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1.
将两株鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）弱毒株在SPF鸡体内连续传代至第5、第6代时,出现明显的法氏囊萎缩和B：B指数下降,表明IBDV弱毒株在鸡体内连续传代后毒力增强。为进一步阐释哪些基因位点导致了上述毒力的变化,本试验测定了基础弱毒株及其在鸡体内传代后各个代次毒的基因组序列,比对分析后发现VP2蛋白253位氨基酸发生了由H到Q或N的变异,表明VP2蛋白253位氨基酸的替换可能会增强传染性法氏囊病病毒在鸡体内的致病性。 相似文献
2.
为了解IBDV流行强毒HQ-b株囊毒与其细胞适应毒间生物学特性差异及2毒株毒力变化与VP2、VP5基因变异的关系,对2毒株的细胞适应性、致病性等进行比较,同时对其VP2、VP5基因序列进行分析。结果表明,HQ-b株囊毒对CEF、CEK、CELi、DF-1和Vero均不适应,而细胞适应毒HQ株仅不能适应Vero细胞、且批内及批间毒价稳定。致病性结果显示HQ-b株对4周龄SPF鸡致死率高达80%,是真正的超强毒,而细胞适应毒致死率已降为0%。对VP2基因高变区研究表明,HQ-b株具备IBDV超强毒株的分子特征,即222A、256I、294I和299S;其细胞适应毒HQ株除222A→P、256I→V、294I→L和299S→N外,在VP2公认的毒力位点253(Q→H)、279(D→N)、284(A→T)位氨基酸也发生改变,导致细胞适应毒具备经典弱毒株的分子特征,即222P、256V、279N、284T、294L和299N。对VP5基因研究表明:流行强毒HQ-b株也具有IBDV超强毒株的分子特征;其细胞适应毒VP5基因有12个位点碱基突变并导致9处氨基酸变异,尤其是ORF区第2个碱基由"T"突变为"C"后,导致细胞适应毒VP5的N端丢失了4个氨基酸,这种突变与现有的疫苗毒完全一致。本研究提供了超强毒HQ-b培育、驯化后致病性和细胞适应性转变的分子机理,也丰富了IBDV分子流行病学的理论。 相似文献
3.
2011年8月,从河南省疑似传染性法氏囊病鸡群采集病料,通过鸡胚接种、琼脂扩散试验和RT-PCR等方法,证实分离的病毒为传染性法氏囊病病毒（Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV）,命名为HB／11株。序列分析表明,HB／11株VP2基因的核苷酸序列与GenBank中发表的部分国内外IBDV超强毒株VP2基因序列相似性在99％左右;HB／11株VP2高变区基因含有七肽基序为SWSASGS,在222、253、256、279、284、294和299位上的氨基酸残基分别是A、Q、I、D、A、I和S,具有IBDV强毒的分子特征。动物回归试验表明,30日龄鸡群接种该毒株后引起鸡群发病率为100％,死亡率为70％,剖检可见鸡传染性法氏囊病典型病变。因此该病毒为IBDV强毒株。 相似文献
4.
《动物医学进展》2016,(10)
为了解山西省鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)流行毒株的遗传变异规律,将近5年来采集自山西不同地区发病鸡群的法氏囊组织病料,通过接种易感雏鸡分离出15株IBDV。用绒毛尿囊膜接种法测定鸡胚半数致死量,其ELD50在10~(-2.18)~10~(-2.91);测定所有分离株对非免疫鸡的致死率,结果为63.3%~86.7%,属于超强毒株;利用RT-PCR扩增病毒VP2基因并进行序列分析。结果表明,所分离的15株病毒均具有传染性法氏囊病病毒超强毒株的主要分子特征,即222A(WS2为S)、249Q、254G、256I、279D、284A、294I、299S及七肽区SWSASGS,综合其对非免疫鸡的致死率,确认所有分离毒株属于超强毒病毒株。说明在山西省境内存在传染性法氏囊病病毒超强毒株。 相似文献
5.
