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为了分离、纯化、培养猫子宫内膜上皮细胞并分析其生物学特性,本试验采用胰蛋白酶消化法+组织块培养法,于体外分离和培养子宫内膜上皮细胞,并采用免疫荧光法对其进行鉴定;测定第3代(P3)细胞生长曲线和群体倍增时间,比较P3和P6细胞克隆形成率。结果显示：猫子宫内膜上皮细胞呈典型铺路石状,细胞角蛋白染色呈阳性,符合内膜上皮细胞特征;P3细胞生长曲线呈典型S型;P3子宫内膜上皮细胞群体倍增时间为(22.73±2.05) h,其克隆形成率极显著高于P6(P<0.01)。结果表明：本试验采用胰蛋白酶消化法+组织块培养法分离获得的猫子宫内膜上皮细胞具有良好的体外增殖能力。 相似文献
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本试验旨在研究不同培养方法对山羊瘤胃上皮细胞生长及角蛋白18(CK18)表达量的影响。采集42日龄山羊的瘤胃上皮组织,分别采用酶消化法和组织块法对其进行体外培养。通过光学显微镜观察原代培养和传代培养阶段的细胞形态,检测第5代山羊瘤胃上皮细胞的生长曲线,并采用细胞免疫荧光法对山羊瘤胃上皮细胞进行鉴定。结果显示:1)经0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸消化获得的原代培养山羊瘤胃上皮细胞于2 d开始贴壁生长,5 d细胞开始明显增多,10 d细胞数量达到最大。2)经组织块法获得的原代培养山羊瘤胃上皮细胞于4 d开始"爬出"组织块,8 d细胞开始明显增多,14 d细胞数量达到最大。3)经免疫荧光染色显示2种方法获得的细胞胞浆内CK18均呈阳性表达且细胞纯度后者明显高于前者。4)组织块法获得的细胞CK18表达量显著高于酶消化法(P0.05)。综合得出,与酶消化法相比,应用组织块法可成功获得纯度更高的山羊瘤胃上皮细胞。 相似文献
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山羊乳腺上皮细胞的分离、培养与超微结构观察 总被引：16，自引：2，他引：16
从山羊乳腺取部分组织进行细胞培养，并通过控时消化分离纯化山羊乳腺上皮细胞，建立了山羊乳腺上皮细胞系。结果表明：用含150U／mL Ⅰ型胶原酶和100U／mL透明质酸酶的混合液，37℃消化组织块4h，可得到大量的分散单细胞用于原代培养，该法是获得山羊乳腺组织单细胞的适宜方法；以含10％胎牛血清和双抗的RP-M11640或DEME／F12培养液为基础液，在培养液中添加氢化考的松、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、表皮生长因子(EGF)及胰岛素一转铁蛋白一硒钠(ITS)对山羊乳腺上皮细胞的生长具有较明显的促进作用。上皮细胞显微和超微结构显示：山羊乳腺上皮细胞在体外培养过程中可形成岛屿状单层聚集和类似圆顶状的结构；传代培养到第7代的细胞仍增殖旺盛，细胞内有丰富的脂滴和高尔基小泡，细胞分泌活动旺盛。 相似文献
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《中国畜牧兽医文摘》2012,(10)
<正>取18日龄的SPF鸡胚,分别采用组织块培养法、胰蛋白酶、胶原酶I和嗜热菌蛋白酶消化法分离和体外培养小肠上皮细胞。结果表明:组织块培养法所获得的上皮细胞纯度较低;胰蛋白酶消化后多为单细胞,细胞贴壁和生长能力较弱;胶原酶Ⅰ单独消化50min或嗜热菌蛋白酶单独消化110min以及胶原酶Ⅰ、嗜热菌蛋白酶联 相似文献
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为了优化鸡胚小肠上皮细胞体外培养、纯化方法,本研究利用胶原酶对鸡胚小肠进行体外消化处理,利用酶消化法和细胞反复贴壁法对所培养细胞进行纯化,并绘制了纯化细胞的生长曲线.结果显示:利用1 mg/mL V型胶原酶对16胚龄的鸡胚小肠上皮组织进行体外消化,将获得的分离细胞培养在DM EM(Dulbecco's modified... 相似文献
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李艳徐凯赵国琦 《上海畜牧兽医通讯》2014,(1):8-11
本试验通过组织块培养法获得了奶牛乳腺上皮细胞,联合运用刮除法、相差消化和相差贴壁法、单克隆法对细胞进行纯化,应用倒置显微镜和β-酪蛋白表达检测了体外培养的奶牛乳腺上皮细胞的形态特征和乳蛋白表达,鉴定该细胞为上皮型细胞。 相似文献
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小鼠输卵管上皮细胞的原代培养及纯化方法研究 总被引：2，自引：0，他引：2
建立小鼠输卵管上皮细胞原代培养及纯化方法.小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用组织块培养法和酶消化法.酶消化法于37℃分为4个处理组进行.处理1以2.5 g/L胰酶+0.4 g/L EDTA消化5、10、20 min;处理2以0.5 g/L胰酶+0.08 g/L EDTA消化35、50、75 min;处理3以0.3 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60、90、240 min;处理4以2.5 g/L胰酶+0.4 g/L EDTA和0.3 g/L Ⅰ型胶原酶(1∶2)消化60 min,150 min.原代细胞纯化采用差速贴壁和反复差速贴壁法.传代采用胰酶两步消化法进一步纯化输卵管上皮细胞.组织块法原代培养成纤维细胞生长优势明显,传代纯化细胞效果不佳.用酶消化法原代培养时,处理1效果不理想;处理2采用3个消化时间时均取得比较理想的结果;处理3消化240 min时结果较好;处理4消化150 min效果较好.原代细胞纯化,反复差速贴壁得到的上皮细胞较纯,进一步传代纯化细胞取得了理想的结果.小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用酶消化法结合反复差速贴壁分离纯化细胞,传代采用两步消化法,可以成功地进行小鼠输卵管上皮细胞的分离纯化培养. 相似文献
