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1.
将样品垫（加样区）、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上，组装成检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条。然后用其进行动物弓形虫病血清抗体检测，并用弓形虫IHA诊断试剂进行对照试验。经对已知弓形虫阴、阳性血清检测，与弓形虫IHA检测结果的符合率为82．5％，金标试纸条较弓形虫IHA诊断试剂能提前2d检测到抗体。结果表明，检测弓形虫抗体免疫胶体金试剂（金标试纸条）的敏感度高于IHA。 相似文献
2.
为方便药物残留的现场快速检测,利用胶体金免疫层析技术研制出了一种快速检测蜂蜜样本中甲硝唑残留的试纸条。将人工抗原与二抗包被到硝酸纤维素膜上依次作为检测线和控制线,样本中的甲硝唑与检测线上的人工抗原竞争性结合胶体金结合垫上的抗体-胶体金结合物,根据检测线和控制线的显色情况判断样本的阴阳性。实验结果显示：试纸条上人工抗原MNZ-BSA的包被量为0.5mg/mL,二抗羊抗鼠IgG的包被量为0.54 mg/mL;试纸条对于甲硝唑的检出限为1μg/kg,与4种硝基咪唑类药物有交叉反应,但甲硝唑的检出限最低;样本中添加溶液A处理并用乙酸乙酯作为提取剂,单个样本检测时间为20min。适用于甲硝唑残留的大规模现场快速检测。 相似文献
3.
在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴有金标抗体玻璃纤维膜结合垫,质控线侧贴有吸水垫,其中检测线包被的是纯化的狂犬病毒抗原,质控线包被的是兔抗狂犬病毒IgG,玻璃纤维膜结合垫上喷有胶体金标记的纯化的狂犬病毒抗原。检测时,取被检测犬的少量血清,滴在该试纸条的样品孔里,经过20分钟的层析作用,观察检测线和质控线的颜色,确定犬体内是否产生了有效的保护性抗体。本方法为一步检测法,具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速、无需专门仪器设备、出结果快等特点。 相似文献
4.
《中国兽药杂志》2017,(3)
为方便药物残留的现场快速检测,利用胶体金免疫层析技术研制出了一种快速检测蜂蜜样本中甲硝唑残留的试纸条。将人工抗原与二抗包被到硝酸纤维素膜上依次作为检测线和控制线,样本中的甲硝唑与检测线上的人工抗原竞争性结合胶体金结合垫上的抗体-胶体金结合物,根据检测线和控制线的显色情况判断样本的阴阳性。结果显示:试纸条上人工抗原MNZ-BSA的包被量为0.5 mg/m L,二抗羊抗鼠Ig G的包被量为0.54 mg/m L;试纸条对于甲硝唑的检出限为1μg/kg,与4种硝基咪唑类药物有交叉反应,但甲硝唑的检出限最低;样本中添加溶液A处理并用乙酸乙酯作为提取剂,单个样本检测时间为20 min。该方法适用于甲硝唑残留的大规模现场快速检测。 相似文献
5.
一、免疫胶体金技术(一)基本原理免疫胶体金技术的检测原理是以硝酸纤维膜为载体,包被已知抗原或抗体,加入待检样品后,样品中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结合,再通过胶体金标记物与之反应形成红色的可见结果,从而达到检测目的。目前,该项技术已在医学上得到广泛的应用,大多数人的传染病都已经研制成免疫胶体金检测方法。在兽医诊断领域也已开始使用,如犬细小病毒、犬瘟热病毒临床快速诊断均已开始使用免疫胶体金快速诊断试纸条。(二)临床应用1、在我国兽医领域的应用胶体金试纸条作为诊断试剂应用于兽医临床,由于它快速、准确,具有… 相似文献
6.
