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本研究建立了可同时检测猪流行性腹泻病毒（Porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV）、传染性胃肠炎病毒（TransmissiblegastroenteritisVirus,TGEV）、A群轮状病毒（GroupArotavirus,GARV）和猪嵴病毒（Porcinekobu—virus）的多重RT—PCR方法。检测中,建立的多重RT—PCR方法能够检测到500Pg的TGEV、PEDV、GARV和猪嵴病毒等量混合RNA模板,与常规的单一RT—PCR检测结果基本相同（检测TGEV、PEDV、GARV和猪嵴病毒的灵敏性分别为1000A、1000／6、93．33％和96．67％,特异性均为i00％）。结果表明,建立的多重RTPCR方法敏感性和特异性良好,可作为临床上猪病毒性腹泻病因快速、高效的诊断工具。应用该方法对2010—2012年华中地区190份腹泻仔猪样本进行检测,PEDV、TGEV、GARV和猪嵴病毒的阳性率分别为62．11％、0．53％、7．37％和82．11％。混合感染方面,PEDV和猪嵴病毒混合感染率为47．89％,PEDV和GARV混合感染率为4．74％,GARV和猪嵴病毒混合感染率为7．37％,PEDV、GARV和猪嵴病毒混合感染率为4．74％,未发现TGEV与其它3种病毒的混合感染情况。另外,有27份样本中仅检出PEDV（14．21％）,57份样本只检出猪嵴病毒（30％）。分析表明,我国自2010年底大面积暴发的病毒性腹泻是多病原混合感染造成的,主要病原为PEDV,猪嵴病毒在其中所起作用尚待进一步验证和研究。 相似文献
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2017—2019年华东地区猪场主要病毒性腹泻病原调查 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究旨在了解当前我国华东地区引起猪腹泻的主要病毒性腹泻病原的流行情况，为该地区更好地开展猪腹泻病毒的防控工作提供临床数据。分别采用RT-PCR检测方法对2017—2019年华东地区35个场别594份临床样品检测猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）、猪轮状病毒（porcine rotavirus，PoRV）、猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus of swine，TGEV）、猪丁型冠状病毒（porcine deltacoronavirus，PDCoV）和猪萨佩罗病毒（porcine Sapelovirus，PSV）等5种猪的病毒性腹泻病原，并对其阳性率及混合感染情况进行统计分析。结果显示，2017—2019年的PEDV、PDCoV、PoRV、TGEV及PSV的平均阳性率为分别为62.6%（372/594）、27.9%（166/594）、16.8%（100/594）、13.3%（79/594）及3.87%（23/594），二重混合感染中以PEDV+PDCoV及PEDV+PoRV为主，平均混合感染率分别为22.4%（133/594）和13.3%（79/594）。三重感染中以PEDV+PoRV+PDCoV混合感染为主，感染率为7.58%（45/594），未见四重及五重病原混合感染。2017—2019年PEDV平均阳性检出率最高，且常与PoRV及PDCoV发生混合感染，是当前华东地区猪病毒性腹泻类疫病的防控重点。TGEV和PDCoV在健康育肥猪及母猪的检出率中占比较大，表明隐性感染变得普遍，值得养殖户关注。除此之外，PSV的检出率远低于其他4种腹泻病毒。总之，随着2018年后养殖场加强生物安全防控措施和猪群管理，各病原检出率和阳性场检出率呈现逐年下降趋势。 相似文献
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2010年冬季至今,我国许多猪场都发生了非常严重的仔猪腹泻,造成了较大的经济损失。传统的致仔猪腹泻的病毒主要有3个：猪传染性胃肠炎病毒（porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV）、猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）和轮状病毒（porcine rotavirus,RV）,以及主要由上述3种病原引起的协同致病和混合感染,文中就引起常见仔猪腹泻的病原作简要综述。 相似文献
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仔猪流行性腹泻的最新流行情况 总被引：2，自引：0，他引：2
猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）同属于1型冠状病毒。两种病毒引起的仔猪腹泻在临床上较难鉴别诊断,需要进行实验室病原学的鉴别诊断。相对而言,TGEV的传播速度较快,对仔猪的危害也更为严重。在欧洲地区,PEDV主要引起较大日龄猪的腹泻（6～15周龄）,造成感染猪群较轻微腹泻流行,并在1周后很快康复, 相似文献
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猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（RV）是引起猪病毒性腹泻的3种主要病原,被感染的仔猪主要临床症状表现为腹泻、呕吐和脱水,因其传染性强、死亡率高,给生猪养殖业造成不可估量的经济损失,严重困扰养猪业的发展。研究调查2019年新疆维吾尔自治区部分地区规模化猪场PEDV、TGEV和RV的流行情况,为防控猪病毒性腹泻提供技术参考。 相似文献
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猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起的以腹泻、呕吐、脱水和哺乳仔猪高死亡率为主要特征的一种高度接触性肠道传染病[1]。新生仔猪感染后严重脱水至死亡,死亡率可达100%,1～2周龄感染,死亡率高达90%,随日龄的增加,感染造成的死亡率将逐渐降低,但是易形成僵猪。PEDV的感染在不同地区有明显差异,以亚洲PEDV引起的仔猪死亡率较高,而在我国则更加严重,并且其感染率明显高于猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）和猪轮状病毒（PoRV）[2-3]。 PEDV与TGEV属于冠状病毒科冠状病毒属,2种病毒感染后所引起的临床症状极为相似,难以鉴别诊断。延缓肥育猪出栏时间,增加饲养成本,给养猪业造成严重损失。2013年7月高温季节四川某大型猪场之肥育场突然暴发猪流行性腹泻,现将确诊与处置情况报道如下。 相似文献
