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| 猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 | |
| 作者单位： | ;1.河北工程大学生命科学与食品工程学院;2.河北农业大学动物医学院河北省兽用生物制品工程技术研究中心;3.河北省涞水县畜牧水产局 |
| 摘 要： | 为了制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体,本实验以重组PEDV-N蛋白免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术,经过3～5次亚克隆与筛选,获得了4株分泌抗PEDV McAb的杂交瘤细胞,分别命名为4A7、6C1、5E10和6F7。4株杂交瘤细胞分泌的McAb均为IgM,其轻链均为κ链。ELISA、Western Blot和免疫荧光鉴定结果表明,4株单抗均与N蛋白及PEDV具有良好的结合活性。复苏冻存的4株杂交瘤细胞,连续传代培养30代,4株杂交瘤细胞能够持续稳定分泌抗体,细胞上清的ELISA抗体效价均在1∶800以上。4株细胞诱生的小鼠腹水抗体效价为1∶10~5～1∶10~6。将单克隆抗体(4A7)用于免疫组化试验和IPMA时,其能够特异地识别PEDV人工感染猪小肠组织和Vero细胞内的病毒。上述实验结果表明,制备的单克隆抗体可以用于PEDV抗原检测以及体内病毒的组织定位分析,并可为进一步研发PEDV抗原或抗体检测技术奠定基础。 |
| 关 键 词： | 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 杂交瘤细胞 单克隆抗体 |
Preparation and Identification of Monoclonal Antibodies against N Protein of Porcine Epidemic Diarrhea Virus |
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