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骨形态发生蛋白15（bone morphogenetic protein 15,BMP15）基因突变对绵羊排卵率、产仔数以及繁殖力有很大影响,本研究旨在建立快速可视化检测BMP15基因B2突变的技术。将改良的扩增阻滞突变系统（amplification refractory mutation system,ARMS）与核酸染料SYBR Green Ⅰ结合,针对BMP15基因B2突变设计ARMS特异性引物,使引物下游3'端的最后一个碱基为A,并在下游引物3'端的第3位碱基处设计额外的错配,以提高引物的特异性;经ARMS PCR扩增后,向产物中加入SYBR Green Ⅰ,通过肉眼观察PCR管内的颜色变化来检测BMP15基因的B2突变。经测序发现所采集的样本均为野生型,因此,利用重叠延伸PCR构建BMP15基因B2突变型模板,测序结果显示BMP15基因B2突变型模板构建成功。ARMS PCR结果显示,ARMS特异性引物能够只扩增突变型模板,而不会扩增野生型模板,且扩增效果良好。ARMS PCR扩增后加入SYBR Green Ⅰ发现已知野生型模板与阴性对照一致,呈SYBR Green Ⅰ原始颜色橙黄色,而已知突变型模板呈亮绿色,且色差明显,肉眼可辨。用建立的可视化检测BMP15基因B2突变的技术检测50个小尾寒羊基因组DNA （随机向其中20个样本中加入构建的BMP15基因B2突变型模板）,将可视化检测的突变型样本编号与混合样本时记录的编号对比,结果表明该技术能够准确检测绵羊BMP15基因的B2突变,且准确率高达100%。将构建的BMP15基因B2突变型的模板进行梯度稀释,对本试验可视化检测体系的灵敏度进行检测,发现ARMS可视化检测技术的灵敏度达到0.006 ng/μL。因此,本研究建立的技术能够可视化地检测绵羊BMP15基因B2突变,且准确率高,有望为高繁殖力绵羊的选育提供技术支持。 相似文献
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葡萄霜霉病是葡萄最重要的病害之一,目前防治霜霉病主要依赖化学药剂,其中羧酸酰胺类杀菌剂是一类重要药剂,然而病原菌抗药性对其防效有重要影响。2015年本实验室首次在中国检测到抗烯酰吗啉的葡萄霜霉菌,并开发了Tetra-Primer ARMS PCR快速检测法来检测抗药性。本研究利用此技术对采自山西省清徐县60株葡萄霜霉菌进行了烯酰吗啉抗性检测,结果显示其中1株具有抗药性,其他59株均为敏感菌株,说明该地区霜霉菌已经开始产生烯酰吗啉抗性,但尚未大范围扩展,需要进行持续监测以指导杀菌剂的使用,这也是首次报道山西省葡萄霜霉菌存在烯酰吗啉抗性菌株。 相似文献
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利用美国OmniVision公司的OV7620、Samsung公司的ARMS3C2410处理器构建种蛋图像的在线采集系统。通过S3C2410的GPIO编程实现SCCB总线协议,OV7620采用SCCB作为控制总线,设计人员可以很方便地对芯片中的控制寄存器进行访问编程操作以控制采集图像的格式和质量,并在S3C2410的实时控制下将种蛋图像数据直接保存到系统指定的数据存储位置,完全能够完成对种蛋图像的在线采集,实现了在无精蛋识别系统中的应用。 相似文献
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Polymorphism of GDF9 and BMPR1B genes and their association with litter size in Markhoz goats 
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下载免费PDF全文 The main objective of this study was to investigate the polymorphism of GDF9 and BMPR1B genes and their relationship with litter size in Markhoz goats. The polymorphism of GDF9 and BMPR1B genes as well‐documented genes regarding fecundity in sheep and goat was investigated using RFLP‐PCR and a tetra‐primer amplification refractory mutation system‐PCR (T‐ARMS‐PCR) in Markhoz goats. The 164 blood samples were collected from the raised goats in Sanandaj Markhoz goat Performance Testing Station. The DNA extraction was carried out by salting‐out procedure, and then, PCR was performed using four and two pairs of primers to detect polymorphism in GDF9 and BMPR1B genes, respectively. To disclose GDF9 loci polymorphism, PCR products were digested with SspI (G3288A), PvuII (G423A), MvaI (A959C) and MspI (G1189A) restriction enzymes. The results showed that these mutations are available in tested animals. Parity had no significant effect on litter size. Also, the effects of different genotypes of GDF9 and BMPR1B had no significant effect on litter size. Further studies with a high number of animals with minimum relatedness for testing the association of these SNPs and others in the fecundity genes with reproductive traits may be worthwhile. 相似文献
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