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PEDV、TGEV、PoRV 3种猪病毒性腹泻病毒的流行现状及控制策略 总被引：2，自引：2，他引：0
引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水为特征,哺乳仔猪发病率和病死率较高,后备猪、母猪或育肥猪呈一过性腹泻,发病率较低。特别是自2010年以来,PEDV变异毒株的流行已对全球的生猪产业造成严重影响,而已有的防控措施已经不能应对新的流行态势。近年来,针对PEDV、TGEV、PoRV的毒株流行变化及防控措施研究的较多,许多新技术、新方法已应用于3种病原的控制。作者基于当前3种病毒的遗传变异分析和流行现状,从饲养管理、免疫预防、中药疗法、干扰疗法、特异疗法及返饲疗法等方面对防控措施进行综述,以期为猪病毒性腹泻的防控提供科学依据。 相似文献
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猪病毒性腹泻主要由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和流行性腹泻病毒（PEDV）所致,TGEV和PEDV同属Ⅰ型冠状病毒。随着规模化养猪业的快速发展,我国一直就有猪病毒性腹泻疫情的地方性流行报道。该病一般多发于冬春寒冷季节,病猪主要表现为灰绿色或黄色水样腹泻, 相似文献
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猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻疫苗病毒培养条件的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV）是引起猪病毒性腹泻的主要病原。猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗应用于预防猪传染性胃肠炎（TGE）及猪流行性腹泻（PED）。在疫苗的生产过程中,要将形成良好单层的细胞进行传代,扩大培养后用TGEV和PEDV两种病毒按5%的接毒量分别感染相对应的ST细胞和Vero细胞单层,37℃条件下培养,繁殖病毒,待细胞病变（CPE）达到80％以上时收获含病毒细胞培养液,病毒液的含毒量应不低于10^7.0TCID50／mL。 相似文献
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High-level prokaryotic expression of envelope exterior of membrane protein of porcine epidemic diarrhea virus 总被引：1，自引：0，他引：1
Shenyang G Enhui Z Baoxian L Xinyuan Q Lijie T Junwei G Yijing L 《Veterinary microbiology》2007,123(1-3):187-193
The truncated fragment M' gene, encoding the exterior of the viral envelope protein of PEDV, was subcloned into prokaryotic expression vector pGEX-6p-1. The recombinant plasmid pGEX-6p-M' was constructed and transformed into E. coli BL21(DE3)pLysS for expression. SDS-PAGE analysis showed recombinant truncated M' protein was highly expressed by pGEX-6p-M' and the product fusion protein GST-M' reached 45% in the total bacteria proteins with the analysis of software AlphaImager2200. The preliminary purified recombinant protein was evaluated for its antigenicity and reactivity through Western blotting and indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with monoclonal antibody against M protein of PEDV and porcine polyclonal anti-PEDV antiserum as the primary antibody. The results indicated the recombinant truncated M' protein should be candidate as a feasible recombinant diagnostic reagent. 相似文献
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猪流行性腹泻病毒中国地方流行株LJ/B03 M基因的克隆与序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
从黑龙江某猪场疑似猪流行性腹泻猪的粪便中提取总RNA，采用RT—RCR方法扩增，首次获得中国地方流行株PEDVM全基因序列，将其克隆到pMD18-T载体中进行测序，克隆的M基因核苷酸序列由681个核苷酸组成，含有一个完整的开放阅读框架，编码226个氨基酸。与国外已发表的其他毒株进行基因进化分析，GenBank中的6PEDV形成的基因进化树具有3个分支。其中分离株LJB／03形成一个独立的分支，说明LJB／03的M基因序列与其他毒株相比，发生了一定的变异。 相似文献
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猪流行性腹泻病毒M基因及其片段原核表达效果分析 总被引：3，自引：0，他引：3
