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1.
为明确辣蓼黄酮正丁醇部分（n-butanol part of flavonoids from Polygonum hydropiper L.,FNB）体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PPRSV）的效果。本研究以Marc-145细胞和PPRSV弱毒疫苗毒株（TJM-F92）为对象,通过CCK-8法检测FNB对细胞的毒性作用,并检测先给药后接毒、先接毒后给药、药物与病毒同时作用这3种方式处理细胞后药物对病毒的抑制率。结果发现,FNB对细胞的最大安全浓度为500 μg/mL,因此,选择25~500 μg/mL浓度范围的FNB进行后续试验。各浓度的FNB处理病毒后,能不同程度的抑制PRRSV在细胞上的增殖,并呈现一定的剂量效应关系,药物的浓度越高,抗病毒效果越好。其中,先接毒后给药、药物与病毒同时作用这两种方式抗PRRSV效果显著,在25~500 μg/mL浓度范围内细胞存活率分别为21.55%~65.23%和24.85%~73.60%。而先给药后接毒,不能有效降低病毒的感染力,在药物最高剂量（500 μg/mL）时细胞存活率仅为7.00%,抗病毒效果不明显。FNB预先作用于Marc-145细胞虽未降低PRRSV感染细胞的能力,即药物对于PRRSV预防作用效果不理想,但是FNB对病毒感染细胞后呈现一定的作用,药物能够通过抑制病毒的合成、释放及直接杀灭病毒,进而能够有效抑制PRRSV在细胞上的增殖。本试验结果不仅为FNB在临床上治疗猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）提供参考依据,而且可以为辣蓼的深度开发和利用提供理论依据。 相似文献
2.
为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HuN4-F112株,优化了细胞培养条件、病毒接种剂量、收毒时间和病毒液冻融次数等条件。结果证明Marc-145细胞在MEM培养基、新生牛血清含量8%、细胞接毒密度1.5×105个/mL、pH7.1条件下生长状态最好;PRRSV HuN4-F112株的最佳接种剂量为3.0×105 TCID50/mL,收毒时间为接种后70～72小时,在-18℃冻融3次,PRRSV HuN4-F112株增殖效果最好。该结果为HuN4-F112株PRRSV疫苗的生产提供了依据。 相似文献
3.
4.
Marc-145细胞是用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)培养的易感细胞.为了进一步提高PRRSV CH-1R弱毒疫苗株在Marc-145细胞中的增殖水平,试验采用有限稀释法对Marc-145细胞进行克隆.结果表明,克隆后获得的Marc-145/D2细胞株对CH-1R弱毒株具有更高的敏感性. 相似文献
5.
对在生物反应器中用微载体连续灌注培养Marc-145细胞生产猪繁殖与呼吸综合征病毒的制备技术进行了研究.在14 L体积的生物反应器中,加入含10 g/L微载体的细胞培养基DMEM,接种Marc-145细胞至细胞浓度为1×105/mL,培养4d后细胞可生长至5～7×106/mL,然后以感染复数(MOI)为0.01接种PRRSV PC株病毒,接毒后36 h开始收获,连续收获3d左右,收获的病毒滴度范围在106.0～ 1073TCID50/mL之间,将收获的病毒液加入适量的保护剂,经冷冻干燥制备成疫苗,无菌、支原体等项目的检验均合格,3批疫苗的免疫保护率均为5/5.实验表明,用生物反应器微载体灌注培养Marc-145细胞制备PRRS疫苗工艺可行. 相似文献
6.
Marc-145细胞是用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)培养的易感细胞。通过对PRRSV CH-1R高敏感Marc-145/D2克隆细胞株培养特性的研究,以及分析病毒在不同血清浓度细胞维持液中的增殖水平,筛选出最佳培养条件。结果表明,以Marc-145/D2克隆细胞株无血清转瓶培养PRRSV CH-1R的抗原效价可达到108.0TCID50/mL以上。 相似文献
7.
