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1.
本试验利用猪的繁殖与呼吸综合征病毒美洲株和上海分离株ＳＨ１建立了ＩＦ，ＩＰＭＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ三种抗体检测方法，对１２０份随机抽样猪血清检测表明，美洲株原组ＩＦＡ的阳性率为３０．８％，ＩＰＭＡ的阳性率为３０％，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性率为３２．５％，ＳＨ１分离株抗原组ＩＦＡ的阳性率为３７．５％，ＩＰＭ阳性率为３７．５％，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性率为４０％，进口ＥＬＩＳＡ试剂盒的检测阳性率为２６ 相似文献
2.
珍禽霉形体抗体检测方法的建立和应用 总被引：2，自引：0，他引：2
本试验经培养特性,形态特征,红细胞吸附试验和生长抑制试验等从８株珍禽霉形体中筛选出１株具有代表性的菌株ＭＧ－Ｐ,将ＭＧ－Ｐ和标准株ＭＧ－Ｓ０分别建立了ＨＩ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验,检测了３批１２０份共１００种珍禽动物的血清样本,ＭＧ－Ｐ的阳性检出率为ＨＩ１４．２％（１７／２０）,Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ１６．７％（２０－１２０）,两法阳性符合率为８５％（１７／２０）;ＭＧ－Ｓ０的阳性检出率为ＨＩ９．２％ 相似文献
3.
姜玉明 《南京农业大学学报》1994,(4)
扭转轴在冲击载荷作用下冲击应力和动载系数的计算姜玉明（南京农业大学农业工程学院，南京２１００３２）ＣＡＬＣＵＬＡＴＩＯＮＯＦＩＭＰＡＣＴＳＴＲＥＳＳＡＮＤＤＹＮＡＭＩＣＬＯＡＤＦＡＣＴＯＲＯＮＴＯＲＳＩＯＮＳＨＡＦＴＡＣＴＥＤＢＹＩＭＰＵＬＳＩＶＥＬ... 相似文献
4.
本研究成功地建立了间接酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＥＤＳ－７６病毒抗原的标准化程序。对纯化ＥＤＳ－７６病毒抗原的最低检出量为１ｎｇ／Ｄｏｔ,其敏感性约为ＨＡ的１５．６倍。ＥＤＳ－７６阳性鸡血清特异性阻断试验及交叉反应试验证明,该法对ＥＤＳ－７６病毒抗原的检测具有特异性。试验结果表明,间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测ＥＤＳ－７６病毒抗原,具有敏感性高、特异性强、重复性好、经济、方便、快速等优点,适合于大规模样本的检测。 相似文献
5.
建立了一个Ｆｅｎｒｉｄａｚｏｎ－Ｋ流动相离子色谱分析方法。用Ｄｉｏｎｅｘ ｓｅｒｉｅｓ ４０００ｉ离子色谱仪，ＭＰＩＣ－ＮＳＩ分离柱，ＡＭＭＳ－ＭＰＩＣ抑制柱和电导检测器，分别以ＮＨ３．Ｈ２Ｏ，ＴＭＡＯＨ，ＴＥＡＯＨ和ＴＢＡＯＨ为离子对试剂，ＣＨ３ＣＮ为有机改性剂，对Ｆｅｎｒｉｄａｚｏｎ－Ｋ皆可获得符合残留分析检测水平的灵敏度，最小检出量２－５ｎｇ，在２ｎｇ－１０μｇ范围内线性关系良好。据此建立了 相似文献
6.
用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ１、４ＡＦ１、６ＤＨ８及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ８２株单抗特异性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩＳＡ测定，各株单抗４０ｈ培养上清效价达１０－２～１０－４，第７天腹水效价达１０－５～１０－６，４ＡＦ１、６ＤＨ８与所试７个ＩＢＶ标准株及２个ＩＢＶ分离株都发生反应 相似文献
7.