《畜牧与兽医》2017,(1):65-70
为检测弓形虫循环抗原,以实现弓形虫急性感染的早期诊断,本研究建立了基于ABC(avidin biotin-peroxidase complex)放大系统的双抗体夹心ELISA方法。通过制备弓形虫排泄分泌抗原(ESA)并免疫动物,经3种抗原的筛选以获得抗循环抗原(CAg)的单抗,以方阵滴定法确定最佳多抗包被浓度和单抗工作浓度,利用夹心法和ABC放大系统建立检测弓形虫循环抗原的夹心ABC-ELISA方法,用该方法对人工感染犬血清和其他阳性血清样本进行检测以确定该方法的检出时间和准确性,并应用于临床样品的检测。结果:获得了3株针对不同抗原表位的单克隆抗体,并对CAg有较高特异性。双抗体夹心ABC-ELISA反应条件:兔多抗包被浓度为3.7μg/mL,生物素标记3A5、3E5和10F5-3单抗在混合工作液中的浓度分别为0.1、0.13和0.12μg/mL。该ELISA方法对ESA最低检测限为11.9 ng/mL,并与隐孢子虫早期感染牛血清、血吸虫尾蚴早期感染牛血清、艾美耳球虫早期感染鸡血清、犬瘟热急性感染早期血清、犬细小病毒急性感染血清无交叉反应。用该ELISA方法检测人工感染的犬,于感染后2 d血清即显示阳性,该方法能明显区分标准阳性血清和阴性血清。用该方法检测68份猪临床血样(其中包括2份标准阳性血清),检测结果与Nest-PCR结果一致。表明该双抗体夹心ABC-ELISA方法特异性强、敏感性高,可用于弓形虫急性感染的早期或活动期的诊断。 相似文献
7.
本试验旨在探讨一种能够快速、简便及特异检测MHV病毒的金标检测方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗小鼠肝炎病毒(MHV)抗体,选择优化层析条件,建立双抗体夹心模式的免疫层析法试纸条对MHV进行检测。20 nm左右的胶体金颗粒、5.05 μg为最低稳定抗体量(稳定0.5 mL胶体金)、M135层析材料、3%BSA是最佳封闭液。640 μg/mL抗体蛋白为最适检测线包被浓度,而800 μg/mL抗体蛋白为质控线最适包被浓度。此试纸条能10 min快速特异地检测出MHV抗原,阳性时检测线和质控线均显示红色,阴性时则只有质控线显示红色。结果表明,胶体金免疫层析方法能快速、特异、稳定地检测MHV抗原。 相似文献
8.
为快速检测犬冠状病毒,研究利用胶体金免疫层析技术制备和评价犬冠状病毒抗原检测卡。试验通过将胶体金标记的CCV Ab1和鼠IgG涂布于聚酯纤维膜上作为标记垫,生物素耦联的CCV Ab2处理在样品垫上,链霉亲和素和羊抗鼠IgG包被于NC膜上分别为检测线和质控线,与吸水纸和PVC底板制备犬冠状病毒抗原胶体金检测卡,并对其评价。结果:该检测卡不与其他病毒发生交叉反应,可检测浓度低至2 ng/mL的样本,24月是稳定的。结论:该测试板具有良好的特异性、灵敏度、重复性和稳定性,并且与RT-qPCR的结果较符合。因此,该检测卡能快速、准确地检测犬冠状病毒,为动物临床诊断和治疗提供参考。 相似文献
9.
应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,在玻璃纤维膜上包被胶体金标记PCV-2抗原(cap蛋白),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被PCV-2抗原(cap蛋白)和PCV-2单抗,制成猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸条。该试纸条与猪圆环2型抗体酶联免疫检测试剂盒对比,符合率为94.7%,整个实验过程只需15 min,与ELISA试剂盒比较,具有操作方便、快速、直观的优点。 相似文献
10.
动物尿液中沙丁胺醇残留检测试纸条的研制 总被引：1，自引：0，他引：1
为了制备可用于检测动物尿液中沙丁胺醇(SAL)残留的试纸条,试验采用胶体金免疫层析方法,首先将小分子SAL进行改造,并在此基础上制备SAL抗原和抗SAL抗体,进而制备得到胶体金标记抗体,然后将其喷涂于胶体金结合垫,并与样品垫、硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水纸及塑料底板组装,得到SAL检测试纸条。结果表明:试纸条对猪尿、牛尿、羊尿中SAL的检测限为3.0μg/L,检测时间为5 min,特异性高,重复性良好,与仪器检测方法结果一致,可用于动物尿液中SAL的现场快速检测和筛选工作。 相似文献
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目的:建立一种快速检测牛结核抗体的新方法,用以诊断牛结核病。方法:利用胶体金免疫层析技术原理,用大肠杆菌表达的牛分枝杆菌重组抗原MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条。结果:粒径为40nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高;胶体金最佳标记pH值为6.0;MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5μg;MPB70抗原的最适包被浓度为3.0mg/mL;抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5mg/mL;交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性。比较实验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条。在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较。本试纸条与牛分枝杆茵分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%。结论:快速检测牛结核抗体的胶体金免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核根除计划中具有良好的应用前景。 相似文献
12.