为研究鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株(vvIBDV)细胞嗜性改变的分子基础,本研究通过定点突变、重叠延伸PCR(SOE-PCR)等技术,以vvIBDV HLJ-0504株为骨架构建了两组感染性克隆,并借助已建立的反向遗传操作技术进行病毒拯救。IFA检测、电镜观察及RT-PCR鉴定均显示:Q253H/A284T双点突变的pCAGGHLJ0504A889/980HRT和pCAGGHLJ0504BHRT共转染DF1细胞成功拯救出重组病毒(rHLJ0504HT),而未进行双点突变的pCAGGHLJ0504AHRT和pCAGGHLJ0504BHRT共转染组未获得重组病毒。上述结果表明,双点突变Q253H/A284T能使vvIBDV HLJ-0504适应非允许细胞CEF,但未进行Q253H/A284T双点突变的vvIBDV HLJ-0504不能感染非允许细胞CEF,因此,该研究表明VP2的Q253H/A284T两个氨基酸突变是vvIBDV细胞嗜性改变的分子基础。 相似文献
6.
鸡传染性法氏囊病一个自然病例的病原分离及其分子特征分析 总被引：1，自引：0，他引：1
设计针对传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因高变区(vVP2)的引物对湖南永州送检的一群疑似传染性法氏囊病病例的法氏囊组织通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术进行检测,应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种的方法对阳性样品进行病毒分离,同时对IBDV分离株中的vVP2进行限制性内切酶分析和核苷酸序列测定,分析关键位点的氨基酸特征和同源性,绘制遗传进化树.结果成功分离出了4个IBDV毒株,其中HUN0801、HUN0802和HUN0803的特征性位点的氨基酸为222A、249Q、254G、256I、279D、284A、294I和299S,属于vvIDBV的特征,并与vvIBDV参考株具有较高的同源性;HUN0804的则为222P、249Q、254G、256V、279N、284T、294I和299N,符合弱毒株的特征,与弱毒参考株的同源性较高;4个分离株与常用疫苗株的同源性普遍较低.遗传进化分析表明,3个vvIBDV分离株与vvIBDV参考株和中等偏强毒力株YSLMB同处于一个大的分支,并与欧洲株DV86、湖南株HuN亲缘关系最近;而HuN0804与弱毒株、经典毒株和常用疫苗株同处于一个大分支.研究表明,本病例中存在不同致病型IBDV毒株的混合感染. 相似文献
7.
用RT-PCR方法从传染性法氏囊病(IBD)免疫预防失败的病鸡法氏囊组织AH1与AH2中扩增传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因。序列分析结果显示,AH1与AH2病毒VP2基因长度均为1350nt,编码450aa,核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为98.2%、99.3%,七肽基序均为SWSASGS,在222、253、256、279、284、294和299位上的氨基酸残基分别是A、Q、I、D、A、I和S,具有IBDV强毒的分子特征。进一步将VP2基因克隆入人5型腺病毒穿梭载体(pShuttle-CMV),与腺病毒骨架载体(pAdEasyTM)共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组并转染HEK-293A细胞,经多次亚克隆获得了重组腺病毒rAd-(IBDV)VP2。利用Western-blot、IFA等方法检测IBDVVP2蛋白的体外表达情况,结果证明VP2基因在腺病毒中获得了表达。 相似文献
8.
《中国家禽》2020,(2)
研究通过对山西某养鸡场送检疑似鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的病鸡采集病料,设计引物进行PCR鉴定,扩增出831 bp的特异性片段,初步确定病鸡感染IBDV。扩增分离病毒的VP2和VP3片段序列并进行同源性比对和构建系统发育进化树,而后进行生物学毒力测定试验和动物回归试验。结果显示:VP2和VP3扩增出总长度为474 bp和771 bp的片段;VP2序列中七肽氨基酸顺序为SWSARGS,且在222、253、256、279、284、294、299位点的氨基酸分别为P、H、V、N、T、L、N,均与标准弱毒株相同;分离株VP2序列与B87和Gt株的同源性最高,与B87和Gt株等处于同一个分支;分离株VP3序列与B87和Gt株的同源性最高,且与之位于同一个分支;病毒生物学毒力试验结果显示,分离株的MDT、IVPI、ICPI分别是120 h、0、0.4。确定分离的IBDV为弱毒株;动物回归试验结果显示,发病SPF鸡剖检有典型的传染性法氏囊病病变,表明分离株具有明显的致病性。 相似文献
9.
