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1农杆菌介导法农杆菌介导法是最早应用、最实用有效并且具有最多成功实例的植物转基因方法。目前，用于植物转基因介导的农杆菌是根癌农杆菌和发根农杆菌。某些根癌农杆菌和发根农杆菌分别含有大小为200～800碱基对的结构和功能相似的n质粒和Rj质粒。Ti质粒和Ri质粒含有3个功能区， 相似文献
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接种鉴定了由９种植物分离得到的１２个大丽轮枝孢（ＶｅｒｔｉｃｉｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅＫｌｅｂ．）菌株对沙打旺（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓａｄｓｕｒｇｅｎｓ）和苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏｓａｔｉｖａ,Ｍ．ｆａｌｃａｔａ,Ｍ．ｍｅｄｉａ）的致病性。结果表明,绿豆、西瓜、茄子、棉花、向日葵、番茄、马铃薯、萝卜和沙打旺分离菌株都能正常侵染沙打旺,引起典型表观症状和维管束变色。绿豆和西瓜分离菌株侵染苜蓿后能引起轻微的表观症状,其他菌株侵染后仅引起维管束轻度变色,但由变色部分可分离出大丽轮枝孢,这表明苜蓿可以无症带菌。 相似文献
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新城疫病毒HN基因的克隆及在苜蓿中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
为了克隆新城痤病毒LaSota株HN基因,构建原核重组表达质粒pBI121-HN,使HN基因在苜蓿中表达,将新城疫病毒LaSota株接种于鸡胚,培养、纯化后收获鸡新城痤病毒,提取病毒RNA,经反转录后通过PCR扩增HN基因,克隆得到重组质粒pBI121-HN,井其通过电转化导入根癌农杆菌中,以根癌农杆菌为介导将HN基因导入苜蓿细胞.最终成功构建了重组表达质粒pBI121-HN,并通过根癌农杆菌转染苜蓿细胞将其在苜蓿中成功表达.本试骑为家禽的植物件苜蓿疫苗的研究奠定了基础. 相似文献
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猪水肿病毒素A亚单位基因的克隆及表达的尝试 总被引：1，自引：0，他引：1
以聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术从大肠杆菌ＴＢ１中扩增出猪水肿病毒素（ＳＬＴ－ＩＩｅ）的Ａ亚单位基因的９６０ｂｐ。将此ＰＣＲ扩增产物（ｓｌｔ－ＩＩｅＡ）在ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ位点间克隆进质粒ｐＵＣ１８中,获得了重组质粒ｐ１８ｓｌｔ－ＩＩｅＡ,经ＭｉｃｒｏＧｅｎｉｃ ｃｏｍｐｕｔｅｒ ｐｒｏｇｒａｍ分析证明在其整个序列中含有与已发表的ｓｌｔ－ＩＩｅ序列相同的序列,说明质粒ｐ１８ｓｌｔ－ＩＩｅＡ是含有 相似文献
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抗冻基因CBF_2表达载体构建及转化紫花苜蓿的研究 总被引：4，自引：3，他引：1
本研究以拟南芥基因组DNA为模板,用PCR方法扩增目的基因,连接到PGEM-T Easy Vector载体上构建成克隆载体T-CBF2。用BamHⅠ和SacⅠ分别对克隆载体T-CBF2和植物表达载体PBI121进行双酶切,获得目的片段和线性质粒。在T4DNA连接酶的作用下进行定向连接,构建成植物表达载体P-T-CBF2。采用直接转化法将重组子导入根癌农杆菌EHA105。经PCR鉴定,重组质粒已成功导入根癌农杆菌中。通过农杆菌介导法转化和田苜蓿,现在已经得到转基因的苜蓿愈伤组织。 相似文献
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有关苇状羊茅与三叶草属植物间毒素抑制现象已有报道结果并不一致，许多苇状羊茅的植株侵染内生真菌（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｃｏｅｎｐｈｉａｌｕｍ Ｍｏｒｇａｎ－Ｊｏｎｅｓ ＆ Ｇａｍｓ），这可能是造成研究结果不一致的部分原因。在研究无内生真菌的苇状羊茅（ＴＦ－Ｅ）和有内生真菌的苇状羊茅（ＴＦ＋Ｅ）的种子浸出液对５种三叶草种（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ）的种子萌发和幼苗生长（包括枝条、枝和根毛的密度）的影响，这５ 相似文献
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象草4CL基因片段的克隆及RNAi 表达载体构建 总被引：1，自引：0，他引：1
象草是热带和亚热带地区广泛栽培的多年生资源植物。为探讨华南象草４-香豆酸：ＣｏＡ 连接酶（4CL）基因下调表达对木质素合成的影响,本研究设计１对特异引物,ＰＣＲ 扩增获得一段长为３７４ｂｐ的干扰片段。通过ＴＯＰＯ 克隆,将该片段克隆到载体ｐＣＲ ／ＧＷ／ＴＯＰＯ ,构建了入门克隆载体ｐＥＮＴＲ-４CL;再经过ＬＲ 反应使ｐＥＮＴＲ-４CL上的干扰片段进入目的载体ｐＣＢ２００４Ｂ 上,形成表达载体ｐＣＢ２００４Ｂ-４CL,最后通过冻融法将其转入到根癌农杆菌ＥＨＡ１０５中。菌液ＰＣＲ 结果表明ＲＮＡｉ质粒已成功转入农杆菌,为进一步利用ＲＮＡｉ技术研究４CL基因的功能奠定了基础。 相似文献
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胸膜肺炎放线杆菌血清型的地理分布 总被引：2，自引：0，他引：2
胸膜肺炎放线杆菌血清型的地理分布吴硕显（上海动植物检疫局，２０００３２）胸膜肺炎放线杆菌（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；Ａｐ）为猪胸膜肺炎的病原，曾称作副流嗜血杆菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）... 相似文献
