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本文为探析新生猪仔的流行性腹泻病毒，构建猪流行性腹泻病毒蛋白间接的ELISA检测方法，从新分离PEDV流行毒株中扩增其N基因，并将N基因克隆至DNA原核表达载体中构建重组质粒，经过诱导的重组蛋白呈可溶性表达。将纯化的N蛋白作为包被抗原建立ELISA检测方法，并且对各种检测条件进行优化优化后确定N蛋白最佳包被条件为37度，该间接ELISA方法为PEDV诊断和流行病学调查提供了有益参考。 相似文献
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为了建立更加敏感、特异、准确、有效地检测抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法,本研究利用RT-PCR方法分别扩增出PRRSV VR2332毒株的GP4和N蛋白完整编码基因,将2种基因片段分别和共同插入原核表达载体pET-32a中,成功构建重组质粒pET-32a-GP4、pET-32a-N和pET-32a-GP4-N。将3种重组质粒分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达出GP4蛋白、N蛋白和GP4-N融合蛋白,并对表达出的蛋白进行纯化。将3种已纯化的重组蛋白分别作为间接ELISA的包被抗原,通过不断优化反应条件,最终建立了检测抗PRRSV抗体的间接ELISA方法。分别使用该3种方法检测从河南省多个地区收集的200份猪血清样品中的抗PRRSV抗体,并与商品化试剂盒进行比较,结果显示,GP4蛋白做抗原时检测阳性符合率为82.7%,N蛋白做抗原时检测阳性符合率为87.2%,GP4-N融合蛋白做抗原时检测阳性符合率为85.5%;因此,N蛋白是间接ELISA方法检测抗PRRSV抗体的优势包被抗原。 相似文献
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为建立一种敏感、特异、快速、高通量的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体血清学检测方法,本研究利用原核表达技术表达了PRRSV M蛋白,将纯化后的重组M蛋白作为包被抗原建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。参照已发表的PRRSV基因组M基因序列,设计合成1对特异性引物,RT-PCR扩增了长约435 bp的M基因片段,将目的片段亚克隆至pET32a(+)表达载体中,经IPTG诱导获得了以包涵体形式表达的重组M蛋白,重组蛋白纯化后,免疫印迹检测结果表明具有良好的抗原性和特异性。以重组M纯化蛋白为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,该方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪圆环病毒2型(PCV2)其他6种常见猪病病原的阳性血清均为阴性;该方法批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;该方法与商品化ELISA试剂盒的符合率为95.3%。本研究建立的M-ELISA检测方法将为猪群免疫PRRS疫苗后抗体水平监测及PRRSV野毒感染的快速诊断与流行病学调查等提供了一种简便易行、快速、高通量的血清学抗体检测方法。 相似文献
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为建立绵羊支原体(Mycoplasma ovis)的血清学检测方法,根据GenBank收录的绵羊支原体HSP70蛋白C端的基因序列(登录号：CP006935.1),构建了重组原核表达质粒。通过原核表达获取重组蛋白,并将纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立了绵羊支原体间接ELISA抗体检测方法。结果显示,成功构建了绵羊支原体HSP70蛋白的重组原核表达质粒;重组蛋白在大肠埃希氏菌BL21(DE3)感受态细胞中,同时以可溶性蛋白和包涵体蛋白的形式表达;以重组蛋白作为包被抗原建立的绵羊支原体间接ELISA抗体检测法,抗原包被最佳浓度为4μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,酶标二抗最佳稀释度为1∶2 000。建立的ELISA方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,为绵羊支原体的检测及试剂盒的开发提供了技术支持。 相似文献
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为了建立评价伪狂犬病疫苗免疫效果的方法,应用PCR方法扩增gB基因的主要抗原表位区序列,大小为768bp,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切后克隆至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pETgB768,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,通过IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白的表达情况及其反应原性。用纯化的gB768蛋白作为包被抗原建立间接gB768-ELISA检测方法,试验结果表明,该方法具有良好的敏感性、特异性、重复性。用该方法检测128份临床送检猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果进行比较,符合率为93.8%。该方法的建立为猪伪狂犬病疫苗免疫效果的评估奠定了基础。 相似文献
