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为制备抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异株卵黄抗体并探索卵黄抗体的纯化方法,本试验采用灭活的PEDV变异株CH/JX01全病毒免疫蛋鸡,收集免疫后所产的鸡蛋,分别用水稀释法、PEG-6000法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对鸡蛋中IgY进行提纯,然后运用间接ELISA和Western blotting方法鉴定和比较3种方法的提纯效果,获得可用于规模化生产的提纯方法;同时研究不同温度、pH条件下抗体活性,寻找对提纯IgY活性具有保护作用的物质。结果显示,本试验成功制备了抗PEDV变异株的卵黄抗体。浓度检测结果表明,水稀释法提取的IgY浓度最高,为6.204mg/mL;PEG-6000方法提纯的IgY浓度次之,为4.673mg/mL;水稀释-硫酸铵二次沉淀法IgY浓度最低,为3.359mg/mL。间接ELISA检测结果表明,水稀释-硫酸铵二次沉淀法提纯的IgY效价最高,为1∶12 800;其次是PEG-6000,为1∶6 400;而水稀释法最低,为1∶1 600。综合3种方法所提纯的卵黄抗体浓度与效价,发现水稀释-硫酸铵二次沉淀法的提纯效果优于其他两种方法。活性影响因素试验结果表明,提纯的IgY在37~60℃活性稳定;pH为4.0~11.0时具有良好的活性;在酸性条件下,20%硫糖铝对IgY活性具有较好的保护作用。本试验结果将为卵黄抗体的大规模生产运用与储存提供了有效的参考依据。 相似文献
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为制备抗猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）变异株卵黄抗体并探索卵黄抗体的纯化方法，本试验采用灭活的PEDV变异株CH/JX01全病毒免疫蛋鸡，收集免疫后所产的鸡蛋，分别用水稀释法、PEG-6000法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对鸡蛋中IgY进行提纯，然后运用间接ELISA和Western blotting方法鉴定和比较3种方法的提纯效果，获得可用于规模化生产的提纯方法；同时研究不同温度、pH条件下抗体活性，寻找对提纯IgY活性具有保护作用的物质。结果显示，本试验成功制备了抗PEDV变异株的卵黄抗体。浓度检测结果表明，水稀释法提取的IgY浓度最高，为6.204 mg/mL；PEG-6000方法提纯的IgY浓度次之，为4.673 mg/mL；水稀释-硫酸铵二次沉淀法IgY浓度最低，为3.359 mg/mL。间接ELISA检测结果表明，水稀释-硫酸铵二次沉淀法提纯的IgY效价最高，为1：12 800；其次是PEG-6000，为1：6 400；而水稀释法最低，为1：1 600。综合3种方法所提纯的卵黄抗体浓度与效价，发现水稀释-硫酸铵二次沉淀法的提纯效果优于其他两种方法。活性影响因素试验结果表明，提纯的IgY在37~60℃活性稳定；pH为4.0~11.0时具有良好的活性；在酸性条件下，20%硫糖铝对IgY活性具有较好的保护作用。本试验结果将为卵黄抗体的大规模生产运用与储存提供了有效的参考依据。 相似文献
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本试验采用辛酸去脂、饱和硫酸铵溶液盐析法提纯鹅卵黄抗体IgY,采用SDS-PAGE方法分析其纯度;用纯化后的IgY免疫试验兔,收集血清,测定血清抗体效价;采用辛酸-硫酸铵法结合Protein G树脂亲和层析法纯化免血清IgG,用改良的高碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记,直接ELISA法测定标记物效价.结果表明,提纯的鹅卵黄IgY浓度为11.5 mg/mL,纯度约为92％;血清琼脂扩散抗体效价为1∶32;Western Blotting试验证明,兔血清中含有抗鹅卵黄抗体IgY重链及轻链的特异性抗体;直接ELISA法测得标记物效价为1:1 100. 相似文献
