犬细小病毒病免疫胶体金诊断技术的研究   总被引：21，自引：0，他引：21  

王中力  宋晓晖  陈西召  陈国胜 《中国预防兽医学报》2004,26(1):62-66

建立一种简便、快速、准确检测犬细小病毒(CPV)的胶体金免疫层析法(GICA).采用柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记纯化的CPV单克隆抗体,在玻璃纤维素膜上喷加纯化的CPV多克隆抗体,制成诊断CPV抗原的快速诊断试纸条.用本试验研制的CPV试纸条检测收集到的120份犬粪便样品,其结果与HA结果相比对,HA效价在1:40以上,试纸条均能检测到为阳性.CPV试纸条与犬瘟热病毒及犬传染性肝炎病毒无交叉反应.且试纸条保存6个月后,其检测结果重复性为100%.试验证明,本研究建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法,可在临床上广泛应用,也可用于CPV的流行病学调查.  相似文献   

半定量检测新城疫抗体胶体金试纸条的研制   总被引：2，自引：0，他引：2  

李希友  田夫林  张秀娥  李建亮  崔言顺 《畜牧兽医学报》2006,37(12):1373-1377

为建立半定量快速检测新城疫抗体方法，本研究利用柠檬酸钠还原氯金酸，形成胶体金颗粒，应用直径20nm的胶体金颗粒标记新城疫抗原，制作了半定量快速测定新城疫抗体的免疫胶体金试纸条。用试纸条检测60份样品，检测结果与血凝抑制试验（HI）法测得结果的符合率为93．8％，最小检测HI滴度为410g2，与其他病毒的阳性血清没有交叉反应，且室温下有效保存期为3个月。试纸条应用方便、快速，适合临床推广以及流行病学调查。  相似文献   

驴抗犬细小病毒IgG的研制     

李六金  姜焕宏  押宗保  李成  吴钟灵  陈惠茹  李宏 《中国动物检疫》2002,19(8):23-24

用关中驴制备抗犬细小病毒（CPV）免疫球蛋白，预防和治疗犬CPV感染。制备CPV抗原复合物，通过免疫驴，用纯化方法从驴血清中提取特异性抗体（IgG），经过物理化学检定、血清学、免疫金电镜技术、动物效力实验。免疫驴均可产生特异IgG，免疫金电镜可观察到抗原抗体免疫复合物；血凝抑制试验（HI）≥1：512（IgG浓缩浓度为60mg/mL)；可保护犬免受CPV攻击；室温保存半年，4℃两年效价不变。已成功地应用CPV免疫驴制备出高效价特异性抗CPV－IgG。  相似文献   

马动脉炎病毒血凝抑制试验研究及其应用     

朱来华  梁成珠等 《中国兽医科技》2001,31(12):32-34

用马动脉炎病毒（EAV）免疫SPF豚鼠，4周后采血做血凝抑制试验（HI），其抗血清可以抑制血凝抗原对小鼠红细胞的凝集反应，抗原和抗血清在4℃感作24h后可以检测到最高的HI抗体效价，同时结果显示HI抗体与中和抗体产物呈正相关。对561份来自新西兰、吉尔吉斯、沙特阿拉伯及内蒙古、新疆的马血清用HI试验和微量血清中和试验（NT）进行EAV抗体检测，HI和NT阳性符合率为94．7％，血凝抑制抗体与中和抗体效价呈显著的正相关。  相似文献   

犬细小病毒单克隆抗体的制备及其在胶体金免疫层析试纸研发中的应用     

《动物医学进展》2016,(9)

为制备犬细小病毒胶体金免疫层析试纸,将F81细胞中分离的CPV免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立间接ELISA方法筛选分泌CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3E2。3E2的亚类为IgG1型,腹水抗体效价为1.8×105,交叉试验表明,3E2可与CPV特异性结合,与其他犬常见病毒无交叉反应。用3E2单克隆抗体制备的检测CPV的胶体金免疫层析试纸条特异性良好,为诊断和研究CPV奠定了基础。  相似文献   

