| 牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用 |
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| 引用本文： | 陈祥,牛中伟,徐正中,孟闯,孙林,黄金林,潘志明,焦新安.牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用[J].中国兽医寄生虫病,2010,18(4):54-59. |
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| 作者姓名： | 陈祥 牛中伟 徐正中 孟闯 孙林 黄金林 潘志明 焦新安 |
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| 作者单位： | 扬州大学,江苏省人兽共患病学重点实验室,扬州,225009 |
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| 基金项目： | "973"项目，国家科技重大专项，国家公益性行业科研专项 |
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| 摘 要： | 以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸—硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素（Pokeweed mitogen,PWM）刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11。将单抗5E11以40μg/mL浓度包被,与1∶3 000倍稀释的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清（13.8μg/mL）配对,以1∶6 000稀释的商品化酶标羊抗兔IgG为指示抗体,建立了BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法,该方法可以检出2.56 U/100μL（30.5 pg/100μL）的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ。以商品化试剂盒作为平行对照,将获得的奶牛临床检测血浆样品使用BoIFN-γ抗原捕获ELISA法进行检测,结果显示两种方法检测符合率达到83.9%。本研究建立的BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法可有效检测分泌性IFN-γ,为进一步开发BoIFN-γELISA检测试剂盒奠定了基础。
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| 关 键 词： | 牛 γ-干扰素 抗原捕获ELISA 单克隆抗体 |
DEVELOPMENT AND PRELIMINARY APPLICATION OF BOVINE INTERFERON-GAMMA CAPTURE ELISA |
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| CHEN Xiang,NIU Zhong-wei,XU Zheng-zhong,MENG Chuang,SUN Lin,HUANG Jin-lin,PAN Zhi-ming,JIAO Xin-an.DEVELOPMENT AND PRELIMINARY APPLICATION OF BOVINE INTERFERON-GAMMA CAPTURE ELISA[J].Chinese Journal of Veterinary Parasitology,2010,18(4):54-59. |
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| Authors: | CHEN Xiang NIU Zhong-wei XU Zheng-zhong MENG Chuang SUN Lin HUANG Jin-lin PAN Zhi-ming JIAO Xin-an |
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| Institution: | (Jiangsu Key Lab of Zoonosis,Yangzhou University,Yangzhou 225009,China) |
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| Abstract: | Monoclonal antibody（mAb） 5E11 against natural BoIFN-γ was chosen from 13 mouse anti-rHis-BoIFN-γ mAbs and purified using caprylic acid and ammonium sulfate.Polyclonal antibodies against rHis-bovine IFN-γ were prepared in rabbits with an ELISA titer of 1：200 000.The BoIFN-γ capture ELISA was developed and optimized to use mAb 5E11（40 μg/mL）,rabbit serum polyclonal antibodies（13.8μg/mL） and goat anti-rabbit IgG conjugate（1：6 000 diluted）.The results indicated that the sensitivity was 2.56 U/100μL（30.5 pg/100μL） to rHis-BoIFN-γ,8 U/100μL to rBac-BoIFN-γ and 1 U/100μL to natural BoIFN-γ,respectively.The coincidence between BoIFN-γ capture ELISA and commercially available Mycobacterium bovis IFN-γ Test Kit was 83.9% for detection of IFN-γ in the supernatants of the clinical cattle whole blood samples.The future study will focus on the development of BoIFN-γ antibody sandwich ELISA kit. |
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| Keywords: | Bovine IFN-γ antigen capture ELISA mAb |
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