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本文比较了水稀释-饱和硫酸铵沉淀法（法一）和水稀释-冰乙醇分级沉淀法（法二）分离提纯鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）的产率、纯度及抗体效价。结果表明：两种方法提取的IgY纯度均较高,法一纯化的IgY的产率及蛋白活性相对更好。 相似文献
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为了研究兔抗鹅IgG酶标抗体的制备,试验采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提,透析除盐,DEAEA-50纤维素层析相结合的方法提取鹅卵黄IgG,经核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG浓度;制备兔抗鹅IgG酶标抗体;利用酶标抗体检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗的免疫效果。结果表明,粗提的IgG浓度为10 mg/mL,抗体纯度可达到94.5%;免疫扩散得出兔抗鹅 IgG抗血清效价约 1∶32,抗体酶标后效价为1∶3000;酶标抗体可以作为检测疫苗效果一种很好的工具。 相似文献
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本试验旨在提高鸡传染性法氏囊卵黄抗体防制鸡传染性法氏囊的效果,比较不同提纯方法对鸡传染性法氏囊高免卵黄抗体效价的影响。制备高免蛋并测定其效价,在实验室通过直接离心法、酸化水提取法、氯仿提取法、聚乙二醇法4种方法分别对高免卵黄抗体提取及抗体效价检测。试验结果表明,自制卵黄抗体效价为1:64;直接离心法的抗体效价为1:128,酸化水提取法的抗体效价为1:16,氯仿提取法抗体效价为1:256,聚乙二醇法的抗体效价是1:32。试验结果显示,使用氯仿提取法后检测的抗体效价最高,是临床提取抗体的常用方法。 相似文献
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鸭IgG提取方法的比较试验 总被引：7，自引：0，他引：7
用辛酸－硫酸铵法提取鸭IgG并与传统提取方法硫酸钠、硫酸铵法进行比较，结果表明，3种方法回收的IgG依次为12．35、8．36和10．14mg/mL，而且辛酸－硫酸铵法回收IgG纯度高，可用于免疫标记，比色谱层析快速、操作简单、价格低廉。用该法以鸭卵黄提取IgG，回收的IgG为13．58mg/mL，氯仿法为8．55mg/mL，PEG不能回收；辛酸－硫酸铵法从鸭卵黄得到的IgG活性最高。 相似文献
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制备猪繁殖与呼吸综合征病毒高免卵黄抗体,研究其治疗效果。以猪繁殖与呼吸综合征灭活苗免疫产蛋鸡,采用ELISA方法检测卵黄抗体效价,收集高效价卵黄,采用氯仿抽提和硫酸铵盐析法纯化卵黄抗体。ELISA方法测定收集抗体效价为1∶8 000,测定纯化的抗体浓度为7.85mg/mL,微生物学检验及安全性试验表明制备的卵黄抗体安全可靠,人工感染治愈率和临床应用治愈率分别为100%和89.1%,表明制备的卵黄抗体对猪繁殖与呼吸综合征具有显著的治疗效果。 相似文献
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为提高鸡传染性法氏囊卵黄抗体防治鸡传誊性法氏囊病的效果,比较不同提纯方法对鸡传染性法氏囊高免卵黄抗体效价的影响。通过直接离心法、酸化水提取法、氯仿提取法、聚乙二醇法四种方法分别提取高免蛋高免卵黄抗体并测定其提取前后抗体效价。试验结果表明,自制卵黄抗体效价为1：64;直接离心法的抗体效价为1：128,酸化水提取法的抗体效... 相似文献
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不同方法提取卵黄抗体效果的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
