表达大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白工程菌株的免疫原性研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

许崇波  卫广森  王文成  王卓 《中国预防兽医学报》2003,25(1):9-12

已构建的能表达大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白的工程菌株BL21（DE3）（pXKST3LT5)及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从IPTG诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原，免疫小鼠，结果免疫小鼠至少能抵抗2MLD的大肠杆菌强毒株C83902（K88ac,ST^ ,L^ )的攻击，用提取的包涵体免疫家兔后，采集的血清能够中和天然ST1的毒性，这表明构建的工程菌株BL21（DE3）（pXKST3LT5)可以作为预防幼畜大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的候选株。  相似文献   

大肠杆菌耐热肠毒素b及其致动物腹泻的机理     

尤建嵩牛冬燕  崔乃忠孙永欣金礼吉  徐永平 《中国兽医科技》2006,36(10):847-851

介绍了大肠杆菌耐热肠毒素b（STb）的编码基因、理化性质、免疫学特征、分泌特征、毒性相关氨基酸残基、空间结构、膜受体以及STb致动物腹泻的机理。认为STb是一种十分重要的肠毒素，应进一步加强对STb及其致腹泻机理的研究。  相似文献   

利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联技术构建产肠毒素大肠杆菌LT敲除菌株     

檀克勤  马现永  崔艺燕  田志梅  邓盾 《中国畜牧兽医》2020,47(3):666-675

本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）K88的热不稳定性肠毒素（heat-labile toxin，LT）基因进行无痕敲除并获得K88 LT^-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列，并构建包含LT边界、氯霉素筛选标记、sgRNA和LT同源臂的供体片段；将供体片段转化至ETEC K88，同时分别利用λ-Red同源重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统，对LT基因进行敲除；通过PCR验证获得了K88 LT^-缺陷菌株，并通过试验测定了敲除菌株的溶血能力和生长曲线。结果显示，λ-Red同源重组系统可成功地将LT基因替换为相应的供体片段，CRISPR/Cas9基因编辑系统可高效地对筛选标记进行删除，最终通过λ-Red和CRISPR/Cas9结合的基因编辑系统可成功对ETEC K88的LT基因进行无痕敲除。体外试验结果表明，K88 LT^-缺陷菌株的溶血能力丧失，并且生长速度比野生型菌株减缓，LT可能和ETEC K88的致病能力和生长性能有关。表明λ-Red和CRISPR/Cas9级联的基因敲除方法可用于LT毒素基因及其他一些大肠杆菌基因的敲除。K88 LT^-缺陷菌株的构建为下一步研究LT毒素的致病机制奠定基础。  相似文献   

用葡萄球菌甲蛋白协同凝集鉴别猪痢疾密螺旋体的研究     

金梅林  王禹志 《华中农业大学学报》1994,13(3):274-277

应用猪痢疾蜜螺旋体（Ｔ．Ｈ．）免疫血清结合葡萄球菌甲蛋白（ＳＰＡ）与Ｈ１０，２－５，Ｘ２３，Ｃ１７等Ｔ．Ｈ．菌株进行协同凝集试验，均出现明显凝集反应。而免疫血清结合不含ＳＰＡ的菌株，无特定病原（ＳＰＦ）血清结合含ＳＰＡ的菌株均无凝集反应。免疫血清结合ＳＰＡ与７种肠道菌均无凝集反应。免疫血清用量以０．２ｍｌ为合适。最低用菌量为３０倍稀释，即每个视野Ｔ．Ｈ．约４０个菌体。  相似文献   

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因的原核表达     

梁望旺  周丹娜  刘泽文  伍锐  杨克礼  段正赢  邓均华  徐涤平 《湖北农业科学》2009,48(11)

大肠杆菌(Escherichia coli)不耐热肠毒素B亚单位(LTB)不仅是重要的黏膜免疫原,而且作为佐剂在黏膜免疫中起着重要的作用.试验采用PCR方法扩增了肠毒素性大肠杆菌的LTB基因,并将其克隆到pGEX-KG原核表达栽体上,构建了重组质粒pKG-LTB,经酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,克隆的LTB基因与谷胱甘肽转移酶(GST)基因获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-LTB分子量约为35kDa,并具有免疫反应活性.这为进一步研究LTB蛋白黏膜免疫原性和黏膜佐剂的作用奠定了基础.  相似文献   

