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传染性法氏囊病病毒抗原的培养提纯及其单克隆抗体的特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
在制备传染性法氏囊病病毒(IBDV)单克隆抗体前，首先要提纯IBDV抗原，然后才能免疫BALB/c小鼠，检测和筛选阳性孔，克隆阳性孔并制备单克隆抗体。本试验采用蔗糖密度梯度离心法和超滤膜超滤浓缩法提纯IBDV，并以纯化抗原免疫BALB/c小鼠，成功地制备出抗IBDV单克隆抗体。1 材料和方法1.1 材料IBDVD78、NDV、IBV和MDV均由哈兽研生物技术国家重点实验室提供；SPF鸡胚，购自黑龙江省生物制品一厂。1.2 鸡胚成纤维原代细胞制备按Hanson等描述方法制备鸡胚成纤维细胞。1.3 病毒繁殖将IBDVD78以0.2％的剂量接种在已长成单层的鸡… 相似文献
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麻雀体内传染性法氏囊病病毒的分离鉴定及理化特性研究 总被引：5，自引：1，他引：4
从传染性法氏囊病（ＩＢＤ）阳性麻雀体内分离到了一株病毒，用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体心ＥＬＩＳＡ试验和ＤＩＧ－标记ＩＢＤＶｃＤＮＡ探针班点杂交试验证明该病毒为ＩＢＤＶ。病毒可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞，产生细胞病变效应（ＣＰＥ）。病毒血清型为Ｉ型，病毒代谢抑制试验证明其基因组为ＲＮＡ，病毒核酸的电泳图谱呈两条特征带。病毒对乙醚不敏感ＰＨ２．０不能灭活可使病毒失感染性，５６℃作用３小时 相似文献
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马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的… 总被引：5，自引：0，他引：5
用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳 相似文献
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马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体 总被引：3，自引：1，他引：2
用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的２株单克隆抗体细胞株，定名为ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＭＤＶ均呈阳性反应；单抗ＢＡ４只对Ⅰ型ＭＤＶ（包括ＣＶＩ９８８疫苗株）呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证２株单抗识别的是ＭＤＶ糖蛋白Ｂ抗原。 相似文献
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禽传染性支气管炎云分离株，经鸡胚增殖、密度梯度离心提纯后，制成佐剂抗原，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，应用ＥＬＩＳＡ监测小鼠地ＩＢＶ的应答能力。在ＰＥＧ－６０００（聚乙二醇）的作用下，小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。对分泌抗体阳性较强的杂交瘤细胞。应用有限稀释法克隆３次以上。获得９株抗ＩＢＶ阳性杂交瘤细胞，其中７株能稳定分泌抗ＩＢＶ单克隆抗体。初步应用研究表明，该７株杂交瘤细胞所和的单克隆抗体，不但能区分ＩＢ 相似文献
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鸡,鸭体内传染性法氏囊病病毒的分离及理化性质比较 总被引：2，自引：0，他引：2
从疑似传染性法氏囊病（ＩＢＤ）病鸡及同群饲养的鸭体内各分离到１株病毒，用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ试验证明两病毒均为ＩＢＤＶ，病毒血清型为Ⅰ型。病毒可致死鸡胚，适应于鸡胚成纤维细胞并产生细胞病变（ＣＰＥ）。理化性质比较表明，两病毒为同源ＩＢＤＶ。研究表明，鸭可成为ＩＢＤＶ的携带者或传染源。 相似文献
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用制备的抗鸡ＩｇＧＭｃＡｂ－ＨＲＰ作为免疫试剂，以ＩＢＤＶ的高免阳性鸡血清作为抗体，用间接ＥＬＩＳＡ法检测经ＩＢＤＶ强毒攻击的各脏器含毒情况，同时与ＡＧＰ法进行比较。结果表明两种方法具有良好的平行关系，间接ＥＬＩＳＡ法比ＡＧＰ法更为敏感；攻毒鸡的法氏囊带毒最多，而在脾、胸腺、肾中均未检出病毒抗原。 相似文献
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鸡传染性法氏囊病 (ＩＢＤ)是鸡的一种急性高度接触性传染病 ,其病原为鸡传染性法氏囊病病毒 (ＩＢＤＶ)。ＩＢＤＶ主要侵害鸡的体液免疫中枢器官———法氏囊 ,导致免疫抑制 ,从而降低机体对其他传染病的免疫反应。鸡群早期感染ＩＢＤ以后 ,对其他病毒病和细菌病的易感性增高 ,同时影响新城疫、马立克氏病等的免疫效果。ＩＢＤＶ的某些毒株能使 3周龄以上的鸡发病 ,其死亡率可高达 1 0 0 % ,而且ＩＢＤＶ变异株和超强毒株的出现 ,也使ＩＢＤ本身免疫经常失败。因此本病已成为世界上最严重的传染病之一。ＩＢＤＶ无囊膜 ,属双股双链ＲＮＡ病… 相似文献
