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1.
《畜牧兽医学报》2020,(3)
旨在揭示金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素可能存在细胞壁增厚的耐药机制。2016—2018年间,采集宁夏地区部分奶牛养殖场临床及亚临床型乳腺炎的乳样,通过显色培养基鉴别、镜检及PCR方法,分离鉴定牛乳源金黄色葡萄球菌;利用微量肉汤稀释法测定细菌对14种抗菌药物的耐药性,了解本地区金黄色葡萄球菌的耐药率及多重耐药情况;通过qRT-PCR方法检测细胞壁增厚相关的pbpB、murG、glmU、atlR基因转录丰度,并结合透射电镜进行形态观察,以确定增厚及发生原因。结果显示,分离鉴定出261株牛乳源金黄色葡萄球菌,其中包括9株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)。药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素具有较高的耐药率,其中氨苄西林为79.69%,青霉素为78.54%。多重耐药情况是以3、7和8重耐药的菌株居多;其中1株耐药种数达14种之多。qRT-PCR结果表明,4种相关基因的转录丰度均极显著上调(P0.001或P0.01)。透射电镜观察发现,甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(methicillin sensitive Staphylococcus aureus, MSSA) JY21菌株的细胞壁在64和128μg·mL~(-1)的青霉素浓度下,较对照组均极显著增厚(P0.001),并可见细胞壁表面粗糙,有结节状凸起;但药物浓度从64μg·mL~(-1)升高至128μg·mL~(-1)细胞壁不再显著增厚(P0.05)。MRSA WLD10菌株细胞壁未出现明显增厚(P0.05)。综上所述,本地区牛乳源金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素,存在细胞壁增厚的耐药机制;增厚的原因主要是肽聚糖的过度合成及细胞自溶的减少。与MSSA JY21菌株相比,细胞壁增厚并非MRSA WLD10重要的耐药机制。 相似文献
2.
旨在探究硫酸铜溶液连续诱导对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）抗菌药物抗性及相关基因表达的影响。采用微量肉汤稀释法测定经硫酸铜诱导前后MRSA菌株（MR-YB1224、MR-YS3和MR-P318）对硫酸铜溶液及β-内酰胺类（氨苄西林、苯唑西林和头孢西丁）、氟喹诺酮类（氧氟沙星）、大环内酯类（罗红霉素）和氨基糖苷类（链霉素）等抗菌药物的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）；采用荧光定量PCR方法测定硫酸铜诱导对菌株抗重金属基因（copA和arsB）和耐药基因（mecA，norA，ermB和aac6'/aph2″）表达的影响。连续诱导7 d后，MRSA菌株对硫酸铜溶液的MIC值均增加；特别是对β-内酰胺类抗菌药物的MIC值增加显著（P<0.05）；MRSA菌株对6种抗菌药物MIC值变化大小依次为苯唑西林 > 氨苄西林 > 头孢西丁 > 氧氟沙星 > 链霉素 > 罗红霉素。另外，连续诱导后，MRSA菌株的抗重金属基因和相关耐药基因的表达均显著上调（P<0.05）。本试验结果表明，硫酸铜溶液诱导对MRSA菌株抗菌药物抗性效应具有较强的协同效应。 相似文献
3.
4.
