共查询到20条相似文献，搜索用时 471 毫秒
1.
本文主要报道了用 3种不同方法从S8黑曲霉菌丝体中提取基因组DNA ,最适方法是经改进的Vitagene试剂盒法。PCR扩增效果最好的是设计时没有去掉phyA基因内含子的引物 ,获得的特异性PCR产物长约 1.5kb。同时对PCR反应体系进行了优化。对扩增出的目的片段用 3种不同方法进行纯化回收 ,结果是PCRFragmentRe coveryKit法回收效果最好 ,其产量可达到约 10ng/ μL。根据已报道的植酸酶phyA基因序列酶切位点 ,对回收的目的片段进行酶切鉴定 ,该基因能被BamHⅠ、SalⅠ酶切 ,不能被HindⅢ、XbalⅠ、KPnⅠ酶切 ,与已知的phyA基因酶切图谱基本一致 ,进一步判定PCR扩增产物中含有植酸酶phyA基因目的片段 相似文献
2.
植酸酶产生菌的筛选及诱变选育 总被引：3，自引：0，他引：3
植酸酶是一种能将饲料中植酸磷水解成无机磷和肌醇的新型单胃动物饲料添加剂，主要应用于猪、鸡、鸭及水产养殖类动物，应用范围广、需求量大，是当前研究热点之一。饲料中添加植酸酶，可提高磷的利用率，同时破坏植酸与矿物元素及蛋白质的亲和力，提高矿物元素生物利用率和蛋白质的消化率，使动物体内的酶恢复其原有活性，提高饲料效率。由于减少无机磷的添加量，可缓解动物排泄物中磷对环境的污染。 目前的研究表明，利用微生物发酵技术生产植酸酶，是获得大量稳定而高效的植酸酶的主要途径，有些国家已利用工业发酵法进行了商业化植酸酶… 相似文献
3.
phyA基因的克隆及其新型表达载体的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
直接以黑曲霉菌株F246基因组为模板，对植酸酶基因phyA的成熟肽(分子长度为1347bp)进行了PCR扩增，再将PCR产物克隆入pMD18-T质粒，经DNA测序鉴定正确后，亚克隆入表达载体pET30a^ 和pMG36e，成功构建了phyA基因2种新型表达载体。植酸酶phyA基因2种新型表达载体的构建，为进一步获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生态制剂打下了基础。 相似文献
4.
5.
芽孢杆菌中性植酸酶基因的原核表达及酶学性质分析 总被引：1，自引：0，他引：1
植酸酶作为饲料添加剂能够有效提高动物对饲料中磷的利用率及减少粪便中磷排放对环境的污染,并降低植酸的抗营养作用。为了获得性能稳定的高活性植酸酶,采用PCR扩增芽孢杆菌(Bacillus sp.)中性植酸酶基因phyC(GenBank登录号:FJ986327)的成熟肽编码序列,将其克隆进原核表达载体pET-28a(+),并转化E.coli BL21(DE3)进行表达。在37℃条件下以0.5 mmol/L IPTG诱导4 h能够获得大量包涵体蛋白,在25℃条件下以0.5 mmol/L IPTG诱导6 h有利于可溶性蛋白的获得。利用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组植酸酶产物,获得的中性植酸酶的部分酶学特性为:耐热性较好,最适反应温度55℃,在70℃处理10 min可保持20%以上的酶活性;耐酸、碱能力较强,最适pH 6.0～7.0,pH 5.5～9.0时能保持80%以上的酶活性,pH 5.0～10.0时处理60 min仍能保持70%以上的酶活性,在pH 2.0～4.0时能保持40%以上的酶活性。利用构建的切除芽孢杆菌中性植酸酶基因phyC信号肽编码序列的原核表达载体及优化的诱导表达条件,能够在大肠杆菌中高量表达性能稳定的芽孢杆菌中性植酸酶。 相似文献
6.
7.
植酸酶属于磷酸单酯水解酶,是磷酶的一种特殊类型,它能够水解饲料中的植酸释放出磷,提高植物性饲料中磷的利用率。近几年,植酸酶在生产技术上已取得了突破性进展,采用ＤＮＡ重组技术从野生型曲霉菌株系中分离出高活性植酸酶基因,经克隆扩增后,转移到高产菌株基因组中,其工艺日趋成熟,产品已投放市场。Ｓｉｍｏｎｓ等(1990)用Ａ.ｆｉｃｕｕｍ菌株ＮＲＲＬ3155发酵生产的植酸酶,经体外试验,在ｐＨ=25和ｐＨ=55时活性最强;Ｎｅｗｍａｎ(1991)发现,由Ａ.ｎｉｇｇｅｒ曲霉菌株生产的植酸酶在ｐＨ=55～65时,最具活力。植酸酶能将植酸水解为正磷酸… 相似文献
8.