重组大肠杆菌不耐热肠毒素的表达及对小鼠胚胎稳定性的影响     

韩冬梅  仲飞  李秀锦  王淼  李文艳  张峰  潘红丽  谢南  王璐 《兽医大学学报》2012,(10):1478-1483

为研究大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）对小鼠胚胎稳定性的影响,运用大肠杆菌表达系统制备了具有生物活性的重组大肠杆菌LT,用重组LT通过腹腔注射处理妊娠小鼠,分析了LT对小鼠胚胎稳定性的影响。首先采用PCR方法从产毒大肠杆菌菌株44815基因组中扩增LT的A、B亚基基因,将其插入到pET-20b（＋）原核表达载体pelB信号肽的下游,分别构建成LTA和LTB分泌型表达载体;将载体分别转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS,在IPTG的诱导下进行表达,利用Ni-NTA琼脂糖凝胶从细菌周质释放液中提取和纯化重组LTA和LTB蛋白;利用细胞毒性试验检测重组蛋白的生物活性。然后用制备的重组LT注射妊娠6d的小鼠,连续注射3d后,统计小鼠的胚胎存活率。同时用ELISA方法检测小鼠血清中与胚胎稳定性密切相关的Th1型细胞因子（IFN-γ、IL-2）和Th2型细胞因子（IL-4、IL-10）及IL-β的表达水平。结果表明,采用分泌性表达策略实现了重组LT在大肠杆菌中的高效分泌表达,LTA和LTB的表达量分别达68、62mg/L。表达的重组LT具有明显的细胞毒性作用;用LT处理妊娠小鼠,胚胎的存活率为32%,明显低于对照组;小鼠血清中Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的含量明显高于对照组（P〈0.01）,分别为对照组的2、3倍。同时细胞因子IL-1β为对照组的2倍（P〈0.01）,而稳定胚胎发育的Th2型细胞因子IL-4、IL-10没有明显变化（P〉0.05）。据此推测,LT可能与大肠杆菌性肠炎引起妊娠家畜流产有关,LT对胚胎稳定性的影响除与LT的直接毒性有关外,可能还与LT介导的免疫调节异常有关。  相似文献   

SPA的实验室制备及标记技术   总被引：3，自引：0，他引：3  

赵培娥  刘冠章 《山西农业大学学报(自然科学版)》1998,18(1):70-71

ＳＰＡ具有与ＩｇＧＦＣ段非特异性结合的生物学特性，这一特性使其在免疫学研究中有重要的作用，根据应用目的不同，ＳＰＡ制剂分为三类：菌体试剂、ＩｇＧ－ＳＰＡ、可溶性纯化ＳＰＡ。本文将介绍这三种试剂的实验室制备方法及ＳＰＡ的ＦＩＴＣ、ＨＲＰ、１２５Ｉ的标记技术。  相似文献   

Detection of the staphylococcal enterotoxin D-like gene from staphylococcal food poisoning isolates over the last two decades in Tokyo     

Yasunori SUZUKI  Makiko KOBAYASHI  Shigeru MATSUSHITA  Satomi UEHARA  Rei KATO  Yusuke SATO’O  Hisaya K. ONO  Kenji SADAMASU  Akemi KAI  Yoichi KAMATA 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2015,77(8):905-911

  相似文献   

表达产肠毒素性大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒的免疫学特性研究     

包少文  庄佩佩  石娟  杨佳丽  曾瑾  李武  刘晓明  邓光存 《中国预防兽医学报》2014,36(12)

为研究表达产肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)耐热性肠毒素STa与粘附素K99融合蛋白重组腺病毒rAd.STa-K99的免疫学特性,本实验将rAd.STa-K99经肌肉注射免疫小鼠,采用ELISA法分别检测了特异性IgG、SIgA、脾脏淋巴细胞增殖活性水平及CD4+、CD8+T淋巴细胞分型比值;并通过攻毒保护试验对其免疫效果进行评价.结果表明,免疫后小鼠特异性IgG、SIgA及脾脏淋巴细胞增殖活性水平显著升高;CD4+/CD8+值显著增大;动物攻毒保护率达到70％.结果表明rAd.STa-K99可以刺激小鼠机体产生较高水平的体液免疫、特异性细胞免疫和肠道粘膜免疫反应,并对小鼠提供有效保护.本实验为研制预防由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒疫苗奠定了基础.  相似文献   

空肠弯杆菌研究现状     

陈晓莹  徐自忠  高洪  花群义  周晓黎 《勤云标准版测试》2005,(3)

空肠弯杆菌是一种人兽共同感染的病原菌,也是导致腹泻最常见的病菌,主要症状是发热和急性肠炎。主要从病原的生物学特征、肠毒素的研究、人畜带菌率及流行病学的研究现状进行综合讨论。  相似文献