应用犬五联弱毒冻干苗预防犬副流感的免疫程序的研究     

张黎阳  刘春林 《吉林畜牧兽医》1992,14(3):15-16

本试验应用目前国内研制的含犬副流感弱毒疫苗的五联苗,采用微量血凝与血凝抑制试验,通过对96条军犬和民犬进行定期采血检测,研究了本疫苗预防犬副流感的免疫程序,以犬副流感抗体效价达到1:64为标准,该苗的免疫程序为第一次注苗后14天再注射1次,以后每隔6个月注射1次。在将血凝与血凝抑制试验用于犬的血清副流感抗体检测中,采用了绵羊红细胞,结果清晰准确,方法有所创新。  相似文献   

虎血清中犬副流感病毒的抗体流行病学调查研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

孙贺廷  夏咸柱  高玉伟  贺文琦  王立刚  刘丹  黄耕 《畜牧与兽医》2004,36(9):4-6

为查明犬副流感病毒 (CPIV)对虎的感染情况 ,应用CPIV细胞培养物为血凝抑制 (HI)抗原 ,对上海、桂林、哈尔滨、宜昌、郑州等地区未曾使用过任何含CPIV疫苗免疫的 38只虎的血清进行HI抗体检测。结果表明 ,有 2 5份血清CPIV的HI抗体效价为 1∶4～ 1∶32 ,有 1 3份抗体效价 <1∶2 ,血清中CPIV的HI抗体阳性率达 65 79%。说明上述地区的虎可能存在着CPIV的隐性感染  相似文献   

犬细小病毒胶体金检测试纸条的制备与初步评价   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘洁  谢红玲 《中国兽药杂志》2014,48(3):35-37

为快速检测及诊断犬细小病毒及其引起的传染性疾病,应用胶体金免疫层析技术．采用柠檬酸三钠还原法制备25nm的胶体金颗粒,标记抗犬细小病毒单克隆抗体CPV—F1株后包被于玻璃纤维膜作为金标垫,在硝酸纤维素膜上分别包被羊抗小鼠IgG二抗和抗犬细小病毒单克隆抗体CPV—B6株作为质控线和检测线,将吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫分别粘贴于背衬板上制成犬细小病毒抗原胶体金检测试纸条。特异性试验及与血凝试验的对比结果表明,该试纸条具有良好的特异性和敏感性,与进口产品的总符合率为98％。本研究为进一步研发犬细小病毒检测试纸奠定了基础。  相似文献   

猪细小病毒血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清的制备与鉴定     

李琰  李佳昕  李芳韬  李琪  吴睿智  朱元源  徐璐  刘业兵 《中国兽药杂志》2024,58(4):14-19

猪细小病毒（Porcine Parvovirus,PPV）血凝抑制试验抗原、阳性血清和阴性血清在猪细小病毒制品的效力检验中不可或缺,对猪细小病毒相关生物制品的质量控制至关重要。试验采用PPV 7909株病毒同步接种PK-15细胞制备血凝抑制试验抗原,用制备的抗原乳化后免疫豚鼠制备阳性血清,同时用未免疫的阴性豚鼠制备阴性血清。对抗原、阳性血清和阴性血清进行鉴定,结果表明,制备的PPV血凝抑制试验抗原HA效价达1:512;阳性血清HI效价达1:1024;阴性血清HI效价＜1:8,且特异性均良好。利用制备的血凝抑制试验抗原、阳性血清与不同PPV疫苗株的灭活抗原、阳性血清进行交叉反应试验,结果表明,制备的抗原与阳性血清具备良好的血清学交叉反应性,可用于PPV制品的统一评价。  相似文献   

靶向融合犬细小病毒DNA疫苗免疫犬试验研究     

《黑龙江畜牧兽医》2017,(24)