为快速检测猪群中猪圆环病毒2型抗体,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记纯化的猪圆环病毒Cap蛋白和兔IgG,包被至玻璃纤维膜上制备金标垫,将纯化抗原和羊抗兔IgG分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了检测猪圆环病毒2型抗体的胶体金免疫层析方法并组装检测卡。结果显示,组装的检测卡只与圆环病毒阳性血清发生特异性反应,阳性血清稀释10倍后仍然能够检出。用此检测卡与商品化ELISA试剂盒对100份临床血清进行平行检测,阳性率分别为89%和93%,两种方法符合率在95%以上。该方法操作简便、特异性强,可广泛应用于基层,也为圆环病毒疫苗效果评价提供了良好的试剂选择。 相似文献
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为建立一种简易、快速检测动物血清中的旋毛虫排泄分泌(Excretory-secretory,ES)抗原的胶体金免疫层析试纸法,本研究选用旋毛虫53 ku ES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(MAb).利用辛酸-饱和硫酸铵法和亲和层析柱联合法纯化MAb及兔抗旋毛虫53 ku ES多克隆抗体,利用枸橼酸三钠还原法制备的胶体金颗粒标记MAb,制备免疫金标试纸条.结果表明,获得的2株IgG1型杂交瘤细胞系4D10和5A2能够稳定分泌抗体,且效价高;胶体金标记MAb 4D10所制备的试纸条具有重复性好、灵敏性和特异性高的优点;该试纸条4℃条件下可密封保存6个月以上. 相似文献
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犬细小病毒胶体金检测试纸条的制备与初步评价 总被引：1，自引：0，他引：1
为快速检测及诊断犬细小病毒及其引起的传染性疾病,应用胶体金免疫层析技术．采用柠檬酸三钠还原法制备25nm的胶体金颗粒,标记抗犬细小病毒单克隆抗体CPV—F1株后包被于玻璃纤维膜作为金标垫,在硝酸纤维素膜上分别包被羊抗小鼠IgG二抗和抗犬细小病毒单克隆抗体CPV—B6株作为质控线和检测线,将吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫分别粘贴于背衬板上制成犬细小病毒抗原胶体金检测试纸条。特异性试验及与血凝试验的对比结果表明,该试纸条具有良好的特异性和敏感性,与进口产品的总符合率为98％。本研究为进一步研发犬细小病毒检测试纸奠定了基础。 相似文献
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制备1种检测猪弓形虫血清循环抗原的免疫胶体金试纸条。利用柠檬酸三钠还原法制备40nm的胶体金溶液,标记抗弓形虫表面抗原SAG3(surface antigen 3,SAG3)单克隆抗体(Anti-A-SAG3-7),用另1株抗弓形虫表面抗原SAG3单克隆抗体(Anti-A-SAG3-23)与羊抗小鼠IgG抗体分别包被于硝酸纤维素膜(NC膜)上的检测线和质控线,制备并优化免疫胶体金试纸条检测条件。胶体金溶液的最适pH值为加入4μL 0.2 mol/L K2CO3时的pH值。Anti-A-SAG3-7的最适标记量为12μg。最佳NC膜为Millipore 135。T、C线抗体最佳包被质量浓度均为0.25g/L,T、C线抗体最佳包被体积均为8μL。试纸条的灵敏度达1∶160,与猪囊虫阳性血清无交叉反应。稳定性试验表明,该试纸条置于室温至少可保存1个月有效,置于4℃可保存3个月有效。对广东某地区、吉林某地区猪场的各94份猪待检血清进行检测,分别有17,10份为阳性血清,样品阳性率为18.08%,10.63%。本研究制备的胶体金试纸条具有操作简单,敏感特异等优点,适合临床基层单位对猪弓形虫病的早期诊断及流行病学调查。 相似文献
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猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸的研制 总被引：2，自引：0，他引：2
应用酶联免疫原理和胶体金层析技术,采用特殊的生产工艺,在玻璃纤维膜包被胶体金标记PCV-2抗原,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被PCV-2抗原和兔抗PCV-2抗体,制成猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸.当待检样品阳性时,在检测线处形成抗原抗体的免疫复合物而凝聚显色;当待检样品阴性时,检测线处不形成抗原抗体免疫复合物不显色.整个试验过程只需15 min.试纸与ELISA试剂比较,两者都具有微量、特异、准确的优点,且金标试纸独具操作方便、快速和结果直观、容易判定的优点. 相似文献
