| 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A单克隆抗体的制备及其靶位点区域的鉴定 |
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| 引用本文： | 吴海珍,刘宁宁,张璐,吕军华,肖一红,周恩民.非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A单克隆抗体的制备及其靶位点区域的鉴定[J].中国预防兽医学报,2012(10):815-818. |
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| 作者姓名： | 吴海珍 刘宁宁 张璐 吕军华 肖一红 周恩民 |
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| 作者单位： | 山东农业大学动物医学院;西北农林科技大学动物医学院兽医免疫学研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30871857、30901063、U0931003/L01);转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08009-147B) |
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| 摘 要： | 为制备非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHC-II A)的单克隆抗体(MAb),本研究将编码NMHC-Ⅱ A羧基端1 651～1 960氨基酸的表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞Rosseta中诱导表达,重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,分离小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG 4000介导融合。ELISA方法检测筛选阳性杂交瘤细胞,制备腹水并纯化MAb,以间接免疫荧光和免疫沉淀方法鉴定MAb的特异性,western blot检测MAb靶位点区域。结果表明,通过筛选得到1株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系,其抗体亚型为IgG1,细胞培养上清和腹水效价分别为1∶2 560和1∶1.0×106;该MAb能够特异性结合相应抗原,并结合Marc-145细胞;western blot结果显示该抗体与NMHC-Ⅱ A的1 812～1 894氨基酸位点结合。该抗体的制备为研究NMHC-Ⅱ A在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中的作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非肌肉肌球蛋白II型A重链羧基端 单克隆抗体 特性鉴定 |
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