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为体外培养纯化出稳定的奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞,试验通过外科手术的方法取妊娠后期或泌乳期的荷斯坦奶牛乳腺组织,分离乳腺腺泡,用组织块法体外培养奶牛乳腺细胞,应用差时胰酶消化法和差速贴壁法将奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞分别纯化出来,并用免疫组化的方法对细胞的纯度进行鉴定。结果表明:纯化的奶牛乳腺上皮细胞多为多角形,细胞核呈圆形或椭圆形,核仁清晰可见,多呈鹅卵石样或铺路石样生长,并可分泌乳滴,角蛋白-18反应阳性,波形蛋白反应阴性;纯化的奶牛乳腺成纤维细胞多为长梭形,呈旋涡状或放射状生长,角蛋白-18反应阴性,波形蛋白反应阳性;经纯化后2种细胞的纯度均可达95%以上,可满足后续试验的要求。 相似文献
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奶牛乳腺上皮细胞的原代培养及其生物学特性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
旨在从奶牛乳腺组织中分离原代乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）并传代培养后探究其生物学特性。本研究从屠宰场采集健康泌乳奶牛乳腺并采用改进的酶消化法从乳腺中分离得到原代奶牛乳腺上皮细胞,通过形态学观察、免疫荧光以及染色体核型分析的方法对其进行鉴定。同时,研究第3、第6和第9代乳腺上皮细胞的生长曲线、群体倍增时间和冻存复苏活力,检测不同代次细胞分泌乳蛋白、乳脂、乳糖的功能及泌乳相关基因的表达。结果表明,所分离的奶牛乳腺上皮细胞纯度较好,细胞生长呈现S型,3个代次细胞的群体倍增时间依次为34.87、41.45和65.04 h,冻存复苏活力为88%~93%;在细胞分泌功能方面,诱导培养2 d后均能检测到酪蛋白、甘油三酯和乳糖,且各代次间无显著差异;此外,3个代次的细胞诱导后均能表达乳成分合成相关基因。本研究成功培养了原代奶牛乳腺上皮细胞,并证明直到第9代细胞仍然具有正常的生物学功能,为体外探究乳腺细胞增殖与分化机制提供了良好的试验材料和技术支撑。 相似文献
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鸡胚盲肠上皮细胞原代培养与鉴定 总被引：2，自引：1，他引：1
为研究鸡E.tenella的宿主细胞--盲肠上皮细胞体外培养技术,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型,分别用胰蛋白酶法、胶原酶Ⅰ法、嗜热菌蛋白酶法、嗜热菌蛋白酶+胶原酶Ⅰ法和中性蛋白酶Ⅰ+胶原酶Ⅺ法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过测定细胞活力、细胞团块比例、总细胞产量和细胞团块产量,筛选出鸡胚盲肠上皮细胞最佳分离方法,并进行了纯化和培养,对培养细胞进行了鉴定.结果表明:嗜热菌蛋白酶消化、低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞,为最佳分离和纯化盲肠上皮细胞的方法;分离纯化的细胞接种后分别于第3-5天、第10-11天进入对数生长期,可存活14 d以上;经形态学观察、碱性磷酸酶染色、扫描电镜鉴定为盲肠上皮细胞,所分离的细胞培养至第4、7、11天时上皮细胞比例分别为81.67%、84.33%和72.00%.用该法可获得纯度较高的原代鸡胚盲肠上皮细胞. 相似文献
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试验旨在比较不同培养方法对驴皮成纤维细胞培养的效果,以便建立其体外高效快速的培养体系。采集6~7岁健康的新疆驴真皮组织,分别用组织块贴壁法和双酶消化法对驴皮成纤维细胞进行原代培养,并检测分析细胞的生长特点、生长速度、细胞周期与支原体污染等指标。结果显示,双酶消化法（0.25%胰酶处理1 h,再用0.5%胶原蛋白酶Ⅰ处理6 h）培养驴皮组织3 d后,成纤维细胞进入了对数增殖期,而组织块贴壁法则需要15 d;细胞周期经流式分析发现,处于G0/G1期与S+G2+M期的细胞均约为50%,其余5.17%细胞处于凋亡期,表明大多细胞处于分裂增殖的活跃期,细胞具有很强的活力;试验中培养的细胞均无支原体污染。综上,应用双酶消化法可快速、高效地建立驴皮成纤维细胞体外培养体系。 相似文献
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This study was aimed to compare different culture methods for donkey skin fibroblasts to establish a highly efficient and rapid culture system. The dermal tissue of the healthy and 6-7 year old Xinjiang donkey was cultured for primary cells of skin fibroblast with tissue explants adherent method and double enzyme digestion method. Then,the growth characteristics,proliferation,cell cycle and mycoplasma contamination were detected and analyzed. The results showed that the fibroblast cells