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试验旨在快速检测犬巴贝斯虫抗体,利用胶体金免疫层析技术制备犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡并评价其功能性。将羊抗鼠免疫球蛋白G (IgG)和犬巴贝斯虫表面抗原Bg P47重组蛋白（Bg P47 Ag）包被于NC膜上分别做为质控线和检测线,胶体金标记的鼠IgG和鼠抗犬IgG均匀喷点在聚酯纤维膜上作为标记垫,将化学品配制的玻纤溶液均匀涂在样品垫上,并用吸水纸和PVC底板制备犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡,对其特异性、灵敏度、均一性、加速稳定性、实时稳定性进行评价,并与ELISA、PCR检测结果进行对比。结果显示,该检测卡不与犬莱姆抗体（lyme Ab）阳性犬血清、犬瘟热病毒抗体（CDV Ab）阳性犬血清、犬细小病毒抗体（CPV Ab）阳性犬血清、犬无形体抗体（Anaplasma Ab）阳性犬血清、犬三联疫苗阳性免疫犬血清样本发生交叉反应;可检测浓度稀释至1∶256倍的样本;有效期可达到24个月。研究表明,该检测卡可快速、准确地检测犬巴贝斯虫抗体,为动物临床诊断和治疗提供参考。 相似文献
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牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和应用 总被引：10，自引：0，他引：10
为了建立一种快速检测牛分支杆菌抗体的新方法用于诊断牛结核病,利用胶体金免疫层析技术原理,用原核诱导表达的牛分支杆菌抗原蛋白MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条.结果表明,粒径为40 nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.0,MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5 μg,MPB70抗原的最适包被浓度为3.0 mg/mL,抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5 mg/mL,交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性.比较试验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条.在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较.本试纸条与牛分支杆菌分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%.快速检测牛结核抗体的免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核病根除计划中具有良好的应用前景. 相似文献
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《国外畜牧学(猪与禽)》2020,(7)
猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)的感染与断奶仔猪多系统衰竭综合征(PostweaningMultisystemicWastingSyndrome,PMWS)的发生密切相关。为快速便捷地检测猪圆环病毒2型抗体,本次试验主要采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,运用金黄色葡萄球菌蛋白A蛋白(Staphylococal Protein A,SPA)作为标记蛋白制备金标垫,分别以猪圆环病毒抗原表位肽和SPA免疫兔血清纯化IgG作为检测带(T带)与质控带(C带),经多次重复试验,分别确定了胶体金的最佳标记浓度、最适pH、重悬液和样品垫处理液的最佳配方以及检测带(优势抗原表位肽)和质控带(多抗IgG)的最适包被浓度,最终装配成抗体检测试纸条,用以检测已知的PCV2阳性血清和阴性血清,验证其检测的敏感性、特异性与稳定性。结果表明,经纳米粒度仪检测可得知胶体金颗粒大小在10 nm～14 nm之间。用SPA标记胶体金的最适pH为6.0,最佳标记量为7μg/mL。检测带和质控带的蛋白包被浓度均为1mg/mL。经验证,该试纸条不同批次间以及同一批次内重复性较好,具有较好的灵敏度、特异性和稳定性,能够准确检测猪血清样品中的抗体水平,可以进一步评价猪圆环病毒病疫苗的免疫效果。 相似文献