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表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因的重组鸡痘病毒ＦＰＶ－ＶＰ２，该病毒在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒，经翅皮下５×１０５ＰＦＵ／羽免疫１日龄ＳＰＦ鸡，免疫后４周以１００ＬＤ５０／羽ＩＢＤＶ超强毒株Ｇ株攻毒，获得了５／６的保护，但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩。实验结果证明了ＶＰ２是ＩＢＤＶ的宿主保护性抗原，提示Ｔ细胞介导的免疫可能在ＩＢＤＶ的免疫中起着较为重要的作用。本研究为ＩＢＤＶ重组病毒疫苗研制进行了有益探索。 相似文献
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应用斑点酶联免疫吸附试验快速检测传染性法氏囊病病毒 总被引：1，自引：0，他引：1
对传染性法氏囊病(ＩＢＤ)的实验室诊断,过去多用琼扩试验、中和试验等方法,但这些方法或不敏感、或受条件限制不易推广。为此,作者利用酶标单克隆抗体建立了快速检测ＩＢＤＶ的Ｄｏｔ-ＥＬＩＳＡ方法,对人工感染样品和现场发病或感染鸡群的检测获得满意结果。1 材料和方法1.1 材料1.1.1 病毒:ＩＢＤＶ强毒Ｊ1Ｃ7Ｅ6购自中国兽医药品监察所,新城疫病毒(ＮＤＶ)、传染性支气管炎病毒(ＩＢＶ)、传染性喉气管炎病毒(ＩＬＴＶ)由扬州大学农学院微生物组提供。1.1.2 ＩＢＤＶ标准阳性血清和ＳＰＦ鸡血清:扬州大学农学院微生物组提供。ＩＢＤ… 相似文献
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胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用 总被引：2，自引：0，他引：2
应用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体致敏的聚苯乙稀胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集和胶乳凝集抑制试验。ＬＰＡ可检测出６ｍｇ／Ｌ的ＩＢＤＶ蛋白。比较了ＬＰＡ，直接萤光抗体试验和琼脂扩散沉淀试验三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性，敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ的检出率高于ＡＧＰ，ＬＰＡ和ＤＦＡ检测结果的符合率为８６％。 相似文献
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鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
用纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＣＡ毒株和Ｂ８７株混合抗原脾内免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，采用间接ＥＬＩＳＡ方法进行筛选，共检出３１个原始阳性孔，阳性率为１５．４％，选择其中３个孔，分别进行３次克隆，最后获得３株杂交瘤细胞，命名为Ｂ２８、Ｂ３４、Ｃ２８。通过与其它禽源病毒的交叉试验证明，分泌的抗体均具有高度特异性。３株细胞的平均染色体数分别为９４、８７、８９ 相似文献
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表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免？… 总被引：3，自引：0，他引：3
以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因的重组鸡痘病毒ＦＰＶ－ＶＰ２,该病毒性在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒,经翅皮下５×１０＾５ＰＦＵ／羽免疫１日龄ＳＰＦ鸡,免疫后４周以１００ＬＤ５０／羽ＩＢＤＶ超强毒株Ｇ株攻毒,获得了５／６的保护,但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩,实验结果证明了ＶＰ２是ＩＢＤＶ的宿主保护性抗原,提示Ｔ细胞介导的免疫可能在ＩＢＤＶ 相似文献
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抗传染性以气管炎病毒单克隆抗体的研究 总被引：3，自引：1，他引：2
经密度梯度离心法提纯鸡胚尿囊液中的传染性支气管炎病毒Ｈ１２０，获得了较纯的Ｈ１２０抗原。动用细胞杂交瘤技术，区获得了２３株阳性杂交瘤细胞株。对２３株阳性杂交瘤细胞株进行特异性鉴定，其中３株稳定白，命名Ｍｃ。用单抗介导的间接免疫荧光抗体技术检测鸡鸡胚尿囊细胞中ＩＢＶ的方法测定Ｍｃ的ＩＢＶ的反应谱，证明Ｍｃ反应谱较广，是１株ＩＢＶ群特异性单克隆抗体。 相似文献
