| 三黄鸡CD154基因的克隆、序列分析与表达 |
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| 引用本文： | 方亮,肖少波,江云波,袁明涛,马朝志,李彬,方六荣,陈焕春.三黄鸡CD154基因的克隆、序列分析与表达[J].畜牧兽医学报,2007,38(10):1032-1037. |
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| 作者姓名： | 方亮 肖少波 江云波 袁明涛 马朝志 李彬 方六荣 陈焕春 |
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| 作者单位： | 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,华中农业大学动物医学院动物病毒室,武汉,430070 |
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| 基金项目： | 国家“973”基础研究项目(2005CB523200)，国家科技支撑计划(2006BAD06A04) |
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| 摘 要： | CD154在抗原特异的T淋巴细胞和抗原提呈细胞的相互作用中发挥非常重要的作用。利用RT-PCR方法从三黄鸡的外周血单核细胞(PBMC)中克隆了鸡CD154基因全长cDNA,序列分析显示该基因cDNA全长819bp,可编码272个氨基酸。将克隆的鸡CD154全长cDNA克隆到原核表达载体pET-28a中获得表达质粒pET-28a-CD154,转化BL21(DE3)后未检测到特异性表达蛋白。进一步通过PCR获得去除信号肽(1~22 aa)和跨膜区(23~46 aa)的CD154基因片段(CD154d),并将其克隆到pQE80的6×His下游,在大肠杆菌中成功表达,获得分子量约27 ku的融合表达蛋白6×His-CD154d。Western-blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应。同时,将CD154基因全长cDNA插入真核表达载体pEGFP-C1的EGFP基因下游,获得真核表达质粒pEGFP-CD154,转染Hela细胞,荧光显微镜观察发现EGFP-CD154融合蛋白表达在细胞膜上,证实了鸡CD154的膜定位特性。本研究为进一步研究鸡CD154的结构与功能及其免疫佐剂效应奠定了基础。
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| 关 键 词： | 鸡 CD154 克隆 表达 定位 |
| 文章编号： | 0336-6964（2007）10-1032-06 |
| 修稿时间： | 2006-09-28 |
Cloning, Sequence Analysis and Expression of CD154 Gene of Sanhuang Chicken |
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| FANG Liang,XIAO Shao-bo,JIANG Yun-bo,YUAN Ming-tao,MA Chao-zhi,LI Bin,FANG Liu-rong,CHEN Huan-chun.Cloning, Sequence Analysis and Expression of CD154 Gene of Sanhuang Chicken[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2007,38(10):1032-1037. |
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| Authors: | FANG Liang XIAO Shao-bo JIANG Yun-bo YUAN Ming-tao MA Chao-zhi LI Bin FANG Liu-rong CHEN Huan-chun |
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| Institution: | State Key Laboratory of Agriculture Microbiology ,Laboratory of Animal Virology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University ,Wuhan 430070,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | chicken CD154 clone expression location |
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