| 甘蔗宿根矮化病菌 ＰＣＲ检测体系的优化与应用 |
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| 引用本文： | 李文凤,卢文洁,黄应昆,王明强,王晓燕,罗志明.甘蔗宿根矮化病菌 ＰＣＲ检测体系的优化与应用[J].云南农业大学学报,2011,26(5):598-602. |
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| 作者姓名： | 李文凤 卢文洁 黄应昆 王明强 王晓燕 罗志明 |
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| 作者单位： | 云南省农业科学院甘蔗研究所，云南省甘蔗遗传改良重点实验室，云南 开远 661600 |
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| 基金项目： | 现代农业产业技术体系建设专项资金（CARS-20-2-2）;公益性行业（农业）科研专项资金（ny-hyzx07-019）;云南省人才培养项目（2008PY087）. |
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| 摘 要： | 为建立能快速灵敏检测甘蔗宿根矮化病 （ｒａｔｏｏｎｓｔｕｎｉｎｇｄｉｓｅａｓｅ，ＲＳＤ）的 ＰＣＲ检测方法。本文通过改进模板 ＤＮＡ的制备方法，在 ＰＣＲ基本程序的基础上，以甘蔗宿根矮化病菌 （Ｌｅｉｆｓｏｎｉａｘｙｌｉｓｕｂｓｐ．ｘｙｌｉ，Ｌｘｘ）１６Ｓ-２３ＳｒＤＮＡ基因间隔区特异性引物，调整 ＰＣＲ扩增反应体系各组分的浓度、反应的退火温度、循环参数等主要因子，优化 ＰＣＲ反应体系。此检测体系能从感染 ＲＳＤ的样品中扩增出大小为４３８ｂｐ的特异性片段，而阴性对照和未感染样品则未扩增出任何片断；未优化仅从稀释３０倍的蔗汁总 ＤＮＡ中扩增出 ＲＳＤ的特异性片段，优化后可以从稀释３０００倍的蔗汁总 ＤＮＡ中扩增出 ＲＳＤ的特异性片段。对３１份田间采集样品检测，未优化的阳性检出率为 ３２.２６％；优化后阳性检出率 ７４.１９％，与 Ｉ-ＥＬＩＳＡ检测结果一致。应用此检测方法可稳定、快速地检测出蔗株是否感染 ＲＳＤ，且检测效率高，适合于田间大批量样品快速检测。
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| 关 键 词： | 甘蔗宿根矮化病菌 PCR检测 16S-23S rDNA 间接酶联免疫吸附法 |
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