| 非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立 |
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| 引用本文： | 石正发,马源,袁洪,王由森,朱晓霞,车亮,李甲,羊倩倩,孙晓林.非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立[J].中国预防兽医学报,2023(5):488-493+547. |
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| 作者姓名： | 石正发 马源 袁洪 王由森 朱晓霞 车亮 李甲 羊倩倩 孙晓林 |
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| 作者单位： | 1. 甘肃农业大学动物医学院;2. 中牧实业股份有限公司兰州生物药厂 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(32160843)； |
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| 摘 要： | 为建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的阻断ELISA方法，本研究对ASFV p72蛋白进行原核表达并纯化，将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到1株稳定分泌p72蛋白的杂交瘤细胞株3F8。以纯化的p72蛋白作为包被抗原，辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆抗体(MAb)作为检测抗体，采用方正滴定法对反应条件优化后初步建立了检测ASFV的阻断ELISA方法。利用该方法检测133份ASFV阳性血清和73份ASFV阴性血清，通过ROC曲线分析确定临界值。结果显示，该方法的临界值为25.62%时，ROC的曲线面积最大，为0.9989，诊断敏感性和特异性分别为98.63%和98.5%。利用该方法检测ASFV、O型口蹄疫病毒(FMDV)、A型FMDV、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒阳性血清，结果显示，除ASFV阳性血清外，其他阳性血清均为阴性，表明特异性强；利用该方法和商品化试剂盒对2倍倍比稀释(1∶4～1∶2 048)的两种ASFV灭活阳性血清(P1、P2)检测，结果显示该方法检测结果与商品化试剂盒基本一致，敏感性高。利用该方法对3份灭活的...
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 p72蛋白 单克隆抗体 阻断ELISA |
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