植酸酶在猪饲料中的应用效果 总被引：5，自引：0，他引：5
前言自１９９１年荷兰首次在畜禽饲料中应用商品植酸酶以来 ,植酸酶的应用一直是饲料工业的热点。现在 ,植酸酶替代无机磷饲料已进入规模应用阶段 ,１９９９年全球经植酸酶处理的饲料已达５５００万吨。事实证明 ,畜禽饲料中添加植酸酶不仅可提高植酸磷的消化率 ,减轻养殖业带来的磷污染 ,保护环境 ,还可改善蛋白质、氨基酸和能量的利用效果 ,提高畜禽生产性能。本文主要简述植酸对猪营养代谢的有害作用 ,植酸酶对猪饲料消化率和生产性能的影响和酶他富植酸酶的潜在营养价值。植酸与猪的营养猪饲料中通常含有大量米糠 ,麦麸 ,棉粕和菜粕 ,植… 相似文献
9.
(接上期 ) 2.2植酸酶的基因工程 植酸酶的研究已有近 40年的历史，植酸酶作为一种单胃动物的饲料添加剂，其饲喂效果已在世界范围内得到广泛的确证，随着饲料工业的发展和分子生物学的兴起，从 90年代开始的植酸酶的分子生物学研究，已成为世界性的研究热点之一。目前国内外研究的主要思路集中在通过基因工程这一手段解决饲用植酸酶的两个主要问题：一个是植酸酶在天然材料中表达水平太低，这造成植酸酶难以大量生产及生产成本过高的问题，通过基因工程技术，利用生物反应器则有望成百上千倍地提高它的表达量；另一个问题是天然植酸… 相似文献
10.
植酸酶虽然能解除植物性饲料中植酸的抗营养作用,降低无机磷源的添加量,减轻环境污染,但目前市场上的植酸酶价格偏高,成为阻碍植酸酶被普遍使用的主要原因。为此,本课题组利用自然界中的黑曲霉菌,经60Co辐射形成诱变菌株,从中选出产酶能力较高的A菌株,以价格低廉的麸皮、棉子粕、菜子粕为基质进行固体发酵,并在生产中以粗酶的形式添加,以期降低植酸酶的使用成本。本实验室以前的毒性试验和饲养试验表明,此粗制植酸酶无毒副作用,在蛋鸡日粮中可取代一部分的无机磷。本试验着重分析在蛋鸡日粮中使用此粗制植酸酶的经济价值和社会价值。一、材… 相似文献
11.
植酸酶和嗜酸乳杆菌是重要的饲料添加剂,为获得产植酸酶的嗜酸乳杆菌菌株,克隆了大肠杆菌植酸酶基因,构建表达载体并转化嗜酸乳杆菌,对重组嗜酸乳杆菌进行发酵产酶并测定所产酶液的酶学性质,进一步研究重组嗜酸乳杆菌的耐酸性及植酸酶液的抗蛋白酶活性。结果表明：重组嗜酸乳杆菌发酵24 h植酸酶活性为984 U/mL,植酸酶的最适催化pH为4.5,最适催化温度为60℃。重组嗜酸乳杆菌在pH 2.0～4.5有一定的耐酸性,在pH 2.0条件下2 h的存活率为76.4%。植酸酶液用胃蛋白酶处理160 min后植酸酶液剩余85%的相对酶活,用胰蛋白酶处理160 min后剩余29%的相对酶活。上述研究结果为重组嗜酸乳杆菌后续应用研究提供了重要依据。 相似文献
12.
为了采用基因工程方法大量生产高效抗原提供技术，根据已发表的弓形虫RH株P30的核苷酸序列，设计了一对加端引物，运用PCR方法，从弓形虫NT株中扩增出约800bp的片段。产物经EcoRI和XbaI酶切后，克隆进PUC19载体，经酶切和PCR鉴定，插入片段为P30基因。 相似文献
13.