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以ＰｓｔＩ酶切含禽多杀性巴氏杆菌保护性荚膜抗原基因片段ＰＣＡ１０的重组质粒ｒＰＣＡ１０，收集基因片段ＰＣＡ１０，经修饰后依次连接到系列高效表达载体ＰＥＶ—Ｖｒｆ１～３的ＢａｍＨＩ切点上，转化至Ｅ．ｃｏｌｉＲＲＩ（ｐＲＫ２４８ｃＩｔｓ）中。经快速检测，这３种载体的重组子中均有ＰＣＡ１０插入。以间接ＥＬＩｓＡ检测重组子转化菌，只有ＰＥＶ—Ｖｒ１３载体的重组子转化菌与禽巴氏杆菌保护性荚膜抗原（ＰＣＡ）抗血清呈阳性反应，且ＯＤ值为原克隆菌株ｒＰＣＡ１０的３倍，初步证明ＰＣ１０已克隆至高效表达载体ＰＥＶ—Ｖｒｆ３上，而且读码框架正确。用ＥＬＩｓＡ阳性表达克隆株ＰｃＡ７１—Ｖｒｆ３免疫小鼠和鸡，均达到７０％的保护率。 相似文献
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根癌农杆菌介导转化法是植物基因工程的重要方法,但其转化效率受多种因子的影响,包括化学物质、物理方法、外植体遗传特性等,涉及农杆菌与植物互作的各个阶段。将这些影响因子及其功能进行简要综述,以期为优化农杆菌介导植物遗传转化流程提供帮助。 相似文献
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发根农杆菌Ri对北五味子的遗传转化研究 总被引：1，自引：0，他引：1
20年来，应用植物细胞大量培养技术生产植物有用次生代谢物的研究取得了许多突破性进展。据估计，已经从400多种植物建立了组织和细胞培养物，从中分离出600多种次生代谢物，其中40多种化合物在数量上超过或等于原植物，为通过细胞培养技术工业化生产植物有用次生代谢物奠定了基础。发根农杆菌Ri质粒转化植物诱导出的毛状根(hairyroot)与正常根结构类似，但是具有生长速度快，遗传和生化特性稳定及易于进行遗传操作等特点。因此自20世纪80年代以来，利用毛状根培养技术生产有用植物次生代谢物研究便成为人们关注的热点。 相似文献
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本研究的目的是以干酪乳杆菌 Ｌ． ｃａｓｅｉ ３４１０３染色体 ＤＮＡ为模板,利用 ＰＣＲ技术扩增出胸苷酸合成酶（Ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ, ｔｈｙＡ）基因,利用玻璃奶回收纯化试剂盒回收纯化ｔｈｙＡ基因,并将其克隆入以红霉素抗性为选择压力的可以在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭表达的质粒ｐＷ４２５ｅ,再转化Ｘ５１感受态细胞,筛选阳性克隆,提取质粒,进行酶切鉴定、ＰＣＲ扩增鉴定,并对ｔｈｙＡ基因片段进行测序,与已知序列进行同源性比较,结果表明成功克隆了 ｔｈｙＡ基因,全长约 １．１ｋｂ,与国外报道的 ｔｈｙＡ基因同源性达９９％。这为构建以ｔｈｙＡ基因为选择压力的非抗生素抗性穿梭表达载体奠定了基础。 相似文献
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猪萎缩性鼻炎是猪慢性传染病，特点是浆液化脓性鼻炎、鼻甲骨基础变形和破坏。此病由多杀性巴氏杆菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ）血清Ｄ型引起，Ａ型引起的比较少。支气管败血博特氏菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌａｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）促进巴氏杆菌传染... 相似文献
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用抗原免疫构建分泌兔出血症病毒抗独特型抗体的杂交瘤细胞 总被引：3，自引：0，他引：3
用纯化的兔出血症病毒（ｒａｂｂｉｔｈａｅｍｏｒｈａｇｉｃｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ,简称,ＲＨＤＶ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。正如网络学说所指出的,从免疫鼠的杂交瘤细胞克隆中,不仅筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ抗体（Ａｂ１）的细胞克隆,同时也筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ独特型抗体（ａｎｔｉ－ｉｄｉｏｔｙｐｉｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ,Ａｂ２）的杂交瘤细胞,用抗原而不用单克隆抗体（Ａｂ１）免疫,诱导产生抗独特型抗体（Ａｂ２）是一种具有广阔的应用前景的新技术 相似文献
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禽呼肠孤病毒S1基因的扩增克隆与鉴定 总被引：14，自引：4，他引：10
利用反转录－聚合酶链（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,扩增出禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）Ｓ１１３３、１７３３长为５４０ｂｐ的Ｓ１基因片段。将扩增到的２个毒株的Ｓ１基因通过粘端连接分别克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＫＳ＋质粒中,用ＰＣＲ和限制性内切酶分析鉴定,表明获得２种重组质粒ＡＲＶ Ｓ１１３３ Ｓ１－ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ＡＰＶ １７３３ Ｓ１－ｐＢｌｕｅｓｃｒｐｔ。 相似文献