酸酶A的活性进行检测。检测了从病猪内脏分离的猪链球菌致病株35株,33株核酸酶A基因PCR检测阳性(阳性比例为94.3%),其中有24株分泌活性检测为阳性(阳性比例68.6%);正常猪扁桃体分离株14株,PCR检测为阳性的10株(阳性比例71.4%),其中有核酸酶A分泌活性为8株(阳性比例57.1%),检测菌株中有2型猪链球菌44株,38株扩增出核酸酶A基因的片段PCR检测阳性并且分泌活性为阳性的有32株,猪链球菌1型、7型、9型、13型、1/2型各1株,均能扩增出核酸酶A基因的片段,但只有13型猪链球菌有核酸酶A分泌活性。对猪链球菌在不同生长时期核酸酶活性的检测显示,猪链球菌在培养4、8、16、32、48 h均有核酸酶A的分泌,并且C a2 和M g2 为分泌性核酸酶A的活性必需因子。  相似文献   

A型肉毒毒素Hc基因的原核表达、纯化及单抗的制备     

李秀山  刘选明  赵李剑  高姗  王景林 《动物医学进展》2007,28(2):8-11

在大肠埃希茵中高效表达的重组A型肉毒毒素保护性抗原,是以包涵体形式存在.溶解后的包涵体溶液经过处理,用镍柱亲和层析法纯化,得到纯度约为90%的融合蛋白.利用纯化的重组抗原BoNTa免疫Balb/c小鼠,获得分泌抗BoNTa特异性的3株杂交瘤细胞株2A2、4F7和2A8,其单抗鉴定均为IgG1亚型,滴度达到1:105.高纯度和活性单抗的获得为毒素检测试剂盒的研究奠定了基础.  相似文献   

Nucleotide sequence homology to bovine viral diarrhea virus 2 (BVDV 2) in the 5′ untranslated region of BVDVs from cattle with mucosal disease or persistent infection in Japan     

M. Nagai  M. Sato  H. Nagano  H. Pang  X. Kong  T. Murakami  T. Ozawa  H. Akashi 《Veterinary microbiology》1998,60(2-4):271-276

Cytopathogenic and non-cytopathogenic bovine viral diarrhea viruses (BVDVs) were isolated from cattle with mucosal disease or persistent infection in Japan. These isolates were compared for antigenic properties by cross-neutralization tests with Japanese reference strains of BVDV belonging to classical type 1. Significantly low cross-reactivity to reference strains was noted, indicating the viruses to possibly represent a new serotype in Japan. Thus, to determine the genotype of the isolates, nucleotide sequences of the 5′ untranslated region were determined and compared with those of previously reported BVDV 1 and 2. The isolates were clearly shown to belong to BVDV 2, not to BVDV 1.  相似文献   

Comparison of sampling and isolation procedures for recovery of Yersinia enterocolitica serotype O:3 from the oral cavity of slaughter pigs   总被引：2，自引：0，他引：2  

T Nesbakken 《Acta veterinaria Scandinavica》1985,26(1):127-135

Yersinia enterocolitica serotype 0:3/biotype 4 was isolated from the oral cavity of altogether 32 (68.1 %) of 47 freshly eviscerated slaughter pigs. Most efficient recovery was achieved by cultivation of tissue samples from both tongue and tonsils of the same individual. The isolation rate so obtained was significantly higher than that obtained by separate examination of either tonsil swabs or tongue swabs. However, the isolation frequency achieved by combined swabbing of the 2 sites was not significantly different. In general, tonsils were more productive for the recovery of 0:3 strains than were tongues, and tissue samples yielded higher isolation rates than did swabs. Three-week cold enrichment in a low selective medium proved essential for optimal recovery. However, the highest number of isolates was obtained using a combination of methods, including direct plating and selective enrichment in a modified Rappaport broth in addition to cold enrichment.  相似文献