以３０％～６０％硫酸铵饱和度分级沉淀、ＤＥＡＥ ＳepharoseＣＬ－６Ｂ、ＳephadexＧ－２００、Ｐhenyl ＳepharoseＣＬ－４Ｂ和羟基磷灰石层析纯化了小麦５－氨基酮戊酸脱水酶（ＡＬＡＤ）,其在pＨ８．５时比活为３１Ｕ．mg＾－１蛋白;酶纯化了９１倍,得率５％,酶亚基分子质量约５２ku,全酶分子质量约３３０ku,表明酶由６个亚基组成;酶的等电点为４．８,在４００nm有吸收峰,最适反应温度４５℃,Ｍg＾３＋激活酶,Ｚn＾ 相似文献
8.
李育农 《山东农业大学学报(自然科学版)》1994,(3)
苹果属－亚种──中国苹果李育农（西南农业大学）关键词：苹果属；西洋苹果；亚种ＭＡＬＵＳＤＯＭＥＳＴＩＣＡＳＵＢＳＰ．ＣＨＩＮＥＮＳＩＳＹ．Ｎ．ＬＩ．－ＡＳＵＢＳＰＥＣＩＥＳＯＦＭＡＬＵＳＭＩＬＬ．￥ＬｉＹｕｎｏｎｇ（ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔ... 相似文献
9.
为准确检测鸡群中减蛋综合征病毒感染情况,从减蛋综合征病毒（ＥＤＳ）贵州分离毒株ＨＳ－１中提纯病毒ＤＮＡ后,用地高辛标记制备了全基因组探针。在Ｄｏｔ－ｂｌｏｔ中该探针不与正常鸭胚尿囊液核酸提取物及马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ发生反应,只与３株ＥＤＳ病毒（国际标准毒ＡＶ－１２７、贵州分离毒ＨＳ－１、南京分离毒（ＧＣ２）ＤＮＡ呈阳性反应,具有较高的特异性;可检测出３０ｐｇ的同源ＤＮＡ,具有较强的灵敏度 相似文献
10.
以３０％ ～６０％ 硫酸铵饱和度分级沉淀、ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００、Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－４Ｂ 和羟基磷灰石层析纯化了小麦５－氨基酮戊酸脱水酶（ＡＬＡＤ）,其在ｐＨ ８．５ 时比活为３１ Ｕ·ｍ ｇ－ １蛋白;酶纯化了９１ 倍,得率５％ ,酶亚基分子质量约５２ ｋｕ,全酶分子质量约３３０ ｋｕ,表明酶由６ 个亚基组成;酶的等电点为４．８,在４００ ｎｍ有吸收峰,最适反应温度４５℃,Ｍｇ２＋ 激活酶,Ｚｎ２＋ 和磷酸吡哆醛抑制酶。纯化的ＡＬＡＤ浓缩后,－ ２０℃下在０．１ ｍ ｏｌ·Ｌ－ １,ｐＨ ８．５ 的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ,内含５０％ 的甘油,５ ｍ ｍ ｏｌ·Ｌ－ １的巯基乙醇和ＭｇＣｌ２ 中黑暗贮藏３０ ｄ 酶活不损失 相似文献
11.
用斑点酶联免疫吸附试验、金萄菌A蛋白酶联免疫吸附试验及间接血球凝集试验二种血清学方法检测弓形虫感染鼠血清及健康鼠血清各100份,平均阳性率分别为96.0％、94.0％和88.0％,平均假阳性率分别为4.0％、7.0％及8.0％;检测10份阿米巴肝脓肿病人血清及20份日本血吸虫感染兔血清,平均交叉反应率分别为3.3％、10.0％及13.3％。结果表明,三法对弓形虫特异性抗体的检测均有较好的敏感性、特异性、重现性及较低的交叉反应率。三法中,以斑点酶联免疫吸附试验的敏感性最好,且有省试剂、反应快、操作简便等优点,是一种很有实用价值前景的免疫诊断方法。 相似文献
12.