为了评价靶向融合犬细小病毒DNA疫苗pVAX1-CTLA-4125-VP2228在自然宿主体内的免疫应答和攻毒保护效果,试验选用CPV抗体阴性犬24只,分为4组,分别为第Ⅰ组(pVAX1-VP2228免疫)、第Ⅱ组(pVAX1-CTLA-4125-VP2228免疫)、第Ⅲ组(pVAX1免疫)、第Ⅳ组(弱毒苗免疫),每组6只犬,间隔4周免疫1次,免疫3次。采用CPV酶联免疫吸附试验(ELISA)、CPV微量中和试验和CPV血凝抑制试验(HI)检测抗体水平。免疫3次后进行攻毒试验,观察保护效果。结果表明:血清中IgG含量第Ⅱ组高于第Ⅰ组,差异极显著(P0.01);中和抗体效价,第Ⅱ组高于第Ⅰ组,差异极显著(P0.01);第Ⅱ组出现HI抗体,而第Ⅰ组未出现HI抗体;攻毒后发现pVAX1-CTLA-4125-VP2228、pVAX1-VP2228具有较好的保护力。说明CTLA-4125能够有效增强自然宿主对VP2228的免疫应答作用,可为进一步研究靶向融合DNA疫苗的作用机制奠定基础。  相似文献   

Establishment and Application of Colloidal Gold Immune Chromatography Test Method for Detection of Canine Parvovirus Hemagglutination Inhibition Antibody Titer     

MA Yong-ying  SUN Ming  SHEN TU Fen-qin  KONG Han-jin  YANG Xin-yan  QIN Ya-man  CHEN Xi-zhao  JIA Hong 《中国畜牧兽医》2016,43(8):1983-1988

The study was aimed to use colloidal gold immune chromatography technology to establish a rapid method for detection of canine serum canine parvovirus (CPV) hemagglutination inhibition (HI) titer and CPV vaccine immunization effect assessment.Double antibody sandwich method and monoclonal antibodies of anti-CPV hemagglutination antigen were used to prepare CPV antigen test strip.Canine serum with different proportion respectively was mixed with quantitative CPV antigen for full reaction,then dropped the mixture into the CPV colloidal gold test strip,so according to the highest serum dilution ratios when the test strip line T (line T) vanishes,it was to judge CPV antibodies in serum of the HI titer.This method had been used to detect 86 canine serum samples,at the same time,analyzing and comparing it with traditional hemagglutination inhibition test method.The results showed that the CPV antigen detection test strip was successfully prepared,and the reaction conditions and results of the test strip for detecting the titer of CPV-HI in canine serum were determined.The results indicated that when detecting CPV antigen after the dilution of different ratios of canine serum,the highest serum dilution ratios when the strip line T vanished and the HI titer had positive correlation.The highest dilution ratios of canine serum multiplied by 4 was the HI titer.The results of two methods had 90.7% consistency.This experiment established the colloidal gold immune chromatography test strip for the detection of CPV-HI titers method initially.This CPV-HI detection provided a simple and fast test method for the effect evaluation of CPV vaccine immune.  相似文献   

犬瘟热病毒单克隆抗体的研制及胶体金试纸条检测方法的建立     

张敏  李建  舒金秀  冯超林  石宝兰  郑良益  牟林琳  柏娇  胡玉立  徐松  刘国兴  闵娟娟  石瑛  顾素云  谢红玲 《中国兽药杂志》2022,56(12):16-24

本研究利用原核表达、纯化的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)N 蛋白免疫BALB/C小鼠,成功筛选到两株分泌CDV N 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为D3、D6。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性、特异性良好,能识别不同来源的犬瘟热病毒株,单抗亚类均为IgG1。以D3作为金标抗体,D6作为检测抗体,兔抗鼠IgG作为质控线抗体,制备犬瘟热病毒胶体金检测试纸条,检测犬瘟热病毒敏感性为1000TCID50,能有效检测区分犬瘟热病毒、犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒2型(Canine adenovirus type 2,CAV2)、狂犬病病毒(Rabies virus,RV)。综上,本研究建立的胶体金试纸条检测方法,灵敏度高、特异性强,适用于犬瘟热病毒临床快速诊断。  相似文献   

犬狂犬病毒抗体胶体金检测试纸卡的研制     

牟林琳  谢红玲 《中国兽药杂志》2015,49(7):26-29

为快速检测犬狂犬病毒IgG抗体,应用狂犬病毒G蛋白作为捕获抗原,鼠抗狂犬病毒G蛋白单克隆抗体和羊抗犬IgG分别作为胶体金标记物和诊断抗体,羊抗鼠IgG作为质控线,制备胶体金免疫层析抗体检测试纸。该试纸卡具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,与快速荧光灶抑制实验检测值对比总符合率为82.1%。研究显示,本试纸卡能够快速、准确检测犬狂犬病毒IgG抗体,可为临床诊断和宠物犬狂犬疫苗免疫效果的评价提供参考。  相似文献   