entered the logarithmic growth phase after cultured for 3 days by double enzyme digestion(0.25% trypsin digestion for 1 h and then 0.5% collagenase Ⅰ for 6 h), while it required 15 days with tissue explants adherent method. Flow cytometry analysis showed that nearly half of the cells were in G0/G1 stage,the other half in S+G2+M stage, while just 5.17% of the cells were apoptosis,which indicated that most of the cells were in the active stage of division and proliferation,and had strong vitality. Moreover, there was no mycoplasma contamination in the cultured cells. In summary,the culture system of donkey skin fibroblasts was rapidly and effectively established with the double enzyme digestion method in vitro. 相似文献
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细胞系是动物病毒分离培养的重要载体。本研究以现代商品化仔猪肾脏为原始材料,拟培育新的细胞系用于动物病毒的分离和培养。利用胰酶消化法和差速贴壁相结合方法,分离纯化仔猪肾上皮细胞,并在体外进行传代培养和筛选。结果显示,试验成功得到一株可以连续传代的细胞株,命名为SDPK-D,且已在体外连续传代90代。SDPK-D细胞株F33和F83代倍增时间分别为40.9和32.7 h,细胞活率分别为97.55%和98.86%,8 h细胞贴壁率分别为91.67%和97.06%。在该细胞株接种猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪流感病毒（SIV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）阳性病料均出现明显的细胞病变。本研究首次针对现代商品猪培育出一株可以在体外连续传代的细胞株,并对多种动物病毒敏感,为相关动物病毒的分离培养提供了新的细胞系选择。 相似文献
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Cell line was an important carrier for the isolation and culture of animal viruses.In the research, modern commercial piglet kidney was taken as the raw material in order to cultivate a new cell line for isolating and culturing animal viruses. By trypsin digestion and differential velocity adherent combination method,porcine kidney epithelial cells were separated and purified,and then continuously subcultured in vitro. The results showed that a new cell strain named SDPK-D had been serially passaged for 90 generations.The doubling time of SDPK-D cell strain F33 and F83 were 40.9 and 32.7 h,respectively;While the cell viability were 97.55% and 98.86%,the cell adherent rate at the 8 h were 91.67% and 97.06%,respectively. Obvious cytopathic effect appeared after inoculating with PRV,SIV and PEDV positive samples. For the first time, a new cell strain from modern pig named SDPK-D was successfully cultivated,which was sensitive for several animal viruses.It could provid a new selection for the isolation and culture of virus. 相似文献
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本试验旨在建立原代乳腺上皮细胞系的体外培养方法,并进行β酪蛋白mRNA的表达验证。取新鲜泌乳期的乳腺组织,采用组织块法培养纯化原代乳腺上皮细胞,利用显微镜观察细胞形态并进行细胞生长计数,采用实时荧光定量PCR技术检测β酪蛋白mRNA表达。结果显示,纯化培养的原代乳腺上皮细胞集聚成岛屿状生长,具有典型的铺路石和鹅卵石形状,细胞生长曲线呈"S"形,符合一般细胞的生长规律,并成功表达β酪蛋白mRNA。综上所述,本研究采用组织块法成功培养出具有正常生理功能的奶牛原代乳腺上皮细胞,为后续的乳腺上皮细胞功能研究提供了良好的细胞试验模型。 相似文献