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根据禽腺病毒 CELO株的基因序列 ,设计合成了 1对引物 :上游引物为 5′-CCCTCCCACCGC-TAACCA-3′,下游引物为 5′-CACGTTGCCCTTATCTTGC-3′。用这对引物对 群禽腺病毒中 1 2个血清型病毒和 1 9个分离野毒株、 群 4个血清型病毒、 群禽腺病毒株的核酸模板进行了 PCR扩增 ,结果均特异性地扩增出了与设计片段大小相一致的 4 2 1 bp片段 ,而对其他 5种禽病病原体和哺乳动物腺病毒血清 2型核酸模板的扩增均为阴性。该 PCR能检出 1 fg禽腺病毒 DNA模板 相似文献
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为建立多重PCR方法用于禽源多杀性巴氏杆菌中毒力基因的检测,对禽源多杀性巴氏杆菌分离株MD-1的9个毒力基因进行PCR扩增及敏感性测定,然后通过多个基因的组合得到5种多重PCR体系,并从中筛选合适的多重PCR体系,测定其特异性、敏感性和重复性。结果显示,分离株MD-1中的9个毒力基因均可扩增出目的片段,敏感性测定结果表明,有的基因可检测至1.81×10~4 copies/μL的核酸。筛选出的4种多重PCR体系1、3或4、5均可用于其中6个毒力基因(pfhA、nanB、ompH、oma87、sodA、sodC)的检测,并且特异性较强,均能够扩增禽源多杀性巴氏杆菌分离株HN-1和CZ-6,而大肠埃希菌和沙门菌分离株均无扩增条带。多重PCR体系1、3、4可检测多杀性巴氏杆菌核酸的敏感性为1.81×10~6 copies/μL,多重PCR体系5甚至可检测至1.81×10~5 copies/μL,同时这4种多重PCR体系与单个毒力基因PCR检测的敏感性均一致。说明建立的禽源多杀性巴氏杆菌毒力基因的多重PCR检测方法对多杀性巴氏杆菌毒力基因的快速检测有参考价值。 相似文献
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为确定疑似禽霍乱病例病原种类及其病原基因型,本研究采用细菌分离技术对病原菌进行实验室分离培养,应用传统方法和分子生物学方法对分离细菌进行鉴定,并应用PCR扩增和基因序列分析对分离细菌进行基因分型。结果显示,分离菌具有多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）典型培养特征,菌落形态和菌体染色特征、生理生化特性均与多杀性巴氏杆菌相符;PCR扩增到457 bp的基因片段。采用5对分型引物对分离菌进行基因分型显示,仅有A型引物扩增到大小1 050 bp的目的基因片段,序列分析也显示分离菌荚膜基因与A型多杀性巴氏杆菌参考菌株荚膜特异性基因同源性高达97.6%~100.0%,系统进化与A型多杀性巴氏杆菌处于同一进化分支。结果表明,疑似禽霍乱病例病原为A型多杀性巴氏杆菌,本研究结果将为禽霍乱的防控提供参考资料。 相似文献
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副鸡嗜血杆菌16 S rDNA PCR检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
根据副鸡嗜血杆菌的16 S rDNA基因序列设计一对特异性引物XZIC1和XZIC2,对6株副鸡嗜血杆菌进行PCR扩增。结果显示,该对引物对6株副鸡嗜血杆菌均扩增出与预期大小相一致的282bp片段,而对鸡毒支原体、禽巴氏杆菌、鸡传染性支气管炎病毒、鸡新城疫病毒、大肠埃希菌、鸡白痢沙门菌、禽流感病毒(H9)、鸡喉气管炎病毒及葡萄球菌等9种病原体的扩增结果均为阴性。该PCR敏感性结果表明,本方法可以检测到10pg的副鸡嗜血杆菌DNA模板。采用引物XZIC1和XZIC2,对分别用副鸡嗜血杆菌ctcc253、ctcc255、ctcc257、ctcc269株感染SPF鸡的临床病料DNA进行PCR扩增,均可扩增出单一的282bp的片段。 相似文献
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对66株猪多杀性巴氏杆菌的鉴定结果表明,PCR是一种快速、特异、灵敏的病原检测方法。应用能够扩增大多数原核生物16S rRNA基因的通用引物,对猪多杀性巴氏杆菌疫苗株(EO630)和野外分离株的16S基因rRNA进行PCR扩增,以期为分子水平上准确地鉴别猪巴氏杆菌提供依据。 相似文献
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从病死母猪肺脏中分离到一株革兰氏阴性小杆菌,用生理生化鉴定、药敏试验、致病性试验和PCR鉴定方法对分离菌株进行鉴定,并用多杀性巴氏杆菌荚膜分型引物对分离株的荚膜血清型进行鉴定。结果表明:本菌为猪多杀性巴氏杆菌,对多种抗生素高度敏感,对小白鼠有强致病性;PCR扩增16SrDNA基因获得1415bp片段,分离株的16SrDNA核苷酸序列与多杀性巴氏杆菌(AY078999)的同源性为99%,因此该分离菌株被鉴定为致病性巴氏杆菌,命名为YN20110122株;本菌分离株为荚膜A型血清型多杀性巴氏杆菌。 相似文献
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呼伦贝尔市首例羊源荚膜D群多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
为了确定呼伦贝尔市两个羊场的羊只出现体温升高、精神沉郁、食欲废绝、咳嗽、腹泻甚至死亡病因,本研究以病羊病变组织为研究对象,采用常规细菌培养法和多杀性巴氏杆菌种特异性基因KMT1引物以及cap A、cap B、cap D、cap E、cap F荚膜血清型特异性基因引物进行双重PCR扩增,确定分离菌的荚膜血清型,同时应用纸片扩散法对分离菌进行药物敏感性试验。结果显示:从病变的肺组织中分离到1株菌落为灰白色、露珠状、不溶血,革兰氏染色阴性球状短杆菌;通过序列比对及遗传进化树分析,该分离株与印度分离株巴氏杆菌同源性高达100%;本研究只扩增出多杀性巴氏杆菌荚膜血清D群;分离菌株对青霉素、复方新诺明、克林霉素等耐药,对诺氟沙星、卡那霉素、环丙沙星等药物已不敏感。本研究结果表明,我们首次从呼伦贝尔市病羊体内分离到荚膜血清D群多杀性巴氏杆菌。 相似文献