本研究旨在从中药小分子库中筛选出金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）转录调控因子MgrA的单体抑制剂,并探讨其对金黄色葡萄球菌主要毒力因子的影响及对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的治疗作用。使用荧光各向异性分析法进行抑制剂的筛选,通过实时荧光定量PCR、溶血试验及纤维蛋白原黏附试验考察药物对MrgA调控的相关毒力基因转录表达及对溶血和黏附的抑制作用,采用热稳定迁移试验对其抑制机制进行初步探讨,最后通过建立小鼠肺炎模型评估鸢尾黄素对金黄色葡萄球菌诱导的小鼠肺炎的治疗作用。结果显示,鸢尾黄素作为MgrA的抑制剂,在不影响细菌生长的低浓度下（IC50=20.35 μg/mL）就能显著抑制MgrA的活性（P<0.05）;实时荧光定量PCR结果显示,鸢尾黄素可显著降低fnba基因的转录水平（P<0.05）,极显著降低hla和RNAⅢ基因的转录水平（P<0.01）,同时极显著上调ebh、srap和spa基因的转录水平（P<0.01）;溶血试验显示,8 μg/mL鸢尾黄素可极显著抑制USA300菌株的溶血作用（P<0.01）;纤维蛋白原黏附试验证实32 μg/mL鸢尾黄素可极显著抑制USA300菌株的黏附活性（P<0.01）;热稳定迁移试验揭示了鸢尾黄素是通过与MgrA结合从而抑制其活性。小鼠肺炎试验结果显示,鸢尾黄素能极显著提高金黄色葡萄球菌感染小鼠的存活率（P<0.01）,极显著减少其肺脏载菌量（P<0.01）,并减轻小鼠肺脏组织的病理损伤和炎症反应。以上结果表明,鸢尾黄素能通过抑制转录调控因子MgrA的活性对金黄色葡萄球菌感染引起的小鼠肺炎起到治疗作用,可作为开发治疗金黄色葡萄球菌感染的先导化合物,并为以毒力因子MgrA为靶标的药物研发提供了理论依据。 相似文献
5.
本研究旨在分析猪源ST9型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,MRSA)中前噬菌体的流行情况、结构特点和转导能力,探究前噬菌体在猪源MRSA流行克隆形成中的作用。基于全基因组信息,分析了近年来从我国多省分离的131株ST9型MRSA中前噬菌体的流行率、分型、亲缘关系和结构特征;选取含不同分型前噬菌体的菌株进行诱导,对诱导获得的噬菌体颗粒进行转导,测定转导子的耐药表型及体外适应性。研究结果显示：猪源ST9型MRSA的前噬菌体携带率为78.6%(103/131株),其中,63株携带完整前噬菌体序列,所有前噬菌体序列均不含耐药基因,仅2.9%(3/103株)的前噬菌体序列含毒力基因;前噬菌体谱型丰富,其整合酶分型主要为Sa2int和Sa4int;各型别前噬菌体结构同源性较高,完整前噬菌体可被诱导为长尾噬菌体;噬菌体颗粒可包装供体菌的aadD、tet(L)耐药基因并转导至受体菌中;转导子可获得卡那霉素、四环素耐药表型,体外生长能力与受体菌株无明显差异(P>0.05)。研究结果表明：猪源ST9型MRSA的前噬菌体携带率较高,谱型丰富,不携带耐药基因,部分噬菌体可包装供体菌的耐药基因转导至受体菌,产生的适应性代价小。 相似文献
6.
旨在对牛源金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.aureus）的生物被膜、耐药性、毒素基因和agr基因型进行研究，并分析agr基因型与毒素基因之间的相关性。分别用微量滴定板法、药敏纸片法和PCR对S.aureus的生物被膜、耐药性和毒素基因进行检测，用多重PCR对S.aureus进行agr分型。结果表明，336株牛源S.aureus均能形成生物被膜，其中，形成中等（++）和强（+++）生物被膜的S.aureus分别占52.1%和47.9%。药敏试验结果显示，S.aureus对青霉素耐药最为严重，耐药率达91.7%，其次是红霉素、卡那霉素、克林霉素和庆大霉素，耐药率分别为89.6%、72.9%、66.7%和60.4%，而所有S.aureus对呋喃妥因和利奈唑胺均表现为敏感。PCR检测结果显示，黏附素基因fnbA检出率最高，达99.7%，其次是icaD、icaA、clfA和cna，检出率分别为98.2%、89.6%、86.0%和56.0%，bap基因检出率最低，为14.6%。肠毒素基因sea的检出率为26.5%，其次是seb（8.3%）和sec（6.8%），毒素基因tst的检出率占8.3%。分型结果显示，agr Ⅰ型S.aureus是主要的流行菌株，占77.1%，agr Ⅱ、agr Ⅲ和agr Ⅳ型S.aureus流行率分别为14.0%、4.8%和2.1%。统计分析结果表明，agr Ⅰ型S.aureus更具有携带多种毒素基因的潜力，而agr Ⅳ型S.aureus无毒素基因携带潜力。综上表明，牛乳腺炎性S.aureus对常见的抗菌药物耐药严重，毒素基因分布多样，agr Ⅰ型是奶牛乳腺炎性S.aureus主要的基因型，且具有携带多种毒素基因的能力，其潜在威胁应引起重视。 相似文献
7.
