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【研究目的】探讨细胞凋亡基因p53在固始鸡免疫器官内的表达及其生理意义;【方法】应用免疫组织化学技术和Leica显微图像处理系统;【结果】p53阳性蛋白表达于法氏囊和胸腺内淋巴细胞细胞膜、细胞质和细胞核。在不同发育阶段固始鸡法氏囊内均有少量p53表达阳性细胞,阳性细胞主要分布于黏膜上皮层与淋巴小结之间靠近上皮层的固有膜内,其次是淋巴小结边缘及淋巴小结与淋巴小结之间的固有膜层内。在1周龄和12周龄固始鸡胸腺内有少量p53表达阳性细胞,阳性细胞主要分布于胸腺小叶皮质与髓质交界处,其次是皮质内,很少出现在髓质内。p53在不同发育阶段固始鸡脾脏内均无表达;【结论】在正常生理情况下,细胞凋亡基因p53参与了固始鸡中枢免疫器官内淋巴细胞发育分化过程中的凋亡调控,对免疫器官的稳定发挥重要作用。 相似文献
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运输应激猪HSPs mRNA转录、分布及免疫器官病理性损伤相关性研究 总被引：3，自引：0，他引：3
【目的】研究长途运输应激对猪免疫器官的病理性损伤、HSPs mRNA的分布和转录水平,探讨其相关性。【方法】利用组织学、原位杂交和本实验室建立的猪HSPs mRNA一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台等方法,研究长途运输应激对猪免疫器官的病理性损伤、HSPs mRNA的分布和转录水平的变化。【结果】在长途运输应激初期（1～2 h）,淋巴结和脾脏出现急性病理性损伤变化,损伤程度较为严重;运输应激4 h时,组织的病理性损伤与应激初期相似,但血管的充血程度有所减轻;淋巴结和脾脏中HSP70 mRNA的转录水平随着运输应激时间的延长一直呈现出上升的趋势,运输应激持续到10 h时,HSP70 mRNA的转录水平升到最高,分别为对照组的9.59和11.46倍;HSP90 mRNA的转录水平在应激初期（1～2 h）急剧升高（P＜0.01）,运输应激2 h时,淋巴结和脾脏中HSP90 mRNA的转录水平分别为对照组的59.67和13.03倍,到运输应激持续到6 h后,升高不再显著。HSPs mRNA在淋巴结和脾脏细胞中的定位无肉眼可见的随着应激时间的延长而发生相应的变化,但HSP70和HSP90 mRNA之间的定位存在着差异。【结论】运输应激可以导致组织损伤和HSPs mRNA转录水平的变化,但对不同家族的HSPs mRNA转录水平的影响不同;HSP90 mRNA的转录水平与组织损伤有着良好的相关性,有望成为猪运输应激的判定指标之一。 相似文献
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固始鸡免疫器官内细胞凋亡基因Fas和FasL的动态表达 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】探讨固始鸡免疫器官内细胞凋亡基因Fas和FasL的动态表达。【方法】应用免疫组织化学技术和Leica 显微图像处理系统,对细胞凋亡基因Fas和FasL在固始鸡免疫器官内的动态表达进行研究。【结果】Fas在不同发育阶段固始鸡免疫器官内均有表达,但表达量均不相同,呈波浪样动态变化;Fas表达于固始鸡免疫器官内淋巴细胞细胞膜和细胞质,不表达于细胞核;Fas表达阳性细胞在固始鸡不同免疫器官内分布位置不同,呈散在或簇团状分布：法氏囊内阳性细胞主要分布于黏膜靠近上皮细胞的固有膜层内、淋巴小结与淋巴小结之间区域、淋巴小结边缘,淋巴小结内少量淋巴细胞也有Fas表达;胸腺内主要分布于胸腺小叶髓质,极少出现在皮质内;脾脏内主要分布于红髓和边缘区、淋巴小结周围和动脉周围淋巴鞘周围的区域,动脉周围淋巴鞘极少有Fas表达,淋巴小结无Fas表达。FasL在固始鸡免疫器官内的表达与Fas相似,但表达量与Fas相比较少。【结论】细胞凋亡基因Fas和FasL参与了固始鸡免疫器官内淋巴细胞发育分化过程中的凋亡调控,并对免疫器官的稳定发挥重要作用。 相似文献