【目的】胞内劳森菌（Lawsonia intracellularis,LI）是引起猪增生性肠炎（porcine proliferative enteritis, PPE）的肠道病原菌,主要表现为动物福利下降,给世界养猪业造成严重的经济损失。研究通过制备鼠抗LI SodC的单克隆抗体,建立一种针对LI的免疫过氧化物酶细胞单层试验（IPMA）抗原检测方法,检验其在临床上的应用性,从而为LI的病原诊断提供一种科学有效的手段。【方法】选取胞内劳森菌弱毒疫苗为研究对象,通过PCR扩增其sodc片段,将其克隆至原核表达载体pGex-6p-1上,成功构建出pGex-6p-1-sodc重组质粒,诱导表达重组蛋白SodC。Western Blot分析重组蛋白的反应原性,一抗使用鼠抗GST标签的抗体。以该重组蛋白为免疫原,免疫4—6周龄BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术、有限稀释法和间接ELISA技术筛选阳性杂交瘤细胞,并制备腹水。通过间接免疫荧光（IFA）鉴定该单抗的特异性。以该单抗为一抗,摸索并建立了LI IPMA抗原检测方法,并评价该方法的特异性、敏感性和重复性。用优化后的IPMA方法对来自江苏周边地区猪场回肠组织样品进行检测,评价该方法的临床价值。【结果】纯化后SodC蛋白浓度较高,与鼠抗GST标签的抗体发生特异性结合,表明该蛋白反应原性较好。经3次亚克隆后最终共筛选获得2株阳性杂交瘤细胞,分别命名为1D6和1F7。单抗亚型鉴定结果显示：1D6亚型为IgA,1F7亚型为IgG3;ELISA检测1D6单抗效价为1﹕1 024 000;1F7单抗效价为1﹕1 024 000;间接免疫荧光（IFA）结果表明2株单抗均与LI菌株发生特异性反应,与猪霍乱沙门氏菌（Salmonella Cholerasuis,S. Cholerasuis）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）等猪常见病原无交叉反应。优化后IPMA反应条件为：一抗稀释倍数为1﹕800,作用45min;二抗稀释倍数为1﹕2 500,作用1h,此时IPMA检测效果最佳。用该方法检测S. Cholerasuis、PEDV、TGEV、伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒2（PCV2）均为阴性;最低检测限为103个/mL,说明该方法特异性强、敏感性高。临床样品检测结果显示146份病料中共检测出92份阳性样品,3个不同猪场的阳性样品检出率分别为65.6%、68.2%和53.7%,总体阳性率为63.0%。普通PCR方法检测出82份阳性样品,两种方法的阳性符合率为94.6%。【结论】成功制备了鼠抗LI SodC蛋白的单克隆抗体,建立了针对LI抗原的IPMA检测方法,并对临床样品进行了检测。该方法具有良好的特异性和敏感性,并具有一定的临床价值,为实验室LI的分离鉴定、在感染细胞中的定位以及流行病学调查和相关检疫提供一种有效的技术手段。 相似文献
13.
14.
检测猪链球菌2型毒力相关蛋白的ELISA法的建立 总被引：7，自引：1，他引：7
提纯猪链球菌2型分离株HA9801的毒力相关蛋白溶菌酶释放蛋白（MRP）和胞外因子（EF），制备其抗体。用此抗体建立了Dot-ELISA和间接ELISA检测法。分别以菌株ATCC35246和HA9801为阴性和阳性对照，检测17株猪源链球菌和1株猪链球菌2型人分离株。结果显示，两种ELISA的检测结果一致，MRP和EF的阳性率均为61％（11／18）。 相似文献
15.
蚯蚓生物制剂对小麦生理代谢和生长的影响研究表明，在小麦种子萌发期，过氧化氢酶，酸性磷酸酯酶活性和三磷酸腺苷含量分别比对照提高１１９．１％，１１．４％和３７．５％，在小麦幼苗时期，硝酸还原酶活性和幼苗吸收磷的能力分别比对照提高９８．６％和２８．２％。在小麦芽期，种子活力指数比对照提高２８．９％。小麦三叶期苗高，根长和干重分别比对照提高１３．２％，１９．２％和２４．１％。 相似文献
16.