《中国动物传染病学报》2018,(6)
为了研究中药野大黄(中药提取物)含药血清体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性,探讨其抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用机理。取"野大黄"药液,生药含量为2 g/mL,对照药物利巴韦林终浓度为0.025 g/mL,分别灌胃给药,饲喂SD大鼠,制备各组含药血清。采用MTT法和细胞形态观察法相结合,测定含药血清对Marc-145细胞的最大无毒稀释度。将含药血清倍比稀释至1∶4、1∶8、1∶16三种浓度,采用三种加药方式,以细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)观察与MTT染色检测OD492值,计算含药血清病毒抑制率为评价指标,观察野大黄含药血清体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性。结果显示,野大黄含药血清体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性最显著的是含药血清与病毒混合后加入方式,在1∶4稀释度时,野大黄含药血清组与利巴韦林对照含药血清组OD492均值差异显著(P0.05),两者对猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制率分别为83.51%、73.07%,相差约10%。野大黄含药血清组三种稀释度镜检观察Marc-145细胞均无CPE出现,细胞单层完好,而利巴韦林对照含药血清在1∶16稀释度时病毒抑制率为63.55%,且出现CPE,细胞单层遭到破坏、部分细胞变圆、脱落。结果表明,野大黄含药血清体外具有显著的抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性,以同时给药时具有直接杀灭猪繁殖与呼吸综合征病毒作用,有望作为抗猪繁殖与呼吸综合征病毒药物进行开发。 相似文献
8.
PRRSV NVDC-JXA1株在Marc-145细胞上增殖条件的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NVDC-JXA1株,优化了细胞培养条件、病毒接种剂量、病毒吸附时间、收毒时间和病毒冻融次数等条件。结果表明Marc-145细胞在MEM培养基、新生牛血清含量80 mL/L,细胞接种密度150 000个/mL,pH7.0条件下生长状态最好;PRRSV NVDC-JXA1株的最佳接种剂量为400 TCID50/mL,病毒吸附时间为30 min,收毒时间为接种后72 h,在-20℃冻融3次,PRRSV NVDC-JXA1株增殖效果最好。该结果为NVDC-JXA1株PRRSV疫苗的生产提供了依据。 相似文献
9.
金银花提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒研究 总被引：1，自引：0，他引：1
通过观察金银花提取物对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的Marc-145细胞的保护效果、对病毒感染滴度(TCID50)的影响及对ORF7mRNA表达的影响来评价其体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的活性。结果表明,金银花提取物大孔树脂600mL/L的乙醇/水洗脱部位对PRRSV感染细胞具有较好的保护效果,最小保护浓度为6.25μg/mL。6.25μg/mL 600mL/L的乙醇/水洗脱部位使PRRSV病毒滴度从105.8 TCID50降低至100.3 TCID50左右,使PRRSV ORF7mRNA含量降低1 000多倍。因此,金银花提取物大孔树脂600mL/L的乙醇/水洗脱部位具有良好的体外抗PRRSV活性。 相似文献
10.
《中国兽医学报》2017,(4)
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是严重危害养猪业的传染病之一,也是重点防控的疾病之一。人参多糖(ginseng polysaccharides complex,GPS)具有抗病毒及增强免疫的作用。为了寻找有效预防和治疗PPRS的药物,本试验以Marc-145细胞为模型,采用细胞病变抑制试验和MTT法测定细胞活力,观察GPS在体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的作用,并通过改变药物作用方式初步探讨GPS的抗病毒机制。试验分为6组,分别为50,100,200和400 mg/L GPS组、病毒对照组及正常细胞对照组。在GPS对PRRSV感染Marc-145细胞的阻断和抑制作用中,各质量浓度GPS均显著提高感染PRRSV后Marc-145细胞的存活率(P<0.05),GPS处理组Marc-145细胞中的PRRSV量均显著低于病毒对照组(P<0.05)。而且,GPS可以促进Marc-145细胞中IL-6和IFN-γ的mRNA表达,也能增强细胞上清中IL-6和IFN-γ的活性。本试验研究表明GPS在体外可有效阻断或抑制PRRSV对Marc-145细胞的感染,提示GPS可作为预防和治疗PRRS的候选药物。 相似文献
11.
为探究双香豆素(DIC)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的影响,本研究首先通过CCK-8法检测DIC对Marc-145细胞的细胞毒性,并计算其半数毒性浓度(CC50);进而使用荧光定量PCR和Western blot检测DIC对PRRSV增殖水平的影响;通过不同给药方式处理细胞进一步探究DIC针对的PRRSV增殖阶段。结果表明,DIC对Marc-145细胞的细胞毒性CC50为96.11μmol·L-1,并在浓度为25μmol·L-1时即表现出明显的抗PRRSV活性;DIC可以呈剂量依赖性地抑制不同时间和不同滴度的PRRSV增殖。DIC对PRRSV感染周期的吸附、入胞和释放阶段无影响,但是可明显抑制PRRSV的复制阶段。本研究证实DIC以较低浓度在Marc-145细胞中表现出明显的抗PRRSV活性,并主要针对PRRSV的复制阶段。本研究提示双香豆素具备开发成临床抗病毒药物或添加剂的潜力,为新的PRRSV抗病毒药物的研发提供理论依据。 相似文献
12.