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热应激下肉鸡心肌的损伤和热休克蛋白的定位 总被引：6，自引：2，他引：4
将90只肉鸡随机分成A组(对照)、B组(热应激6h)、C组(热应激12h)、D组(热应激18h)、E组(热应激24h)和F组(热应激48h)。对各组受试鸡心肌进行病理组织学检查,并利用4种HSP单克隆抗体(HSP27、HSP60、HSC70和HSP86)对心肌纤维进行免疫组织化学染色。实验结果显示,热应激时心肌纤维的病理组织学损伤主要表现为心肌纤维变性和心肌纤维断裂;HSP27、HSP60、HSC70和HSP86在心肌纤维中的定位不尽相同,HSP27、HSC70,和HSP86在心肌纤维中有强阳性表达,但HSP60的阳性染色较弱。提示HSPs在心肌纤维内的广泛分布对保护心肌纤维方面可能起重要的作用。 相似文献
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将90只肉鸡随机分成A组(对照)、B组(热应激6 h)、C组(热应激12 h)、D组(热应激18 h)、E组(热应激24 h)和F组(热应激48 h).对各组受试鸡心肌进行病理组织学检查,并利用4种HSP单克隆抗体(HSP27、HSP60、HSC70和HSP86)对心肌纤维进行免疫组织化学染色.实验结果显示,热应激时心肌纤维的病理组织学损伤主要表现为心肌纤维变性和心肌纤维断裂;HSP27、HSP60、HSC70和HSP86在心肌纤维中的定位不尽相同,HSP27、HSC70和HSP86在心肌纤维中有强阳性表达,但HSP60的阳性染色较弱.提示HSPs在心肌纤维内的广泛分布对保护心肌纤维方面可能起重要的作用. 相似文献
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应用常规石蜡切片方法,H．E染色,观察鹌鹑免疫器官组织形态学特征。结果表明：1）鹌鹑法氏囊黏膜层有6～10个大小不一的皱襞,每个皱襞由10～12淋巴小结组成;2）胸腺被结缔组织分成许多不完全分开的胸腺小叶,胸腺小叶的髓质连在一起,髓质内含有胸腺小体,还有许多网状细胞团;3）脾脏包括被膜和实质,脾脏的被膜较厚,实质主要由淋巴组织构成,其中分布有大量已形成和正在形成的血管。该研究揭示了8日龄鹌鹑免疫器官的具体发育状况,为鹌鹑发育生物学提供资料,为其疾病诊断及治疗提供依据。 相似文献
8.
运输应激猪肝脏中热应激蛋白的定位与表达 总被引：4，自引：2，他引：4
利用免疫组织化学定位方法和Western blot技术，对长途运输试验猪肝脏中5种不同分子量的热应激蛋白HSP70、HSP72、HSP86、HSP90和HSP27进行定位和表达。所有长途运输后应激猪和对照猪肝脏组织中均同时检测到了上述5种HSP。肝细胞胞浆和胞核均显示阳性信号，但HSPs在肝细胞中的定位有差异，大多数HSP70、HSP72和HSP27主要分布于肝细胞胞浆内，而HSP90和HSP86阳性颗粒在核内的分布比其在胞浆中的分布更为明显。肝小叶周边区有明显颗粒变性和脂肪变性的肝细胞中HSPs的阳性染色信号较弱。6h的长途运输应激后，与对照组相比，HSPs在肝脏组织中的表达量存在差异，表现为HSP70家族的HSP70和HSP72的表达没有明显的升高（P＞0．05），HSP90家族的HSP90的表达出现极显著的增加（P＜0．01），然而，HSP90家族的HSP86和小分子量家族的HSP27的表达量呈现明显的下降（P＜0．05）。 相似文献
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《沈阳农业大学学报》2019,(6)
