| 出血性大肠杆菌O157eae-stx1/2B融合基因的构建和表达 |
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| 引用本文： | 陈萍,刘军,祝令伟,孙洋,郭学军,齐翀,冯书章,郑明光.出血性大肠杆菌O157eae-stx1/2B融合基因的构建和表达[J].中国兽医学报,2005,25(3):270-272. |
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| 作者姓名： | 陈萍 刘军 祝令伟 孙洋 郭学军 齐翀 冯书章 郑明光 |
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| 作者单位： | 解放军军事医学科学院,军事兽医研究所,吉林,长春,130062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30270985) |
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| 摘 要： | 构建表达eae和stx1／2B的融合基因，克隆eae基因的C端280个氨基酸残基(Int280)基因部分，以正确地阅读框定向插入到含有stx1／2B融合基因的质粒，构建重组质粒，将其转化于BL21(DE3)，用IPTG进行诱导表达，经SDS—PAGE电泳检测，该融合蛋白获得了高效表达。薄层扫描分析表明：目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的50．67％。由于该融合蛋白由eae、stx1B、stx2B等三部分抗原组成，可刺激机体产生针对紧密素和StxB的抗体，在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌O157 融合基因 构建 出血性 融合蛋白 氨基酸残基 总蛋白含量 单克隆抗体 亚单位疫苗 重组质粒 诱导表达 IPTG 电泳检测 PAGE 高效表达 目的蛋白 薄层扫描 e基因 SDS 表达量 分析表 C端 |
| 文章编号： | 1005-4545(2005)03-0270-03 |
| 修稿时间： | 2004年12月22 |
Construction and Expression of eae-stx1/2B Fusion Gene from EHEC O157:H7 |
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| CHEN Ping,LIU Jun,ZHU Ling-wei,SUN Yang,GUO Xue-jun,QI Chong,FENG Shu-zhang,ZHENG Ming-guang.Construction and Expression of eae-stx1/2B Fusion Gene from EHEC O157:H7[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2005,25(3):270-272. |
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| Authors: | CHEN Ping LIU Jun ZHU Ling-wei SUN Yang GUO Xue-jun QI Chong FENG Shu-zhang ZHENG Ming-guang |
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| Institution: | CHEN Ping,LIU Jun,ZHU Ling-wei,SUN Yang,GUO Xue-jun,QI Chong,FENG Shu-zhang*,ZHENG Ming-guang |
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| Abstract: | To construct eae-stx1/2B fusion gene,the DNA fragment encoding C-terminal 280 amino acids(Int280) of intimin was fused in frame with the stx1/2B gene.We created a recombinant plasmid by insertion of eae-stx1B-stx2B fusion gene into pET-28a,the recombinant plasmid was transformed into BL21(DE_3),and the fusion protein was expressed in E.coli BL21 efficiently with IPTG.Analysis of SDS-PAGE and thin layer scanning results showed that amount of expressed fusion protein was 50.67% in total of bacteria protein.Because the fusion protein was consisted of eae Int280,stx1B and stx2B antigens,it can evoke immune responses against Int280,Stx1B and Stx2B.The eae-stx1/2B fusion protein expressed in E.coli could offer an important ingredient that should be consider in construction of recombinant EHEC O157 vaccine or preparation of experimental material for the monoclonal antibody. |
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