植酸酶的应用一直是饲料工业的热点。现在植酸酶作为绿色的饲料添加剂已进入规模应用阶段。事实证明,植酸酶在养殖中的应用已经取得了良好的效果,植酸酶的应用不仅能提高植酸磷的消化率,减轻养殖业带来的污染,保护环境,还可以改善蛋白质、氨基酸和能量的利用效果,提高畜禽生产性能。1植酸酶及其在饲料中的作用植酸酶(六磷酸肌醇磷酸脂水解酶,phytase,myo-inositol-hexaphospate phosphohydrolase)是一种能够降解植物性饲料中的植酸及其盐类的磷酸脂酶。植酸酶能水解破坏植酸对矿物质元素络合的能力,使络合的矿物质元素大量地被释放出来,从而… 相似文献
14.
植酸是畜禽常规植物性饲料中磷的主要存在形式,也是一种广谱性的抗营养因子。在饲粮中添加植酸酶来消除这种抗营养因子的不利效应、提高家禽的生产性能、降低饲料成本已成为饲料业中常用的方法。在实际应用中,饲料加工过程对添加在饲料中的植酸酶产生的不利影响是限制植酸酶进一步推广应用的重要因素。目前,市场上已有多种耐高温植酸酶产品推出,但产品对饲料制粒过程的耐受性能仍然是最受关注的焦点。因此,如何对不同的耐高温植酸酶产品进行耐热性能的评价具有重要的现实意义。文中比较了几种实验室条件下评价植酸酶耐热性的方法,并结合饲料制粒试验,结果表明,在蒸汽消毒器中利用湿热蒸汽处理的方法是一种简单、快速,并接近饲料加工过程中酶活损失情况的植酸酶耐热性评价方法。 相似文献
15.
本研究旨在获得对胃蛋白酶和胰蛋白酶具有耐受性的植酸酶转基因猪成纤维细胞系.本研究首先检测了转植酸酶基因的酵母发酵液分别经不同浓度、pH2.0的胃蛋白酶和不同浓度、pH7.0的胰蛋白酶处理后的酶活残余量；然后采用流式细胞术筛选了慢病毒转染的阳性猪成纤维细胞,并进行鉴定.结果表明,酵母粗酶液经胃蛋白酶和胰蛋白酶处理后,残留酶活分别保持在70％和80％以上；包装后的慢病毒滴度为3.75×107,经流式细胞术筛选的转基因细胞阳性率为1.2％,PCR和RT-PCR结果表明,植酸酶基因已整合到基因组上,且该基因在转录水平上表达.本研究为制备植酸酶转基因细胞系提供了一种快速有效的方法,为转基因猪的培育奠定了基础. 相似文献
16.
17.
目前,关于饲料酶的生产和应用的报道很多,从报道的内容分析,无论是生产水平还是质量鉴别能力都比以前有很大提高,但是目前还有很多问题需要研究。目前广泛使用的植酸酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果胶酶都有很多同功酶。只要产酶的微生物不同(工程菌除外),酶蛋白的结构通常也是不同 相似文献
18.
付德顺 《河南畜牧兽医(综合版)》2000,(7):27-28
植酸酶作为一种饲料酶 ,能通过对植物饲料中植酸磷的水解从而提高单胃动物、家禽对磷的利用率 ,并提高对矿物质、蛋白质、氨基酸的利用率 ,这已被许多研究结果所证实。它的生化作用表现在 :（１）分解抗营养因子植酸 ,释放磷、钙、锌、镁、铜、蛋白质、氨基酸等。（２）解除植酸对消化酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶等的抑制 ,提高了饲料的利用率。随着基因生物工程的发展 ,植酸酶的商业化生产无论从生产技术工艺还是经济上都成为现实可行。荷兰、丹麦等国九十年代初开始大规模生产微生物植酸酶 ,并应用到配合饲料中 ,且相继立法 ,把它作为一种“绿… 相似文献
19.
20.
植酸酶酶活测定方法的研究 总被引：6，自引：0，他引：6
植酸及其盐类广泛存在于植物组织和相应的粮食产品中,占其总量的1%～3%,其中磷含量占植物总磷的60%～90%,是磷和肌醇的主要储存形式。而植酸形式的磷不但不能被单胃动物所消化利用,它还抑制多种营养成分的吸收和利用。植酸酶是催化植酸水解成肌醇与磷酸的一类酶的总称,由于植酸酶的这一特点,它已在饲料和食品工业中广泛地得到应用。植酸酶的产生主要是依靠微生物发酵获得,近年来有关微生物发酵生产植酸酶为目的的研究、开发报道很多,微生物发酵法生产植酸酶取得了很大进展。植酸酶酶活性的测定主要是检测分解产物无机磷的生成量。目前植酸酶… 相似文献