| 三疣梭子蟹卵黄磷蛋白纯化及其ELISA测定方法 |
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| 引用本文： | 张艳,吴旭干,杨帆,刘智俊,成永旭.三疣梭子蟹卵黄磷蛋白纯化及其ELISA测定方法[J].水产学报,2011,35(8):1146-1157. |
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| 作者姓名： | 张艳 吴旭干 杨帆 刘智俊 成永旭 |
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| 作者单位： | 1. 上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点试验室,上海,201306
2. 浙江大学生命科学学院,浙江杭州,310012 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金项目(40806068);上海高校创新团队项目:水产动物营养饲料与养殖环境(第二期);教育部博士点基金(200802640002) |
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| 摘 要： | 采用凝胶过滤层析法纯化了三疣梭子蟹成熟卵巢的卵黄磷蛋白(vitellin,Vn),采用变性凝胶电泳(SDS-PAGE)确定了Vn亚基数量和分子量,以纯化的Vn为抗原,制备了三疣梭子蟹Vn多克隆抗血清,纯化后得到Vn抗体,在此基础上比较和优化了三疣梭子蟹Vn测定的酶联免疫吸附法(ELISA)参数,建立了稳定的三疣梭子蟹Vn含量测定的ELISA方法。结果表明:(1) SDS-PAGE 显示三疣梭子蟹成熟卵巢中的Vn含有分子量为100、75和66 ku的3个亚基,Western-blotting检测表明,这3个亚基均具有较强的免疫特异性;(2) 样品直接包被法比双抗体夹心法具有更高的线性相关性,Vn抗体最佳稀释倍数为1∶90 000,最佳包被时间为8 h,一抗和二抗反应时间分别为2 h和1 h,显色时间为20 min;(3) 该方法定性检测的灵敏度为14.9 ng/mL左右,标准曲线方程为y=0.000 9x+0.399 1(R2=0.986 1),其中x和y分别代表Vn浓度和OD450值,工作范围为200～900 ng/mL;(4) 应用该方法测定三疣梭子蟹卵巢中Vn含量,结果表明,批次内和批次间平均变异系数分别为3.59%和3.10%,重复性良好。
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| 关 键 词： | 三疣梭子蟹 卵黄磷蛋白 纯化 酶联免疫吸附法 优化参数 |
| 收稿时间： | 3/6/2011 12:53:57 PM |
| 修稿时间： | 5/7/2011 8:23:49 PM |
Purification of vitellin and ELISA determination of vitellin of swimming crab(Portunus trituberculatus |
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| ZHANG Yan,WU Xu-gan,YANG Fan,LIU Zhi-jun and CHENG Yong-xu.Purification of vitellin and ELISA determination of vitellin of swimming crab(Portunus trituberculatus[J].Journal of Fisheries of China,2011,35(8):1146-1157. |
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| Authors: | ZHANG Yan WU Xu-gan YANG Fan LIU Zhi-jun and CHENG Yong-xu |
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| Institution: | Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources,Shanghai Ocean University,Shanghai,Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources,Shanghai Ocean University,Shanghai,College of Life Sciences,Zhejiang University,Hangzhou,Zhejiang,Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources,Shanghai Ocean University,Shanghai,Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources,Shanghai Ocean University,Shanghai |
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| Abstract: | Vitellin is the most important nutrient and energy source for the development of oocytes as well as developing embryos.The quality and quantity of vitellin in the mature ovary play a vital role in the crustacean reproduction and offspring quality.The swimming crab,Portunus trituberculatus,is a commercially important fisheries resource and mariculture species in East Asian countries.Because of overfishing,destruction of coastal spawning and nursery grounds and marine pollution,the landing of this crab has sh... |
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| Keywords: | Portunus trituberculatus vitellin purification ELISA parameter optimization |
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