将猪流行性腹泻病毒的M基因及编码M蛋白膜外区M基因片段（M’）分别亚克隆到原核表达载体pJLA605和pGEX-6p-1中，构建了重组质粒pJLA605-M、pGEX-6p-M-GST、pGEX-6p-M和pGEX-6p-M’，转化大肠杆菌后。探索了M蛋白在N端和C端不带有谷胱苷肽巯基转移酶（GST）、N端和C端均带有GST、只在N端带有GST以及只含有M蛋白的膜外区M’蛋白的表达情况。SDS-PAGE分析结果表明，N端和C端带有GST的pGEX-6p-M-GST和只含有膜外区M’基因的重组质粒pGEX-6p-M’获得了高效表达，经Bandscan5．0软件分析，其表达产物分别以融合蛋白GST-M和GST-M’形式存在，表达量分别为20％和45％。在对重组质粒pJLA605-M转化的大肠杆菌诱导表达过程中发现菌体生长的抑制现象，说明M蛋白对宿主菌有一定的毒性，进一步提取包涵体进行SDS-PAGE发现M蛋白以包涵体的形式得以表达。猪流行性腹泻病毒M蛋白的毒性作用可能与M蛋白具有的出芽功能有关，因而表现出对大肠杆菌的细胞壁的破坏作用。 相似文献
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猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达 总被引：4，自引：0，他引：4
应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板,用分别含有BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4Ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性。 相似文献
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利用PCR技术亚克隆了H7亚型禽流感病毒的HA1基因,并将PCR产物连接到克隆载体pMD 18-T Simple vector,转化大肠杆菌。测序结果表明所克隆的片断大小为1035bp。将HA1基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,经酶切和PCR鉴定,证明成功构建了重组表达载体pGEX-HA1。将构建好的融合表达载体在IPTG的诱导下在大肠杆菌中得到了表达。融合蛋白GST-HA1的分子量为63ku。Western-Blot和ELISA鉴定结果表明,融合蛋白与H7亚型禽流感阳性血清发生特异性反应,而与H5、H9亚型抗血清不发生反应。 相似文献
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以原构建的克隆载体为模板,PCR扩增梅花鹿FSHα亚基基因,TA克隆后经双酶切插入表达载体pGEX-6P-2,阳性克隆导入E.coli BL21,IPTG诱导表达GST-FSHα融合蛋白,SDS-PAGE进行分析鉴定。结果表明,FSHα PCR产物大小约380 bp,测序结果与GenBank序列一致;重组表达载体pGEX-6P-2-FSHα构建成功;融合蛋白经SDS-PAGE分析,结果发现,在分子质量39.3 ku处出现特异性蛋白质条带,说明梅花鹿FSHα亚基基因片段已在E.coli BL21中成功表达了FSHα-GST融合蛋白。 相似文献
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A fragment about 696 bp was amplified by PCR technique with specific primers based on Tams1 gene sequence（AF214842） of Theileria annulata reported in GenBank. Then the target fragment was directionally cloned into pGEX-4T-2 expression vector, the recombinant plasmid DNA was cut by enzymes, and then sequenced.The result showed that the homology of the cloned Tams1 gene was 98%. The positive plasmid was transformed into BL21（DE3）, and then induced by IPTG. Soluble fusion protein whose expression level reached 1.39 mg/mL was obtained when it was induced with 0.5 mmol/L IPTG for 4 h at 37 ℃, and it was 53 ku. Western blotting showed that recombinant protein GST-P27 which was purified by Glutathione Sepharose 4B had the favorable reactionogenicity. 相似文献
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为了获得具有良好免疫原性的猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株M和N双基因融合蛋白,本研究采用RT-PCR方法分别扩增PEDV变异毒株M、N基因,利用限制性内切酶依次将其定向克隆至pMD18-T载体,将串联的N和M融合基因片段亚克隆至pGEX-KG原核表达载体,构建pGEX-NM双基因重组质粒,转化BL21表达菌,经IPTG诱导获得了以包涵体表达的N-M双基因融合蛋白,融合蛋白经Western blot检测能够被兔抗PEDV阳性血清识别,将融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,经间接ELISA检测其抗体效价高达1∶12 800以上。本研究获得了具有良好免疫原性的N-M双基因融合蛋白,为M和N蛋白抗原表位鉴定以及结构与功能研究、PEDV变异机制与免疫机制研究、PED新型疫苗和诊断试剂研究奠定了基础。 相似文献
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鹅副粘病毒NP基因的原核表达及表达产物抗原性检测 总被引：1，自引：0，他引：1
根据GenBank中发表的GPMVSF02株的NP基因的核苷酸序列设计合成一对引物，通过RT-PCR扩增JS／1／97／Go株的NP基因，将其克隆人pMDl8-T载体，序列测定和分析表明：所扩增的NP基因的核苷酸长为1470bp，共编码490个氨基酸。再将NP基因定向亚克隆至原核表达载体pGEX-6P的多克隆位点，经酶切鉴定后将含有NP基因的阳性亚克隆重组质粒转化到大肠杆菌BL21中，用诱导荆IPTG分别以不同的浓度进行诱导，并在不同的诱导时间进行采样，样品经处理后通过SDS-PAGE、Westernblot和Dot-ELISA进行分析。结果显示：以终浓度为1mmol／LIPTG进行诱导4h表达可达到高峰。表达的融合蛋白大小约为80kD，并具有良好的抗原性。 相似文献