本试验以Marc-145细胞为模型,采用细胞病变(CPE)抑制试验和MTT法测定细胞活力,观察苦参碱(matrine)体外抗猪繁殖呼吸与综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)活性,并从抑制病毒复制、阻断吸附和直接杀灭3个方面探讨苦参碱体外抑制PRRSV的作用机制.结果显示,苦参碱CC50＞1 500 mg/L,最大安全浓度为750 mg/L,EC50为(443.5±33.4)mg/L,SI≥3.38,在安全浓度范围内对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制率达到93.6％;在直接杀灭和复制抑制试验中最高抑制率分别达到105.10％和91.53％;在病毒吸附抑制试验中抑制率＜20％,表明苦参碱不能阻断PRRSV对Marc-145细胞的吸附.结果表明,苦参碱在体外可有效抑制PRRSV对Marc-145细胞的感染,其抗病毒机制可能是干扰病毒的复制或/和直接杀灭病毒,提示苦参碱可作为研发预防及治疗猪蓝耳病的药物或先导化合物. 相似文献
13.
《中国兽医杂志》2018,(11)
为了在感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的Marc-145细胞模型上,探讨人参皂苷Rb1(Ginsenoside Rb1, GSR1)抑制PRRSV能力及其作用机制。采用MTT法测定GSR1在Marc-145细胞上的最大安全浓度(Maximum no-cytotoxic concentration, MNTC)和半数毒性浓度(50%Cytotoxic concentration, CC_(50))。建立PRRSV感染Marc-145细胞模型,设计阻断PRRSV复制和直接杀灭PRRSV试验,确定GSR1体外抗PRRSV的作用方式;利用FQ-PCR检测GSR1对病毒N基因的影响,间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western Blot技术测定GSR1对PRRSVN蛋白表达的影响。结果表明,GSR1在直接杀灭PRRSV试验中最高抑制率为54.65%,在阻断PRRSV复制试验中前12 h起抗病毒作用,且最高抑制率达60.01%,推测GSR1主要通过直接使病毒灭活或干扰病毒的早中期复制来发挥其抗病毒作用。此外,在设定12～72 h试验时间内,阳性药物利巴韦林组,4 mg/mL、2 mg/mL GSR1组PRRSV N基因拷贝数显著低于病毒组(P0.05)。在对N蛋白含量影响试验中4 mg/mL GSR1和阳性药物可以减少N蛋白载量。表明GSR1可以通过抑制病毒N蛋白的表达来抑制病毒的复制,并可作为抗PRRSV的候选药物或先导物。 相似文献
14.
板蓝根、黄芪等中药活性提取物对猪繁殖与呼吸综合征病毒体外作用的研究 总被引：8，自引：0，他引：8
本试验利用Marc-145细胞体外培养系统，通过观察细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根、黄芪等中药活性提取物成分体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）对细胞的感染作用，并通过改变加药方式（先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物、病毒和药物感作后同时加入），初步探讨中药活性提取物的抗病毒机制。结果表明。在安全浓度范围内，板蓝根水提物体外对PRRSV具有显著的直接杀灭作用；连翘、黄芪水提物和黄芪多糖体外对PRRSV均具有明显的阻断和抑制作用，为筛选抗PRRSV中药制剂提供了理论依据。 相似文献
15.
《畜牧与兽医》2021,(8)
旨在研究黑水虻(black soldier fly,Hermetia illucens L.)幼虫脂肪对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的体外抑制作用,初步探讨其产生抑制作用的机制。试验采用水解黑水虻幼虫脂肪乳化液(BSFLh)处理在Marc-145细胞上增殖的PRRSV,以乳化剂为阴性对照,月桂酸单甘油酯(GML)为成分对照,采用荧光定量PCR法测定PRRSV N基因RNA表达水平。试验结果显示,培养基中含BSFLh 250μg/mL,可以显著抑制PRRSV在Marc-145细胞上的增殖(P≤0.001);在PRRSV侵入Marc-145细胞前添加BSFLh,可以显著抑制PRRSV增殖(感染后6 h,P≤0.000 1),而在侵入后添加BSFLh对PRRSV增殖抑制不显著(感染后6 h,P0.05);乳化剂对照组抑制效果显著低于BSFLh组(P≤0.01);培养基中含月桂酸单甘油酯无法抑制PRRSV在Marc-145细胞上的增殖。研究表明,BSFLh可以抑制PRRSV在Marc-145细胞上的增殖,其抑制活性来自于水解黑水虻幼虫脂肪和乳化剂,抑制作用主要发生在病毒侵入细胞前。 相似文献
16.