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用市售的腆类化合物、氯制剂、双季铵盐类化合物、酚类制剂和醛类制剂与鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）相混合，在４℃和３０℃作用２４ｈ，用１０００ＩＤ５０的剂量作用后的病毒液感染２３日龄健康ＡＡ鸡。感染后７２ｈ扑杀试验鸡，取期腔上囊，用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒检测ＩＢＤＶ抗原，仍呈阳性反应；用３ｍＬ／Ｌ的甲醛溶液与ＩＢＤＶ病毒液混合，在３７℃作用２４、３６和４８ｈ后，按以上剂量感染鸡，感染后７２ｈ扑杀，取其腔上囊，用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒 检测ＩＢＤＶ抗原，全部呈阴性。 相似文献
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鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联油乳剂灭活疫苗研制及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
用新城疫病毒（ Ｎ Ｄ Ｖ） Ｌａ Ｓｏｔａ 株、鸡传染性支气管炎病毒 （ Ｉ Ｂ Ｖ） Ｍ４ １ 株接种鸡胚, 收获含毒鸡胚尿液。用传染性法氏囊病病毒 （ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ） 地方强毒 Ｈ Ｂ９ ０ ９ 株接种３０ ～４０ 日龄肉用鸡, 发病后取囊组织 （ 或收集 Ｉ Ｂ Ｄ 典型发病鸡囊组织） 制备成含毒组织悬液。将三种病毒液按一定比例混合, 制备成三联油乳剂灭活苗。三联苗免疫１８ 日～２８ 日龄雏鸡, 免疫后２１ 天攻毒测保护力, 三种传染病保护率均在９０ ％ ～１００ ％ , Ｎ Ｄ Ｈ Ｉ抗体≥１∶３２ , Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ａ Ｇ Ｐ阳性率１００ ％ , Ｉ Ｂ Ｖ Ｎ 抗体≥１∶８ , 疫苗免疫期可达４ 个月以上。疫苗在４ ℃～８ ℃保存期为１８ 个月, １０ ℃～２０ ℃保存为６ 个月, 该疫苗在全省不同地区、不同品种鸡应用１５ 万羽份, 取得理想免疫效果。 相似文献
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用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ 相似文献
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传染性法氏囊病病毒的生态学与流行病学研究 总被引：18，自引：3，他引：15
血清学调查结果表明,麻雀、鸭、鹅等均可自然感染传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）,其血清阳性率分别为７．４％（４／５４）,９５．５％（３６３／３８０）和９．４％（１１／１１７）。从鸭和麻雀分离到的ＩＢＤＶ可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞,并产生ＣＰＥ,对ＳＰＦ鸡有致病性。病毒核酸和结构蛋白的电泳分析结果表明,鸡源、鸭源和麻雀源ＩＢＤＶ均有２条核酸带,５条蛋白带,毒株间的病毒核酸及结构蛋白电泳迁移率无显著差异,但其结构蛋白的相对含量不尽一致。经鉴定,鸡源、鸭源和麻雀源ＩＢＤＶ均属血清Ⅰ型,为同源病毒。本研究结果提示,鸡并非是ＩＢＤＶ的唯一自然动物宿主,非鸡禽鸟类宿主的存在可引起ＩＢＤ的传播和续源流行,也为ＩＢＤＶ的变异提供了特殊的生态条件,成为诱导ＩＢＤＶ变异的另一重要因素。 相似文献
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同胚增殖鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果观察及免疫应答反应 总被引：6，自引：0，他引：6
鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）和鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）混合在同一鸡胚中增殖,当ＮＤＶ和ＩＢＶ接种浓度控制在一定范围时,最佳收毒时间选择使ＮＤＶ有足够时间增殖到最佳滴度,且在这一时间内不至于因孵育时间过长而致ＩＢＶ毒力减弱。结果表明ＮＤＶＬａｓｏｔａ株经１０倍稀释分别与４株ＩＢＶ１０００倍稀释液等体积混合后接种,能在同一鸡胚中正常增殖,即９６ｈ收毒,血凝（ＨＡ）方法测定两种病毒的血凝价均能达到最佳滴度,其血凝价不低于各自单独增殖的滴度。４种ＩＢＶ株与ＮＤＶ同胚增殖的ＨＡ滴度进一步证实,在合适的条件下,ＩＢＶ均不对ＮＤＶ的复制产生干扰作用,４种ＩＢＶ的血凝价无明显差异。免疫试验中用同胚增殖两种病毒二联苗接种,鸡体血清中可产生抗两种病毒的ＨＩ抗体,与各自单独接种时的ＨＩ抗体水平几乎一致。本试验中制备的ＩＢ血凝抗原在４℃保存一个月,其血凝活性保持不变。ＩＢＶ微量血凝抑制（ＨＩ）试验特异性测定结果证实,用自制ＩＢＶ血凝抗原进行ＨＩ试验检测鸡ＩＢ阳性血清均能产生稳定的特异性反应,并且无交叉反应。说明ＨＩ试验是检测ＩＢＶ抗体水平的有效可行的方法。 相似文献