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猪源多杀性巴氏杆菌的生物学鉴定与荚膜PCR分型 总被引：8，自引：1，他引：8
从表现猪萎缩性鼻炎临床症状的猪群中分离出13株多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),采用Pm种特异性的KMT1-KMT2引物进行PCR扩增,结果与传统的生化反应鉴定完全一致。基于对甘露醇、卫茅醇、山梨醇、海藻糖的发酵能力和产生鸟氨酸脱羧酶的特性,Q_1、Q_3、Q_6、Q_7、Q_(10)、Q_(13)和C_(48-1)鉴定为Pm多杀亚种(Pm subsp.multocida);Q_2、Q_4、Q_5、Q_8、Q_9、Q_(11)、Q_(12)鉴定为Pm败血亚种(Pm subsp.septica)。对13株Pm分离物采用A型、B型和D型引物进行PCR扩增,8株鉴定为A血清型(61.5%);5株鉴定为D血清型(38.5%);没有发现B血清型的菌株。同时对金黄色葡萄球菌抑制试验、中性吖啶黄沉淀试验与荚膜PCR分型的相关性进行了讨论。 相似文献
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应用聚合酶链反应检测鉴别火鸡支原体方法的建立 总被引：8，自引：0，他引：8
根据基因库中火鸡支原体（ＭＭ）１６Ｓ ｒＲＮＡ基因序列（Ｇｅｎｅｂａｎｋ Ｕ０４６４９）,设计了一对跨幅为８５０ｂｐ的引物,用这对引物对４禽侏火鸡支原体标准菌株和６种其它禽病病原体进行ＰＣＲ扩增,结果４禽株鸡支原体菌株均得到片段大小与预期设计相一致的８５０ｂｐ的ＰＣＲ扩增产物,而其它６种禽病病原体（包括ＭＧ、ＭＳ和ＭＩ）的扩增结果则均为阴性,该ＰＣＲ能检出１００ｆｇ的火鸡支原体的ＤＮＡ模板。 相似文献
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Gautam R Kumar AA Singh VP Singh VP Dutta TK Shivachandra SB 《Research in veterinary science》2004,76(3):179-185
A polymerase chain reaction (PCR) assay targeting the hyaC-hyaD gene was developed and used to identify strains of Pasteurella multocida belonging to serogroup-A. A set of serogroup-specific-PCR primers amplified a 564 bp product from genomic DNA prepared from bacterial cells or directly from bacterial colonies. This method detected as low as 10 ng of bacterial DNA and had a specificity of 100% for P. multocida serogroup-A. A nested PCR method yielded a single 374 bp product. All fifty isolates were also shown to be identical by restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis of the PCR products after digestion with BglII. 相似文献
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用反转录聚合酶链反应检测禽呼肠孤病毒的研究 总被引：7，自引：0，他引：7
本文报告了建立反转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ）检测禽呼肠孤病毒（ Ａ Ｒ Ｖ）的方法,根据禽呼肠孤病毒 Ｓ１１３３ 毒株 Ｓ１ 基因序列,设计合成两对引物,用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 技术对 ６ 株禽呼肠孤病毒国际标准株进进行了检测。结果两对引物对 ６ 株 Ａ Ｒ Ｖ 均可扩增出与预期大小相符 ５３２ｂｐ 和 ４３５ｂｐ 的 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 产物,而对其它 ６ 种禽病病原核酸的扩增结果均为阴性;该 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 可以检测出 １ｐｇ 的 Ａ Ｒ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ 模板。 相似文献
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为了解国内禽多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）流行株外膜蛋白 H（OmpH）基因的变异情况,参考GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌序列设计1对特异性引物,采用PCR方法对不同来源的8株禽Pm菌株和3个荚膜型参考株（A、B、D）的OmpH基因进行扩增、测序。结果显示,11个菌株的OmpH基因开放阅读框在1002~1071 bp 之间;SignalIP 4.0预测结果表明,信号肽均为N端20个氨基酸残基,成熟蛋白氨基酸残基数量在314~337 aa之间,推测的分子质量在33.76~37.04 ku之间。与GenBank中15个菌株OmpH基因序列比对结果发现,核苷酸同源性在84.9%~100.0%之间;氨基酸同源性在81.5%~100.0%之间;其中C48-1、1010、9003、890920、921012、XJ-e 6个国内禽Pm分离株OmpH序列同源性为100.0%。试验结果表明,国内禽Pm菌株OmpH基因非常保守。 相似文献
