| 鸡γ-干扰素基因的克隆及其在原核和真核系统中的表达 |
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| 引用本文： | 戴建华,秦爱建,许金俊,刘岳龙,金文杰.鸡γ-干扰素基因的克隆及其在原核和真核系统中的表达[J].中国预防兽医学报,2003,25(4):249-253. |
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| 作者姓名： | 戴建华 秦爱建 许金俊 刘岳龙 金文杰 |
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| 作者单位： | 扬州大学,畜牧兽医学院动物医学系,江苏,扬州,225009 |
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| 摘 要： | 应用一步法逆转录—聚合酶链式反应 (RT_PCR)技术对罗曼蛋鸡γ_干扰素基因 (CHIFN_γ)进行了扩增。试验结果表明 ,在植物血凝素 (PHA) 5 0 0 μg/mL、细胞浓度 2 .5× 1 0 6/mL、诱导 1 0h,能从外周血淋巴细胞和脾淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段。将RT_PCR产物克隆到PGEM_Teasy载体 ,经过限制性酶切分析、测序证实克隆到的CHIFN_γ基因正确 ,命名为PGEM_CHIFN_γ。序列分析表明 ,CHIFN_γ基因与已发表的鸡IFN_γ基因的同源性为 95 .6%～ 1 0 0 % ,氨基酸水平同源性为 92 .8%～ 1 0 0 % ,与鸭IFN_γ核苷酸同源性为 67.5 %。将CHIFN_γ基因克隆到原核表达载体pGEX_6P_1的GST基因的下游 ,经IPTG诱导后表达出了 43kD的融合蛋白 ,超声波裂解后发现融合蛋白主要以包涵体的形式存在 ,裂解上清无抑制病毒活性 ;然而将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3 .1中 ,通过脂质体转染COS_1细胞 ,用鼠抗CHIFN_γ高免血清进行间接免疫荧光试验 (IFA) ,结果表明在COS_1细胞的细胞膜和胞浆内均有CHIFN_γ表达 ,且细胞病变抑制试验证实 ,转染后细胞培养上清有干扰素活性 ,在鸡胚成纤维细胞 (CEF)上抑制VSV病毒的效价可达到 1 0 2 4U/ml。这些结果表明真核表达系统对CHIFN_γ基因表达产物的活性有重要影响。
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| 关 键 词： | 鸡 γ－干扰素 淋巴细胞 克隆 表达 |
| 文章编号： | 1008-0589(2003)04-0249-05 |
| 修稿时间： | 2002年10月8日 |
Cloning and experssion of chicken interferon-gamma gene |
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| DAI Jian_hua,QIN Ai_jian ,XU Jin_jun,LIU Yue_long,JIN Wen_jie.Cloning and experssion of chicken interferon-gamma gene[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2003,25(4):249-253. |
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| Authors: | DAI Jian_hua QIN Ai_jian XU Jin_jun LIU Yue_long JIN Wen_jie |
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| Institution: | DAI Jian_hua,QIN Ai_jian *,XU Jin_jun,LIU Yue_long,JIN Wen_jie |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | chicken interferon_gamma lymphocyte clone expression |
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