| 布鲁氏菌外膜蛋白16单克隆抗体的制备及初步应用 |
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| 引用本文： | 翟云逸,袁野,李俊玫,田路路,刁梓洋,李彬,陈家露,周栋,靳亚平,王爱华.布鲁氏菌外膜蛋白16单克隆抗体的制备及初步应用[J].畜牧兽医学报,2023(5):2083-2091. |
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| 作者姓名： | 翟云逸 袁野 李俊玫 田路路 刁梓洋 李彬 陈家露 周栋 靳亚平 王爱华 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物医学院农业农村部动物生物技术重点实验室 |
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| 基金项目： | “十三五”国家重点研发计划项目(2018YFD0500904)； |
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| 摘 要： | 旨在制备布鲁氏菌外膜蛋白16(OMP16)单克隆抗体，建立OMP16抗体竞争ELISA方法，为布病临床防控提供免疫血清学检测手段。本研究选取保守性高、免疫原性良好的布鲁氏菌OMP16,经原核表达获得携带GST或His标签的重组OMP16(rOMP16)。利用杂交瘤技术筛选可稳定分泌OMP16特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，经亚型鉴定、细胞核型分析和抗体交叉反应性试验分析单抗性质。制备小鼠腹水并纯化，方阵滴定法建立布鲁氏菌OMP16抗体竞争ELISA方法。结果表明，成功构建OMP16原核表达系统，经表达、纯化获得rGST-uOMP16和rHis-OMP16。筛选到1株遗传稳定的OMP16特异性杂交瘤细胞株，命名为B7;经鉴定，该抗体亚型为IgM-κ型，可识别目的蛋白，与标签蛋白无交叉反应。建立了布鲁氏菌OMP16抗体竞争ELISA方法，该方法与试管凝集试验检测结果相比总体符合率为90.53%,显示出良好的一致性。本研究有望为布鲁氏菌病的临床防控提供特异性高、敏感性好的免疫血清学检测方法。
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| 关 键 词： | 布鲁氏菌 外膜蛋白16 原核表达 单克隆抗体 竞争ELISA |
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