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鸡毒支原体PCR检测试剂盒的研制与应用 总被引：2，自引：0，他引：2
根据基因库中鸡毒支原体 1 6SrRNA的序列研制PCR检测试剂盒 ,用于检测鸡毒支原体 (MG)。结果表明该MG PCR检测试剂盒对不同MG参考菌株和地方分离株均能特异性地扩增出 732bp条带 ,而对其他禽支原体和禽病病原体的扩增结果为阴性。该MG PCR试剂盒最低能检测出 1 0 0fg的MGDNA模板。保存期测定结果表明 ,该MG PCR试剂盒在 - 2 0℃条件下保存至 1 ,3 ,6和 9个月时 ,其敏感性无明显变化 ,仍能检测到 1 0 0fg至 1pg的MGDNA模板。保存至 1 2个月时其敏感度虽降低了 1个滴度 ,但仍能 1 0 0 %检出人工感染鸡的临床样品 相似文献
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赖链霉素多杀性巴氏杆菌菌株的辐射诱变筛选 总被引：1，自引：0，他引：1
研究提出在多杀性巴氏杆菌辐射诱变育种中选择辐照剂量的依据,建立了一种有效地筛选赖链霉素菌株的改良平板筛选方法,在国内外首次应用~(60)Co-γ射线诱变获得赖链霉素多杀性巴氏杆菌菌株。选出的赖链霉素多杀性巴氏杆菌SD_(724)菌株免疫鸡,能保护22/23,具有良好的免疫原性。 相似文献
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一步法RT-PCR检测禽呼肠孤病毒的研究 总被引：6，自引：0，他引：6
根据已发表的禽呼肠孤病毒（ARV）S1133株S1基因序列，设计合成了一对扩增跨幅为532bp的引物。这对引物对ARV标准株，分离株以及人工感染SPF鸡跗关节组织抽提的核酸进行一步法RT-PCR扩增，即将反转录和PCR反应在一个PCR反应管中一次性完成。结果该方法对ARV4个标准株和5个分离株的扩增均获得了与预期大小一致的RT-PCR产物，而对照样品的扩增全为阴性；该方法最低可检测到0.16ng的ARV RNA，还可以直接从感染鸡关节组织抽提的核酸中检测到ARV RNA，表明该一步法RT-PCR对于ARV的检测是可行的。 相似文献
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应用16S rRNA基因测序法鉴定禽多杀性巴氏杆菌的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
应用 16SrRNA基因测序法对以疫苗标准强毒株C4 8_1和弱毒疫苗代表株G190E4 0为阳性对照株和分离鉴定的 2株禽源多杀性巴氏杆菌Chicken/guangxi/ 2 0 0 0_1、Chicken/guangdong / 2 0 0 2_1株 ,进行 16SrRNA基因序列分析。结果表明 ,2株分离菌与对照的强弱毒株之间的同源性为 10 0 %。后经Blastn分析Chicken/guangxi/ 2 0 0 0_1、Chicken/guangdong /2 0 0 2_1、C4 8_1、G190E4 0株与已发表 11株多杀性巴氏杆菌同源性高达 10 0 % ,与已发表的 34株多杀性巴氏杆菌同源性均超过 98% ,同时与其它巴氏杆菌种如溶血巴氏杆菌等同源性均低于 96 % ,进一步证实Chicken/guangxi/ 2 0 0 0_1、Chicken/guangdong / 2 0 0 2_1分离株均为多杀性巴氏杆菌。生化实验鉴定表明Chicken/guangxi/ 2 0 0 0_1、Chicken/guangdong / 2 0 0 2_1、C4 8_1、G190E4 0菌株均为subsp .Multocida亚种。 相似文献
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DNA fingerprinting for differentiation of field isolates from reference vaccine strains of Pasteurella multocida in turkeys 总被引：2，自引：0，他引：2
The genomes from field isolates of Pasteurella multocida in turkeys and those of P multocida reference CU and M9 vaccine strains were analyzed and compared after cleavage with restriction endonucleases. The electrophoretic profiles obtained with DNA fragments from field isolates and vaccine strains of the same serotype were characteristic and reproducible. These features indicated the existence of differences among the isolates of the same serotype that cannot currently be detected, using available serotyping methods. However, several field isolates had electrophoretic profiles similar to those of either CU or M9 vaccine strain. It was concluded that restriction endonuclease analysis of DNA genomes from P multocida isolated from turkeys provides the information for differentiation of field isolates from vaccine strains of the same serotype. 相似文献