| 非洲猪瘟病毒p72蛋白原核表达及单克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 陈桂娥,容芳,冯夏宁,孙荣航,马绍钊,郝文茜,叶子安,刘郁夫,李作生,陈瑞爱.非洲猪瘟病毒p72蛋白原核表达及单克隆抗体制备[J].中国畜牧兽医,2023(11):4646-4654. |
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| 作者姓名： | 陈桂娥 容芳 冯夏宁 孙荣航 马绍钊 郝文茜 叶子安 刘郁夫 李作生 陈瑞爱 |
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| 作者单位： | 1. 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心;2. 华南农业大学兽医学院;3. 肇庆学院生命科学学院;4. 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司;5. 肇庆大华农生物药品有限公司 |
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| 摘 要： | 【目的】表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)p72蛋白，并制备其单克隆抗体。【方法】构建原核表达载体pET-28b-p72,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行诱导表达和蛋白纯化；用纯化后的p72蛋白免疫BALB/c小鼠，将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合并制备单克隆抗体，通过间接ELISA法和亚克隆筛选出分泌抗体的阳性杂交瘤细胞；通过小鼠抗体类型检测试剂盒检测抗体类型；通过体内诱生法制备抗ASFV p72蛋白的单克隆抗体腹水，使用饱和硫酸铵沉淀法进行抗体纯化，通过间接ELISA法、间接免疫荧光试验(IFA)和Western blotting检测单克隆抗体效价和特异性。【结果】ASFV p72重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达，将纯化的p72蛋白制备单克隆抗体，获得4株分泌IgG1抗体的单克隆细胞株，分别命名为6F8、7C3、8H7和9G2。间接ELISA结果显示，6F8与8H7细胞株分泌的抗体效价均为1∶64 00,7C3与9G2细胞株的抗体效价均为1∶12 800,且4株细胞株分泌的抗体与p72蛋白反应结果均呈...
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 p72蛋白 原核表达 单克隆抗体 |
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