为探讨抗应激添加剂对肉牛因运输应激导致机体应激蛋白表达波动的影响,揭示抗应激添加剂的作用以及肉牛运输应激发生的分子机理奠定理论基础,本试验选择27头体重和体况相近的健康出栏育肥辽育白牛,随机分成3组(n=9),其中对照组饲喂常规基础饲粮,2个添加剂组饲粮中分别添加抗应激1号和2号,饲喂10d后,在20℃、相对湿度51%的环境条件下,以50～60km·h-1的速度在公路上运输5h,分别采集运输前及运输后的肉牛血液及运输后的肉牛肌肉组织,制备血清,提取组织RNA及蛋白,采用ELISA、qRT-PCR、Western Blotting等方法分别检测血清中HSP70含量和肌肉组织中应激蛋白HSP27、HSP70及HSP90的mRNA和蛋白水平的表达量。结果表明:运输后各组肉牛血清HSP70含量显著高于运输前(p0.05);添加剂组同对照组相比,运输前后血清HSP70均明显下降(p0.05或p0.01)。抗应激1号组肌肉组织HSP27、HSP70和HSP90的mRNA相对表达量较对照组明显下降(p0.05),抗应激2号组肌肉组织中HSP90mRNA的表达量较抗应激1号组显著升高(p0.05)。两个抗应激添加剂组肌肉组织HSP70和HSP90的蛋白表达量较对照组明显减少(p0.05)。运输使肉牛血清和肌肉组织中应激蛋白含量增加,而抗应激添加剂可影响运输后肉牛血清及肌肉组织中应激蛋白的水平,尤以抗应激1号作用更明显。 相似文献
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奶山羊淋巴器官肥大细胞的分布 总被引：1，自引：1，他引：1
应用改良的甲苯胺兰染色方法观察奶山羊胸腺、脾和淋巴结内肥大细胞的分布情况，结果表明：1、在胸腺只分布于髓质，皮质未见分布；2、脾脏内的肥大细胞主要分布于白髓的脾小体周围；3、在淋巴结内肥大细胞密集于淋巴小结周围区，在中央区则少见，但在髓质内可见有弥散性分布。 相似文献
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为了探讨肥大细胞(MC)在鸡胚免疫器官中的作用,并提供组织形态学依据,对不同日龄鸡胚胸腺、法氏囊、脾脏采用Carony's液固定,阿尔新兰染色-藏红O复染(alcian blue-safrianin O,AB/SO)并对其肥大细胞(Mast cell,MC)的形态、分布及数量变化进行观察.结果表明,Carnoy's液固定,AB/SO染色可以清晰地显示MC的组织结构,MC呈圆形、椭圆形和不规则形,大小不一;胸腺中MC主要分布在髓质,并有少量分布于血管和小叶间结缔组织;法氏囊中MC在淋巴小结周围的组织中分布;脾脏中MC分布在淋巴小结周围,血窦、血管中偶见.18日龄前脾脏、19日龄前法氏囊、20日龄前胸腺中MC的数量与器官发育呈正相关,其后MC的数量下降是否与MC的排出有关尚不清楚. 相似文献
12.
热休克蛋白（Heat shock proteins,HSPs）作为一类重要的非特异性细胞保护蛋白,在免疫细胞应激耐受和应激保护中发挥着重要作用,其分子伴侣和抗细胞凋亡作用对于维持免疫细胞生存和内环境的稳定具有重要意义.热休克蛋白70（HSP70）和小分子热休克蛋白（Small heat shock proteins,sHSPs）中的HSP27是HSPs家族中的重要成员,也是近年来被广泛关注的研究对象,已经证实在参与调解细胞的增殖、分化和细胞凋亡过程中起到重要的作用.文章就HSP70/HSP27在热应激条件下对免疫细胞的保护作用进行了综述,对该领域中存在的问题进行了回顾,并对其发展前景进行了展望. 相似文献
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运输应激猪肝脏中热应激蛋白的定位与表达 总被引：1，自引：0，他引：1
利用免疫组织化学定位方法和Westernblot技术 ,对长途运输试验猪肝脏中 5种不同分子量的热应激蛋白HSP70 、HSP72 、HSP86、HSP90 和HSP2 7进行定位和表达。所有长途运输后应激猪和对照猪肝脏组织中均同时检测到了上述 5种HSP。肝细胞胞浆和胞核均显示阳性信号 ,但HSPs在肝细胞中的定位有差异 ,大多数HSP70 、HSP72 和HSP2 7主要分布于肝细胞胞浆内 ,而HSP90 和HSP86阳性颗粒在核内的分布比其在胞浆中的分布更为明显。肝小叶周边区有明显颗粒变性和脂肪变性的肝细胞中HSPs的阳性染色信号较弱。 6h的长途运输应激后 ,与对照组相比 ,HSPs在肝脏组织中的表达量存在差异 ,表现为HSP70 家族的HSP70 和HSP72 的表达没有明显的升高 (P >0 .0 5 ) ,HSP90 家族的HSP90 的表达出现极显著的增加 (P <0 .0 1) ,然而 ,HSP90 家族的HSP86和小分子量家族的HSP2 7的表达量呈现明显的下降 (P <0 .0 5 )。 相似文献