为探究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)DK分离株的致病性和遗传变异情况,本研究测定了该分离株的鸡胚半数致死量(ELD50)、对SFP雏鸡的致病力以及扩增病毒的VP2基因并分析其序列。结果显示,DK分离株对鸡胚的ELD50为104.5/0.2mL,以2×10^3ELD50剂量感染SFP雏鸡出现典型IBD的临床症状、剖检和组织学病变;实验鸡发病率为100%,致死率为44.4%;DK株VP2基因序列与参考株的同源性为93.1%~97.0%、氨基酸序列同源性为93.6%~97.5%,其基因序列和氨基酸序列均与Cu-1wt参考株(经典株)同源性最高;DK株VP2氨基酸序列的七肽区SASWSGS及249Q、253Q、279D、284A、290M、313V、330S氨基酸位点均与强毒株的氨基酸位点一致;但其222P、256V、299N3个氨基酸不符合IBDV超强毒株的特征;而其第222、249位氨基酸为P和Q,与抗原变异株(vIBDV)的T和K也不相同。结果表明:IBDVDK株为中等偏强毒力病毒。本研究为IBD的防控提供参考依据。 相似文献
10.
《黑龙江畜牧兽医》2015,(17)
为了筛选出安全性和免疫原性较好的理想免疫毒株,试验对6种传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)活疫苗中等毒力毒株(IBDV-CE、IBDV-M65、IBDV-V877、IBDV-NF8、IBDV-L、IBDV-B87)的生物学特性进行了比较。将传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)的6个毒种分离繁殖后,分别接种SPF鸡胚测定其对鸡胚的毒力和鸡胚半数致死量(ELD50),再分别接种雏鸡测定毒株的安全性、对鸡新城疫病毒的免疫抑制性和免疫原性。结果表明:接种IBDV-CE株、IBDV-M65株的雏鸡法氏囊出现萎缩,接种IBDV-NF8株的雏鸡法氏囊稍萎缩,接种IBDV-L株的雏鸡出现肾脏出血,接种IBDV-B87株和IBDV-V877株的雏鸡法氏囊及肌肉组织无异常变化;6种毒株对鸡新城疫的免疫效果无影响。 相似文献
11.
Velhner M Mitevski D Potkonjak D Stojanović D Kovačević M Petrović T Aleksić-Kovačević S 《Acta veterinaria Hungarica》2010,58(4):499-509
The biological properties of an infectious bursal disease (IBD) virus isolated from bursas collected during an outbreak in a village chicken flock in Macedonia are described. The mortality rate was 50%. Two viruses coexisted in the bursas of infected chickens (IBDVwt and IBDVtc). The virus termed IBDVtc grows on chicken embryo fibroblast (CEF) cells from the first passage. Specific pathogen free chickens inoculated with IBDVtc at passage level 4 did not develop any clinical signs of disease. Some discrete bleeding on the leg muscles was seen and the bursa of Fabricius revealed pathological lesions similar to those caused by classical strains. However, the bursa recovered quickly (bursa lesion score 2) by 14 days post infection (PI). We also found evidence of bursal repopulation by means of perinuclear antigen staining. Strong CD3 influx was evident at 4 days PI, and at 33 days PI the CD3+ cell finding was comparable to the control. The mean antibody titre was 9.2 log 2 at 14 days PI. The amino acid composition of VP2 in IBDVwt (222 Ala, 242 Ile, 253 Gln, 256 Ile, 279 Asp, 284 Ala, 294 Ile and 299 Ser) is described. The same sequence was found in IBDVtc, except for two point mutations, at Gln253→His and Ala284→Thr. Such amino acid substitution is responsible for partial attenuation and the ability of the strain to replicate in cell culture. None of the commercial vaccine viruses has a similar arrangement of amino acids in the variable domain of IBDV. This strongly suggests that IBDVtc originates from a very virulent strain. To the best of our knowledge, this is the first report of a concomitant infection of chickens with highly pathogenic IBDV and its mutant counterpart. 相似文献
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13.