非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用 总被引：1，自引：0，他引：1
为研究非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHCⅡ-A)羧基端在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞中的作用,本实验通过提取Marc-145细胞总RNA,RT-PCR方法扩增NMHCⅡ-A羧基端930 bp基因PRA,并进行核苷酸序列测定。将该基因连接到pEGFP-N1载体中,采用双酶切和PCR方法对重组质粒pEGFP-N1-PRA进行鉴定。将pEGFP-N1-PRA转染至Marc-145细胞后感染PRRSV,测定TCID50值及间接免疫荧光(IFA)检测PRA对PRRSV感染Marc-145细胞的影响。TCID50及IFA结果显示,与未转染的Marc-145细胞相比,转染pEGFP-N1-PRA的Marc-145细胞的PRRSV感染能力降低50%。本研究初步证明了PRA编码蛋白在PRRSV感染细胞中的作用,为PRRSV感染机制的研究提供了一定的依据。 相似文献
17.
为了探讨金丝桃素可溶性粉抗犊牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVD-MDV)的作用机制,试验过程中采用先给药后接毒、先接毒后给药和同时给药接毒3种不同的途径,分别在72、96、120 h观察病毒致牛肾原代细胞(MDBK)的病变(CPE)情况.结果表明,病毒的TCID50为10-6/0.1 mL,金丝桃素可溶性粉的TC0为2.5 g/L;药物质量浓度在0.3～2.5 g/L范围内同时给药和接毒组细胞生长良好,细胞单层完整,视野中未见大量圆细胞或死细胞,而其余2种给药途径细胞病变明显.结果提示,金丝桃素可溶性粉对BVD-MDV有显著的直接杀灭作用. 相似文献
18.
RNAi靶向N基因抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的复制 总被引：1，自引：1，他引：0
根据编码猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N)基因的序列,设计3个干扰靶位(N12、N23、N26),构建siRNA表达载体,转染Marc-145细胞后接毒,测定病毒TCID50、CPE,并利用实时荧光定量PCR及间接免疫荧光检测病毒在Marc-145细胞上的复制情况。结果表明,利用RNAi技术靶向N基因,其中N12干扰靶位可以高效抑制PRRSV的增殖,证实N基因可能是病毒复制所必需的结构基因,所选的干扰靶位是病毒复制的关键性位点。 相似文献
19.
《中国兽医学报》2020,(7)
为探索LGALS1对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在Marc-145中复制的影响,设置LGALS1免疫血清和PRRSV共同孵育Marc-145细胞的试验组、LGALS1 siRNA转染Marc-145细胞后再接种PRRSV的试验组以及PRRSV直接孵育Marc-145细胞的对照组,利用间接免疫荧光、TCID_(50)测定、荧光定量和Western blot来测定病毒的增殖、滴度变化和表达情况。结果发现,抗LGALS1血清组、转染LGALS1 siRNA质粒组与对照组荧光、TCID_(50)、病毒mRNA和蛋白水平差异均不显著。结果表明,LGALS1对PRRSV在Marc-145中复制无影响。 相似文献
20.
试验旨在验证Nsp9基因是否影响猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）的复制。构建含有Nsp9全长基因的质粒pIRES2-EGFP-Nsp9,并转染到Marc-145细胞中,接毒之后分别通过实时荧光定量PCR和Western blotting方法测定PRRSV N蛋白在mRNA和蛋白水平的表达。结果显示,转染Nsp9基因的Marc-145细胞上PRRSV的N蛋白在mRNA水平上显著高于未转染Nsp9基因的对照组（P<0.05）,是对照组的1.5倍,同时转染Nsp9基因后的Marc-145上PRRSV N蛋白水平也明显高于对照组。随着剂量的增加,N蛋白的表达量在mRNA和蛋白水平都有所增加。由以上结果初步可知,Nsp9基因可以在Marc-145细胞上促进PRRSV的复制,Nsp9基因与其复制密切相关。 相似文献