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以小鼠H22腹水型肝癌和L615白血病为实验模型，采用榄香烯或／和热休克等为应激原(stressor)，对小鼠H22腹水型肝癌细胞和L615白血病细胞进行不同浓度榄香烯、不同时间热休克处理，用透射电镜观察肿瘤细胞的形态变化；采用直接免疫荧光法流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡百分率及对肿瘤细胞膜HSP70、HSP90表达的影响；进而分离纯化不同应激原(榄香烯、丝裂霉素-C)诱导的H22和L615肿瘤细胞的HSP70－肽复合物，并用之免疫Balb/c和615小鼠，进行体内抗瘤免疫效应的研究。透射电镜显示，榄香烯或热休克处理都能引起2种肿瘤细胞的凋亡和坏死，L615白血病细胞较H22肝癌细胞更敏感，形态学变化更剧烈；流式细胞术检测进一步证明，榄香烯与热休克都能诱导2种肿瘤细胞发生凋亡，两者复合作用更能促进肿瘤细胞的凋亡，在一定范围内L615细胞凋亡与榄香烯的浓度和热休克的时间呈明显的依赖关系；用榄香烯或MMC诱导的2种肿瘤细胞分离纯化的HSP70－肽复合物给Balb/c和615小鼠进行主动免疫，免疫组小鼠在1个月内全部存活。而buffer D免疫对照组小鼠无一存活。 相似文献
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【目的】探讨‘岷县黑裘皮羊’不同组织器官中热休克蛋白60(HSP60)的表达差异及其规律.【方法】以3头成年雄性‘岷县黑裘皮羊’为研究对象,屠宰后采集心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉和睾丸组织,利用实时荧光定量PCR、免疫组织化学染色和Western-Blotting检测不同组织中HSP60的表达差异及规律.【结果】‘岷县黑裘皮羊’不同组织中均可见HSP60基因和蛋白的表达且存在一定的差异,心脏组织中HSP60基因和蛋白表达最高,脾脏组织中表达最低;心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉和睾丸组织切片中均有HSP60的阳性表达,心脏组织着色最深.【结论】HSP60可能对维持心脏或心肌细胞的功能具有重要调节作用,上述结果为今后HSP60基因功能的研究以及绵羊抗逆性研究提供参考依据. 相似文献
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【目的】探究热休克蛋白基因在氧化应激和姜黄素作用下的表达差异，了解姜黄素药效的发挥与热休克蛋白基因表达变化的关系，进一步探讨热休克蛋白对氧化应激条件下鱼类肝细胞中的功能，为鱼类氧化应激的毒理学机制及姜黄素的药理学机制提供理论资料。【方法】对24 h姜黄素预处理(保护组)与无姜黄素预处理(对照组)的罗非鱼肝细胞分别进行0、1、2.5 h的H2O2应激，并对肝细胞5种高分子热休克蛋白基因(HSP70、HSP90α、HSP90β、HSP60、HSP75)和5种小分子热休克蛋白基因(HSP30、HSPB1、 HSPB7、HSPB8、HSPB11)的表达水平进行qPCR检测。【结果】与不经H2O2处理(0 h)相比，H2O2作用1 h能显著提升HSPB1表达量，降低HSP30表达量；H2O2作用2.5 h能显著提升HSP90a、 HSPB1的表达量。姜黄素预处理24 h能显著提升HSP70、 HSP90α、HSP30、HS... 相似文献