【目的】 探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染禽类后导致免疫器官发生细胞凋亡的机理。【方法】 以1日龄SPF雏鸡为试验对象,将100只SPF雏鸡随机均分为REV感染组和未感染病毒的对照组,REV感染组雏鸡经腹腔感染500 μL REV稀释液,对照组雏鸡经相同途径注射等量灭菌生理盐水,于病毒感染后第1、7、14、21、28和42天,2组雏鸡随机各抽取5只,心脏采血处死雏鸡后快速摘取法氏囊。分别应用HE染色和病理切片成像系统测定分析法氏囊细胞核浆比,TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒测定凋亡细胞数,免疫组化法测定Bcl-2和C-myc阳性细胞数量,实时荧光定量PCR和ELISA法分别检测法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达和蛋白含量。【结果】 ①REV感染1日龄SPF雏鸡后21~42 d,其法氏囊淋巴细胞凋亡百分比显著或极显著高于对照组雏鸡(P<0.05;P<0.01);②SPF雏鸡感染REV后21和28 d,其法氏囊细胞核浆比显著低于对照组雏鸡(P<0.05);③REV感染SPF雏鸡法氏囊中Bcl-2和C-myc阳性细胞数在病毒感染后21和28 d显著高于对照组雏鸡(P<0.05);④REV感染SPF雏鸡后21 d,其法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达极显著高于对照组雏鸡(P<0.01)。⑤SPF雏鸡感染REV后,其法氏囊中Bcl-2蛋白含量较对照组雏鸡有不同程度的增加,其中21和28 d分别差异极显著(P<0.01)和显著(P<0.05),病毒感染组雏鸡的C-myc蛋白含量也始终高于对照组雏鸡,且21和28 d极显著增高(P<0.01)。【结论】 REV感染所致SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc的mRNA表达以及蛋白含量异常均与病毒感染导致的法氏囊细胞凋亡密切相关,而法氏囊细胞凋亡数量增加与REV感染引发的机体免疫机能抑制密切相关。 相似文献
14.
本试验选用在山东省普遍使用的两种中等毒力IBD疫苗，分别在12和19日龄两次免疫SPF鸡，二免后13开人工接种vvIBDV，连续观察14天。结果表明，这两种疫苗均能有效地保护vvIBDV对SPF鸡的感染，而且也进一步证明，这两种疫苗免疫SPF鸡后，均能对SPF鸡法氏囊、胸腺、脾脏等免疫器官产生不同程度的病理性损伤并且这种损伤是可逆性的。 相似文献
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ABSTRACT: Infectious bursal disease (IBD) is an important immunosuppressive disease of chickens. The causative agent, infectious bursal disease virus (IBDV), consists of two serotypes, 1 and 2. Serotype 1 consists of classic IBDV (cIBDV) and variant IBDV (vIBDV). Both of these strains vary in antigenicity and pathogenesis. The goal of this study was to compare the immunopathogenesis of cIBDV and vIBDV. Three-week-old specific pathogen free chickens were inoculated intraocularly with standard challenge strain (STC) (cIBDV) and a variant strain Indiana (IN) (vIBDV). The cIBDV produced more pronounced bursal damage, inflammatory response and infiltration of T cells as compared to vIBDV. There were significant differences in the expression of innate (IFN-α and IFN-β), proinflammatory cytokine and mediator (IL-6 and iNOS) in cIBDV- and vIBDV-infected bursas. The expression of chemokines genes, IL-8 and MIP-α was also higher in cIBDV-infected chickens during the early phase of infection. The expression of Toll like receptor 3 (TLR3) was downregulated at post inoculation days (PIDs) 3, 5, and 7 in the bursas of vIBDV-infected chickens whereas TLR3 was upregulated at PIDs 3 and 5 in cIBDV-infected bursas. In vIBDV-infected bursa, TLR7 expression was downregulated at PIDs 3 and 5 and upregulated at PID 