| 基于猪流行性腹泻病毒GⅡb亚型重组荧光病毒中和抗体检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 林莉莉,张梦迪,朱琳琳,马海龙,孙琪,何启盖,张梦佳,李文涛.基于猪流行性腹泻病毒GⅡb亚型重组荧光病毒中和抗体检测方法的建立[J].畜牧兽医学报,2024(4):1649-1660. |
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| 作者姓名： | 林莉莉 张梦迪 朱琳琳 马海龙 孙琪 何启盖 张梦佳 李文涛 |
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| 作者单位： | 1. 华中农业大学动物医学院;2. 农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室;3. 农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室;4. 湖北洪山实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(32272990)；;国家现代农业产业技术体系(CARS-35)； |
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| 摘 要： | 2010年以来，猪流行性腹泻病毒(PEDV)GⅡ型变异毒株的出现，导致全世界范围内猪流行性腹泻(PED)的病死率显著增加。疫苗免疫是PED有效防控的重要策略之一，疫苗诱导的中和抗体水平是免疫效果评价和疫苗质量评估的重要指标。然而，在Vero-CCL81上开展的PEDV经典中和试验中所添加的胰酶会导致试验结果不稳定等问题。本研究拟在构建稳定表达绿色荧光蛋白的重组病毒基础上，建立一种能准确评估样品中和抗体的检测方法。本研究在pUC57载体上克隆插入GⅡb亚型PEDV-GDU株部分ORF1a和ORF1b基因片段与其他结构基因片段，并通过无缝克隆技术将ORF3基因替换为EGFP基因，构建辅助质粒pUC57-PEDV-GDU-dORF3-EGFP,通过RNA定向重组技术拯救重组荧光病毒rPEDV-GDU-dORF3-EGFP。进一步通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blot和病毒生长曲线测定等方法，比较重组荧光病毒和亲本病毒生物学特性。最终利用重组荧光工具病毒筛选在不添加胰酶的条件下仍能支持PEDV有效增殖的细胞系，并建立中和试验方法。结果表明，成功拯救重组荧光病毒rPEDV-GD...
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| 关 键 词： | 猪流行性腹泻病毒 反向遗传学 胰蛋白酶 报告病毒 中和试验 |
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