| 沙门菌PhoN蛋白单克隆抗体及其免疫磁珠的制备 |
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| 引用本文： | 孟闯,高杨,刘钧,徐双媛,丁睿清,康喜龙,潘志明,焦新安.沙门菌PhoN蛋白单克隆抗体及其免疫磁珠的制备[J].中国预防兽医学报,2023(3):287-294. |
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| 作者姓名： | 孟闯 高杨 刘钧 徐双媛 丁睿清 康喜龙 潘志明 焦新安 |
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| 作者单位： | 1. 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室;2. 扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;3. 扬州大学农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目(2022YFC2604203)；;国家自然科学基金项目(32002295)； |
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| 摘 要： | 为制备针对沙门菌Pho N蛋白的单克隆抗体(MAb)，并以其制备沙门菌的免疫磁珠，本研究构建了重组原核表达质粒p Cold I-pho N和p GEX-6P-1-pho N，利用大肠杆菌系统表达并通过亲和层析纯化了鼠伤寒沙门菌重组蛋白His-Pho N和GST-Pho N，分别作为免疫原和筛选抗原，利用B淋巴细胞杂交瘤技术，经间接ELISA方法筛选获得5株能稳定分泌Pho N蛋白MAb的杂交瘤细胞株，分别为8H2、11E5、4B2、8F2、3B2。采用亚类鉴定试剂盒、间接ELISA和western blot方法分别鉴定各MAb的亚型、效价及特异性结合沙门菌Pho N蛋白的能力，结果显示，5株MAb的亚型均为Ig G2a，测定其效价达1∶4 096 000以上，均能特异性结合His-PhoN和GST-Pho N，而不与His-OmpC、His-OmpF蛋白反应，表明MAb特异性较好。选取4B2 MAb进一步分析其对不同血清型沙门菌和非沙门菌的特异性，western blot结果显示4B2 MAb仅特异性识别不同血清型沙门菌，而不与大肠杆菌、志贺杆菌、空肠弯曲菌和单核细胞增生李斯特菌反应；...
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| 关 键 词： | 沙门菌 Pho N蛋白 单克隆抗体 特异性 免疫磁珠 |
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