7. However, TLR7 was upregulated at PIDs 3 and 7 in cIBDV-infected bursas. The expression of MyD88 was downregulated whereas TRIF gene expression was upregulated in cIBDV- and vIBDV-infected bursa. These findings demonstrate the critical differences in bursal lesions, infiltration of T cells, expression of cytokines, chemokines and TLRs in the bursa of cIBDV-and vIBDV-infected chickens. 相似文献
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Changes in VP2 gene during the attenuation of very virulent infectious bursal disease virus strain Gx isolated in China 总被引：6，自引：0，他引：6
Very virulent (vv) infectious bursal disease virus (IBDV) Gx strain with high pathogenicity was attenuated through replication in specific-pathogen-free (SPF) chicken embryos and in chicken embryo fibroblast (CEF) cell cultures. The changes in VP2 nucleotide and the deduced amino acid sequences were obtained during attenuation of vvIBDV in CEF culture. Sequence analysis of selected passages from numbers 0 to 20 in CEFs (designated here Gx to CEF-20) showed that no changes were detectable in the VP2 gene before CEF-7. There were a few changes in the nucleotide sequence of the VP2 gene but no amino acid substitutions at CEF-8. The virus of CEF-9 was an intermediate with some amino acid changes that possibly were related to virulence. CEF-10 virus had become similar to CU-1 strain. The VP2 gene sequence remained the same from CEF-10 to CEF-20. The results of pathogenicity tests showed that the mortalities of Gx, CEF-5, CEF-8, and CEF-9 in 4-wk-old SPF chickens were 64%, 60%, 60%, and 32%, respectively; whereas CEF-10, CEF-15, and CEF-20 were nonpathogenic. Virus neutralization tests with Gx strain showed that the antigenicities are similar from Gx to CEF-20. 相似文献
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【目的】 研究1株传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）广西分离株的毒力特征及其与VP2基因序列特征的关系,为IBDV的流行病学研究和疫病防控提供参考。【方法】 通过PCR、鸡胚传代培养、DF-1细胞的适应培养及琼脂扩散试验等方法分离鉴定病毒,并扩增其VP2基因,利用Mega 7.0、MegAlign软件将其与其他不同毒力IBDV毒株进行核苷酸及氨基酸序列比对分析,并进行SPF鸡致病性试验,用实时荧光定量PCR方法测定IBDV拷贝数变化情况。【结果】 成功分离到1株IBDV毒株,命名为GX20210126株。该毒株接种SPF鸡胚可导致鸡胚出现出血、矮化和肝脏发黄、出血及针尖状坏死;且GX20210126对DF-1具有良好的细胞适应性,可引起显著细胞病变。琼脂扩散试验显示,该毒株具有良好的抗原性,病毒液能与IBDV阳性血清之间形成白色沉淀线。VP2基因进化分析显示GX20210126株与国际标准超强毒株在同一个大的分支上,氨基酸序列相似性在86.8%~99.6%之间,其中与UK661株相似性最高,为99.6%,仅有2处氨基酸位点发生改变,即D279N和I272T。以EID50为10-3.8/0.1 mL,0.5 mL/只的剂量点眼、滴鼻接种8日龄SPF鸡,攻毒后鸡出现羽毛蓬松、精神萎靡、拉白绿色水样粪便等临床症状,剖检可见肌肉、肝脏出血,肾脏尿酸盐沉积,法氏囊萎缩,IBDV拷贝数在感染后第5天达到峰值。【结论】 IBDV广西流行株GX20210126具有超强毒株基因序列特征,人工感染鸡群可导致IBDV典型临床症状和病理变化。 相似文献