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肉鸡HSP70的基因克隆、原核表达及单克隆抗体制备 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】制备高特异性的肉鸡热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）单克隆抗体,研究肉鸡HSP70与热应激损伤的关系。 【方法】 利用RT-PCR方法扩增肉鸡HSP70 mRNA,将其扩增产物克隆到PGEM-T Easy 载体和原核表达载体pET-28a(+)上,进一步转化至大肠杆菌BL-21中,用IPTG诱导表达重组肉鸡HSP70。以纯化的重组肉鸡HSP70制备多克隆抗体,免疫印迹分析说明重组肉鸡HSP70具有很好的免疫原性。以纯化的重组肉鸡HSP70免疫Balb/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。【结果】获得2株分泌肉鸡HSP70单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进一步通过免疫印迹分析筛选出1株高特异性的肉鸡HSP70单克隆抗体,命名为BH70-1。 【结论】免疫组织化学结果显示,单克隆抗体BH70-1是一种理想的抗体。 相似文献
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本试验建立了不同温度、不同时间热应激实验小鼠动物模型,采用Real-time PCR和Western-blot方法检测了小鼠睾丸组织热应激蛋白70(HSP70)在mRNA和蛋白质水平的表达规律。结果表明:25℃时,HSP70在mR-NA和蛋白质表达水平没有变化;在31℃、34℃和37℃时,随应激时间的延长,HSP70mRNA和蛋白质的表达均呈现先升高后下降的趋势;40℃时,HSP70mRNA和蛋白质始终持续高表达。结论:小鼠受热应激后,睾丸组织HSP70mRNA和蛋白质均随着温度和时间的增加呈规律性变化,本研究为探索HSP70对精液品质的影响奠定了基础。 相似文献
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荧光定量RT-PCR法检测运输应激猪热休克蛋白mRNA转录水平 总被引：13，自引：0，他引：13
【目的】探讨应激时热休克蛋白mRNA转录水平的变化。【方法】根据HSP90、HSP70和GAPDH mRNA序列，设计并合成引物，将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体，重组质粒经筛选、鉴定，体外转录出RNA，梯度稀释作为阳性模板，用于标准曲线的制定和样品检测，建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台，并用于检测长途运输猪心脏和肝脏中HSP70及HSP90 mRNA转录水平的改变。【结果】经1、2、4、6和10 h的运输应激后，组织中HSP70 mRNA的转录水平随着运输应激时间的延长一直呈现出上升的趋势，运输应激到10 h时HSP70 mRNA的转录水平升到最高，肝脏和心脏组织中HSP70 mRNA的转录水平分别为对照组的2.5和4.1倍；HSP90 mRNA的转录水平则随着运输应激时间的延长呈下降趋势。【结论】运输应激可以影响HSP mRNA转录水平的变化，并且对不同家族的HSP mRNA转录水平的影响不同；HSP70 mRNA的转录水平有望成为猪运输应激的判定指标之一。 相似文献
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【目的】对1例新生死亡的转基因克隆牛的脑和免疫器官进行观察,分析和评价克隆牛脑和免疫器官的发育状况。【方法】采用病理解剖、组织学常规石蜡切片-HE染色技术,对转基因克隆牛的脑部和免疫器官的组织结构进行系统观察与分析。【结果】该克隆牛体格偏大,头颅骨质较一般犊牛坚硬,免疫器官外观无明显变化。镜下观察显示,大脑皮质层次清晰,有轻度充血和1处明显的点状出血;小脑皮质可分为明显的3层结构,蛛网膜有轻度充血;脾脏红髓轻度淤血并有散在含铁血黄素沉着;白髓中央动脉周围淋巴鞘清晰可见,脾小体数量较多,但脾小体和动脉周围淋巴鞘内淋巴细胞数量较少;淋巴结被膜薄,小梁不发达,皮质淋巴细胞多而密集,但典型的具有生发中心的淋巴小结较少;髓索不明显,髓质部毛细血管扩张充血;胸腺被膜和小梁上血管可见充血现象;皮质部淋巴细胞丰富,可见散布的胸腺细胞;髓质淋巴细胞密集,细胞间可见数量较多的巨噬细胞;嗜酸性胸腺小体易于辨认,但发育不完全。【结论】该例克隆牛脑发育较为成熟,但免疫器官发育不均衡。 相似文献