Yuelan Zhao Yuzhu Zuo Lei Zhang Jinghui Fan Hanchun Yang Jianhua Qin 《Frontiers of Agriculture in China》2009,3(3):325-331
The IgG antibodies of rabbit anti-E2 protein of the bovine viral diarrhea virus were prepared by a general method from high
efficiency serum immunized by E2 recombinant protein antigen expressed in E. coli prokaryotic expression system and were labeled to make enzyme-labeled antibody with the method of NaIO4. A sandwich Dot enzyme-linked immunosorbent assay (Dot-ELISA) for the detection of BVDV was developed. The optimal reaction
conditions of Dot-ELISA were determined. The results show that optimal coating antibody was 300 μg·mL−1, the working concentration of HRP-labeled antibody was 1:50. The optimal blocking reagent and time were 5% bovine serum and
45 min. The minimum detection of the content of antigen reached 1.35 μg·mL−1. Compared with the routine IDEXX ELISA test kit with the whole virus, its specificity, sensitivity and coincidence rate were
90.48%, 96.55% and 95.24%, respectively. Compared with the sandwich Dot-ELISA with the negative staining electron microscope
and RT-PCR, the coincidence rates were 90.9% and 93.1%, respectively. In addition, Bovine viral diarrhea virus (BVDV) antigen
of 178 samples collected from cow farms in the Hebei Province, China, were detected by the developed Dot-ELISA and the IDEXX
BVDV antigen Test Kit simultaneously, BVDV antigen positive rate was 39.89%–41.01%. The result of detecting clinical samples
demonstrated that the established method showed its specificity, sensitivity and repeatability, whereas the results were easily
interpreted without an ELISA reader. 相似文献
17.
采集1例疑似感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)仔猪的粪便,运用RT-PCR方法和血清学方法对病料进行TGEV检测,并应用猪睾丸细胞(ST)进行病毒分离培养,分别采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)和RT-PCR方法检测病毒在ST细胞中的增殖动态,应用RT-PCR方法扩增分离TGEV S1基因,经序列测定后,采用DNAStar 7.0和Mega 5.0软件对TGEV进行生物信息学分析。结果表明,病料接种到ST细胞培养后,出现明显细胞病变效应(CPE);RT-PCR检测结果显示,TGEV核酸阳性;血清学鉴定TGEV抗原阳性。将分离毒株命名为TGEV-NY。感染12 h后,IPMA检测结果阳性,且可从细胞培养上清中检出TGEV核酸。序列测定分析表明,分离毒株S1基因开放阅读框(ORF)为2 220 bp,编码740个氨基酸。进化分析显示,分离毒株与我国2006年分离的SC-Y毒株亲缘关系最近,分离毒株属于基因Ⅰ群。 相似文献
18.
本试验采用生物素—亲和素酶复合物—斑点酶联免疫吸附试验（ＡＢＣ—Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ）检测食品中沙门氏菌。该法可检出ＩＳＣ液中接种的沙门氏菌。其敏感性可达１０４—１０５千个／Ｌ，比常规免疫酶法和免疫荧光法提高１０—１００倍。特异性检测表明，其与大肠杆菌、变形杆菌、产气杆菌未发生交叉反应。该法在２４ｈ内可报告结果，比常规法至少快３—４ｄ。对２００份食品检样进行检测，检出１９份，检出率９．５％，与常规法检测结果平行比较，漏检率仅为０．５％，结果相差不显著（Ｐ＞０．０５）。进行３次重复性试验，结果完全相同。试验结果表明，该法操作简便、敏感、快速，具有较高的特异性，适于对大批样品进行快速检测。 相似文献
19.
利用含有猪传染性胃肠炎病毒S基因主要抗原位点的重组质粒PCI-Sa免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释法3次克隆,获得1株稳定分泌抗TGEV重组S蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为E6D9A12,其染色体平均计数为88±10对,间接ELISA检测制备腹水抗体效价为1:6×105,分泌抗体亚类为IgG2a型。杂交瘤细胞上清与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、猪伪狂犬病病毒(PrV)均不发生交叉反应;与TGEV感染细胞经间接免疫荧光检测均呈黄绿色荧光;与TGEV经Dot-ELISA检测呈特异性反应。 相似文献
20.
以纯种长白乳猪为试材，按２窝１组，分别用Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ号乳猪颗粒饲料饲养７－６０日龄乳猪，以正大乳猪颗粒饲料为对照。结果表明，Ⅰ号饲料比Ⅱ，Ⅲ号饲料分别增重１１．５７％和２０．０３％，饲料利用率分别提高１８．４８％和１７．３９％，经济效益分别提高１０．５３％和１３．１４％；但与对照组无显著差异。 相似文献