为了优化卵黄抗体提取工艺以及产业化生产提供技术参考,从众多方法中初步筛选了较为适宜的水稀释法、辛酸法、乙酸-乙酸钠法、酚沉淀法和海藻酸钠法,并比较了5种方法的提取工艺、生产成本、卵黄抗体提取量及其效价。试验结果表明,辛酸法的提取液体回收率最高,达到171％;辛酸法提取蛋白的浓度最高,为6．6mg／mL;辛酸法和海藻酸钠法提取卵黄抗体的凝集价最高,为1：128。综合各种因素考虑,辛酸法是提取卵黄抗体较为理想的方法。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2015,(7)
为了获得高效价鸡抗犬瘟热病毒高免卵黄抗体,试验通过设计免疫程序免疫试验蛋鸡和筛选的卵黄抗体效价检测方法对氯仿法提取的卵黄抗体液进行鸡抗犬瘟热卵黄抗体效价检测并比较,筛选鸡抗犬瘟热病毒高免卵黄抗体最佳免疫程序,并作无菌与保存条件的探讨。结果表明:血凝及血凝抑制试验可作为鸡抗犬瘟热卵黄抗体效价的检测方法;按照基础免疫、加强免疫、强化免疫均间隔9 d,免疫剂量分别为1 m L/次、2 m L/次、3 m L/次的免疫程序能获得1∶512的鸡抗犬瘟热病毒卵黄抗体血凝抑制效价,为此次探讨的鸡抗犬瘟热病毒高免卵黄抗体最佳免疫程序,-20℃保存温度适合长期保存氯仿法粗提的鸡抗犬瘟热病毒卵黄抗体液。 相似文献
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本研究用鸭坦布苏病毒病灭活苗三次免疫SPF蛋鸡,收取高免鸡蛋,制备成冻干高免卵黄抗体;用鸡胚中和试验和间接ELISA方法进行效价检测。试验结果显示,第3次免疫后2周,卵黄抗体中和效价为1∶103.5,4、5周达到最高值1∶104.5;间接ELISA方法检测冻干前后的抗体效价结果均为阳性;对鸭坦布苏病毒强毒的攻毒保护率达100%,可为鸭坦布苏病毒的防控提供一种有效的冻干高免卵黄抗体制剂。 相似文献
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利用GPV 98E株胚毒免疫产蛋鸭,收集高免鸭蛋,分离卵黄,经水稀释法去脂粗提,硫酸钠盐析获得纯化的鸭源抗鹅细小病毒卵黄抗体,测定其琼脂双扩散效价、含量和回收率;利用低日龄无母源抗体易感雏鹅检测其预防和治疗效果。结果表明:经GPV 98E株胚毒免疫的鸭可以很快产生高水平的特异性抗体,纯化的卵黄抗体琼扩效价为1∶32,含量为81.6%,总蛋白回收率为6.01mg/mL。在预防试验中,雏鹅的死亡率为0,在治疗试验中,使用一次预防试验用的剂量治疗发病雏鹅,其死亡率为59%,经二项分布显著性检验,鸭源抗GPV卵黄抗体对鹅细小病毒感染有极显著的预防和治疗效果。 相似文献
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抗牛多杀性巴氏杆菌高免卵黄抗体IgY的制备及间接血凝检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究通过自制牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌灭活菌苗免疫产蛋鸡,采用卡拉胶结合硫酸铵沉淀法提取卵黄抗体IgY,并采用间接血凝方法检测抗体效价。结果表明,抗原致敏红细胞的最佳浓度是800μg/mL,免疫后第7周抗体效价达到高峰,效价为1：1024,高效价持续5周开始下降,测定提取的IgY浓度为8.258mg/mL,无菌检测及动物安全性实验表明制备的卵黄抗体安全可靠。本研究制备了抗牛多杀性巴氏杆菌卵黄抗体,为防治由荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌所致的犊牛肺炎提供了新的手段。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2015,(7)
为了研究适合于规模化制备卵黄抗体的联合方法,试验采用水稀释辛酸法,同时结合超滤法和硫酸铵盐析法,最终分离、纯化出目的蛋白。试验考察研究了不同比例水稀释液和辛酸对卵黄抗体除脂效果的影响,以及超滤液温度、p H值,截留分子质量和超滤压力对超滤效果的影响,并以单因素试验初步确定操作条件范围,L9(34)正交试验确定超滤条件的最佳参数。结果表明:分离出的卵黄液加入9倍纯化水和1%辛酸时除脂效果最好;超滤卵黄上清液的温度为25℃,p H值为7.5,采用截留分子质量为50 ku的膜包,超滤压力为0.025 MPa时,获得的浓缩液再经硫酸铵盐析,卵黄抗体提取率可达到90%,纯度为95%。 相似文献