Duration of serologic response to five viral antigens in dogs     

Mouzin DE  Lorenzen MJ  Haworth JD  King VL 《Journal of the American Veterinary Medical Association》2004,224(1):55-60

OBJECTIVE: To determine whether vaccinated dogs either remained seropositive or responded serologically to revaccination for 5 key viral antigens after extended periods since their last vaccination. DESIGN: Serologic survey. ANIMALS: 322 healthy client-owned dogs. PROCEDURE: Dogs were > or = 2 years old and vaccinated against canine distemper virus (CDV), canine adenovirus-1 (CAV-1), canine adenovirus-2 (CAV-2), canine parainfluenza virus (CPIV), and canine parvovirus (CPV). On day 0, dogs were revaccinated with a vaccine from the same vaccine line as they had historically received. Antibody titers were measured in sera collected at day 0 (prevaccination titer) and 5 to 7 days later (postvaccination titer). Dogs were considered to have responded serologically if they had a day-0 serum neutralization titer to CDV > or = 1:32; a serum neutralization titer to CAV-1, CAV-2, or CPIV > or = 1:16; a hemagglutination inhibition titer to CPV > or = 1:80; or a > or = 4-fold increase in antibody titer after revaccination. RESULTS: The percentage of dogs that had titers at or greater than the threshold values or responded to revaccination with a > or = 4-fold increase in titer was 98.1% for CDV, 98.4% for CAV-1, 99.0% for CAV-2, 100% for CPIV, and 98.1% for CPV. CONCLUSIONS AND CLINICAL RELEVANCE: In most dogs, vaccination induced a response that lasted up to and beyond 48 months for all 5 antigens. Although not equivalent to challenge-of-immunity studies as a demonstration of efficacy, results suggest that revaccination with the same vaccine provides adequate protection even when given less frequently than the traditional 1-year interval. The study provides valuable information for clinicians to help determine appropriate revaccination intervals.  相似文献   

免疫层析试纸条(ICS)检测禽流感抗体     

张喜悦  陈义平  冯娟  刘春菊  吴晓东  王志亮 《中国兽医学报》2006,26(5):485-487

以纯化的禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）核蛋白作为捕捉抗原，金标兔抗鸡抗体作为金标二抗，建立检测禽流感血清抗体的胶体金免疫层析试纸条（immunochromatographic strip, ICS）。对标准阳性血清不同滴度进行检测，ICS试验的敏感性高于琼脂扩散试验（AGP）。特异性试验证实，禽流感的ICS试验与新城疫（ND）、传染性支气管炎（IBV）、鸡传染性法氏囊病（IBD）及减蛋综合症（EDS-76）均无交叉反应。同时，用ICS试验和HI试验检测105份鸡血清，两者具有较好的符合性。结果认为：禽流感ICS具有快速简便、特异、灵敏等优点。  相似文献   

间接ELISA检测禽流感抗体方法的建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

黄金海  王英珍  丁伯良  张健  赵向华  李秀丽 《动物医学进展》2004,25(4):111-113

应用醛化的鸡红细胞经吸附释放方法获得纯化的禽流感病毒 (AIV) ,经 triton X-1 0 0处理并反复冻融制备禽流感 EL ISA抗原。应用抗鸡 Ig轻链单抗 1 B7辣根过氧化物酶结合物建立了定量检测禽流感抗体水平的 EL ISA方法。确立了将鸡血清 1 0 0倍稀释监测 EL ISA效价(ET)的回归方程 y=0 .77452 x 0 .8793 5(r=0 .9466) ,可用于定量测定。血凝抑制 (HI)抗体与 EL ISA方法的比较试验表明 ,EL ISA法比血凝抑制试验敏感 1 .5倍以上  相似文献   

犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立     

赵少若  黄甜  郝丽影  吴洪超  汪志艳  崔宁宁  王亚玲  邓均华  田克恭 《中国畜牧兽医》2022,49(11):4429-4437

【目的】 研发犬轮状病毒（Canine ratavirus,CRV）免疫学诊断试剂,制备并鉴定CRV特异性单克隆抗体,建立可用于检测CRV的胶体金免疫层析法。【方法】 以CRV临床分离株SL006株为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,用杂交瘤细胞法进行细胞融合,通过间接免疫荧光法（IFA）筛选可稳定分泌CRV单克隆抗体的杂交瘤细胞,并制备腹水,亲和层析法进行纯化获得单克隆抗体。对获得的单克隆抗体进行鉴定,经条件优化建立胶体金试纸条检测方法,对试纸条的灵敏度、特异性、重复性和应用情况进行评价。【结果】 获得了4株杂交瘤细胞,分别命名为2C12、4A5、1H3、5F3,IFA效价分别为1：6 400、1：12 800、1：1 600和1：3 200;重链亚类分别为IgG2b、IgG2a、IgG1和IgG2a,轻链亚类均为kappa;制备的胶体金试纸条检测线包被单克隆抗体4A5,对照线包被羊抗鼠IgG,金标垫包被胶体金标记的单克隆抗体2C12,对CRV病毒液的检测灵敏度为10^4.2 TCID₅₀/mL,检测犬源其他病毒犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）、犬副流感病毒（Canine parainfluenza virus,CPIV）、犬腺病毒Ⅰ型（Canine adenovirus-Ⅰ,CAV-Ⅰ）、CAV-Ⅱ、犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）病毒液及CRV阴性肛拭子和阴性粪便均为阴性;批内和批间重复性良好;利用制备的胶体金试纸条和RT-PCR方法对47份样品进行检测比较,两者符合率为93.6%。【结论】 本研究建立的CRV胶体金试纸条检测方法具有良好的敏感性、特异性、重复性,与RT-PCR方法符合率较高,可为CRV的临床快速诊断提供有效的检测方法。  相似文献   

口蹄疫病毒感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸的优化     

杨苏珍  孙亚宁  刘运超  柴书军  张改平 《中国畜牧兽医》2022,49(10):3953-3962

【目的】建立口蹄疫病毒(FMDV)感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸稳定的生产工艺,促进其产业化生产及临床应用。【方法】本研究以胶体金免疫探针结合猪IgG,FMDV结构蛋白(SP)及非结构蛋白(NSP)的表位多肽偶联载体蛋白制备人工抗原,设置两条检测线精准拦截抗体的检测模式,以试纸条特异性及敏感性为评价指标,对胶体金免疫探针用蛋白、试纸拦截用多肽抗原、检测线位置及喷膜缓冲液、金标蛋白保存液、样品垫缓冲液以及样品稀释液等参数进行优化。采用优化后的试纸检测266份田间猪血清样品,并与口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒(LPB ELISA)和3ABC阻断ELISA抗体检测试剂盒(3ABC ELISA)检测结果进行对比,计算该试纸与商品ELISA试剂盒的符合率。【结果】经优化后,口蹄疫感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸生产工艺参数如下:以胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)为免疫探针;选择混合多肽的形式设置拦截线,以非结构蛋白多肽(BSA-NSPs)喷涂T1线,结构蛋白多肽(BSA-SPs)喷涂T2线,以0.1 mol/L Tris-HCl为喷膜缓冲液;以ddH₂O含15 mg/mL BSA、13.25 mg/mL Na₂HPO₄·12H₂O、15.9 mg/mL NaH₂PO₄·2H₂O、10% Trition X-100和0.3 mg/mL NaN₃为金标蛋白保存液;以0.02 mol/L Na₂B₄O₇·10H₂O 含10 mg/mL酪蛋白、5% Trition X-100、0.3 mg/mL NaN₃为样品垫缓冲液;以生理盐水含1.0% Tween-20为样品稀释溶液。制备的FMDV感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸与3ABC阻断ELISA抗体检测试剂盒的符合率为96.20%,与口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒的符合率为94.36%。【结论】通过对试纸生产工艺的优化,建立了稳定的生产工艺,制备的二联试纸检测线显色清晰可见,肉眼识别度高,试纸的检测特异性和敏感性良好。本研究为该试纸的批量生产和产业化应用奠定了基础,为基层口蹄疫的检测提供了稳定、特异、敏感、准确的检测方法。  相似文献