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为建立可检测鸡传染性法氏囊病血清抗体的间接ELISA检测方法,本研究经RT-PCR扩增IBDV VP2（1nt-708nt）基因片段,并应用pET28a载体进行原核表达,亲和层析纯化重组蛋白作为包被抗原,建立检测IBDV血清抗体的间接ELISA方法。应用所建方法和IDEXX试剂盒,对采自不同地区的156份鸡血清样品进行平行检测和比较。结果表明,RT-PCR扩增获得708bp的VP2基因片段;含重组表达质粒pET28a-VP2的大肠杆菌BL21经IPTG诱导后,表达了约27kDa的VP2重组蛋白,表达量约占菌体蛋白的30.1%;建立的间接ELISA检测方法与IDEXX试剂盒比较,其特异性、敏感性和符合率分别达到90.24%、95.65%和94.23%。由此可见,本研究所建立的间接ELISA方法敏感、特异,适用于IBDV血清抗体的检测。 相似文献
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牛病毒性腹泻病病毒NS3表位串联蛋白表达及抗体间接ELISA方法的建立 总被引：2，自引：1，他引：1
为建立一种有效的牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体检测方法,作者将BVDVNS3蛋白2个抗原表位的编码核酸序列进行串联,构建重组表达载体pET-30a-EXnN,并在原核表达系统中表达了重组蛋白。选取包含12个表位肽的重组蛋白(r-BVDV-EX6N)作为包被抗原建立NS3蛋白抗体间接ELISA方法。该方法的特异性和稳定性良好,与2种商品化试剂盒的符合率分别为96.05%和78.95%。试验结果表明建立的ELISA方法可用于BVDV NS3蛋白抗体的检测。 相似文献
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为表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G),本研究通过RT-PCR方法克隆RV Flury LEP病毒株G基因,将其克隆至质粒pFastBacHTα中,重组质粒pFastBac-RV-G转化DH10Bac感受态细胞,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-RV-G,将其转染昆虫细胞sf21获得含有G基因的重组杆状病毒.采用SDS-PAGE和western blot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析,以重组G蛋白作为包被抗原的ELISA检测36份犬血清样品.结果表明,在Bac-to-bac杆状病毒系统中表达的RV G蛋白能与his-tag单克隆抗体及RV阳性血清发生特异性反应,其相对分子量为60 ku;与以RV为包被抗原的商品化ELISA试剂盒相比,以重组RV G蛋白为抗原建立的间接ELISA的敏感性、特异性和符合率分别为80%、81.8%和80.6%,表明杆状病毒系统表达的RV G蛋白是检测RV抗体的理想抗原蛋白,作为一种亚单位疫苗具有潜在的应用前景. 相似文献
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犬的皮肤病是一个常见病,虽不会直接危及犬的生命,却可以使犬奇痒、烦躁,影响休息和食欲,降低其抵抗力。若为宠物犬,还会降低它的观赏性和玩赏性,失去宠物犬应有的价值。犬皮肤病的病因有很多,有寄生虫性、真菌性、湿疹性、激素失调性及微量元素或维生素缺乏等。对于病原性和营 相似文献
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《科技视界》2017,(22)
本文运用Va R即在险价值的概念,针对现实生活中的金融投资问题,运用历史数据模型和偏t正态分布模型对公司下一个收益周期的收益情况进行预测,并给出最优的投资金额。运用历史数据方法得出,在投资1000万元的前提下能以95%的置信度保证损失的数额不会超过多少9万元,并且若使一个周期内Va R>=10万元的可能性不大于5%,初始投资额最多应为1111.11万元。运用偏t正态分布模型得出,当投资1000万元时,可以保证亏损值在95%的置信区间内,不超过7.95万元;如果要求在一个周期内的损失超过10万元的可能性不大于5%,那么初始投资额最多应为1257.86万元。 相似文献
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影响饲用酶制剂选择及使用效果的因素分析 总被引：4，自引：0，他引：4
饲用酶制剂作为一种新型、高效、无毒副作用和环保型的饲料添加剂，在动物生产中的使用效果已基本被饲料界和养殖业界所认可，但使用效果并不稳定。目前在业界流传较广的几种观点便很具代表性，如：“不会没用，用了不一定有用”是指酶制剂效果的不确定性，而“酶制剂有效，但不是每种酶制剂均有效”指的是目前市场上酶制剂产品的良莠不齐，同时由于质量、价格等差异，又出现了“低价的太低不敢用，高价的太高用不起”的现象。 相似文献
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采用L9(34)正交设计,利用草种组合、施肥量、播种方式、豆禾比例进行4因素3水平试验,探讨退耕坡地草地建设方式,试验结果表明:退耕坡地草地的建植首先需要考虑草种的搭配,其次是禾本科和豆科牧草的比例,第三是肥料的使用,第四是播种方式。在贵州中部地区退耕坡地适宜的草地建植方式为:草种为鸭茅+苇状羊茅+白三叶+多年生黑麦草,豆:禾=1:9,肥为N:P2O5:K2O=20:30:20,播种方式为翻耕条播。 相似文献
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高原鼠兔对退化草地人工植被稳定性的影响 总被引：5，自引：2，他引：5
对高原鼠兔活动在“黑土型”退化草地上建植的人工草地上用堵洞法进行了调查研究,结果表明:当高原鼠兔的有效洞口密度达到60个/hm2时,人工草地优良牧草的地上植物量只有未危害草地的12%,牧草高度、盖度、密度均有大幅度下降;当达到80个/hm2时,优良牧草的地上植物量只有未危害草地的4%,牧草高度、盖度、密度进一步下降,人工草地开始向建植前的“黑土滩”演替。高原鼠兔通过对人工草地种群特征、物种多样性、土壤结构等方面的影响,来制约人工群落的稳定性与可持续发展。 相似文献