旨在探讨金黄色葡萄球菌（S.aureus）型和大肠杆菌（E.coli）型乳腺炎奶牛乳腺组织的炎症相关因子基因的mRNA转录水平。将105 CFU·mL-1的S.aureus和E.coli经乳导管分别注入奶牛乳房,在感染第7天采用活体无菌手术法采集乳腺组织,并采用组织HE染色和免疫荧光法进行乳腺炎模型的鉴定;利用qPCR分别检测了2个诱导组和对照组奶牛乳腺组织的趋化因子家族（CCL2、CCL8、CXCR1、CXCL2和CXCL13）、补体因子（CFI和CFB）、自噬调节因子DEPP1和白细胞介素受体IL21R共9个基因的mRNA转录水平。结果显示：与对照组相比,TLR4/NF-κB炎症相关信号通路中的关键分子（TLR4、NF-κB和TNFα）在2个诱导组乳腺组织中的蛋白表达水平均极显著上调（P<0.01）;结合HE染色结果,表明本试验成功构建了2种类型的奶牛乳腺炎活体模型。mRNA转录水平的检测结果表明,与对照组相比,7个基因（CCL2、CCL8、CXCR1、CXCL2、CFI、CFB和IL21R）在2个诱导组乳腺组织中的mRNA转录水平均极显著上调（P<0.001）,CXCL13的mRNA转录水平仅在S.aurues诱导组乳腺组织中极显著上调（P<0.01）;DEPP1的mRNA转录水平在2个诱导组中均极显著下调（P<0.01）。此外,CCL2、CCL8、CXCR1、CFI和IL21R共5个基因在E.coli诱导组中的mRNA转录水平均极显著高于S.aureus组（P<0.01）。S.aureus和E.coli感染均可导致奶牛产生严重的临床乳腺炎症状,并促使上述炎症相关基因的mRNA转录水平在乳腺组织中发生变化,以应对乳腺炎症的发生与发展过程;趋化因子CCL2等5个基因在E.coli诱导组中的mRNA转录水平显著高于S.aureus诱导组,解释了E.coli常常能引起急性乳腺炎,而S.aureus可引起慢性乳腺炎的原因。上述结果可为深入研究不同类型乳腺炎的分子调控机制提供参考。 相似文献
8.
大肠杆菌转座子及整合子携带类型与其多重耐药谱型相关性的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为探究猪源大肠杆菌转座子及整合子携带类型与其多重耐药相关性，试验采集贵州省12个规模化养猪场猪肛门拭子，分离鉴定到259株大肠杆菌。采用微量肉汤稀释法测定分离菌株对7类（16种）抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC）值，并用PCR方法检测转座子及整合子的携带情况。结果发现，受试菌株对7类（16种）抗菌药物呈现出不同程度的耐药，对大观霉素、庆大霉素、四环素为高度耐药，MIC90的耐药倍数为32倍；对亚胺培南、多黏菌素B表现敏感，MIC90的耐药倍数为2倍，其他药物的耐药倍数介于二者之间。受试菌株多重耐药最高达7重，2重以上耐药率达到100%，多重耐药谱型共计14种，以β-内酰胺类+氨基糖苷类+四环素类+酰胺醇类+磺胺类+氟喹诺酮类、β-内酰胺类+氨基糖苷类+四环素类+酰胺醇类+磺胺类+氟喹诺酮类+多肽类为主，占56.97%。受试菌株转座子和整合子检出率较高，转座子及整合子表型共计20种，其中IScp1+IS26+tnpA+tnp513+intI1和IS26+tnpA+tnp513+intI1的组合类型占比最多，分别为48.48%和26.06%。本试验结果表明，插入元件IScp1与β-内酰胺类药物耐药呈显著或极显著相关（P<0.05，P<0.01），插入元件IS26与氨苄西林耐药相关性极显著（P<0.01），与磺胺异唑耐药相关性显著（P<0.05）；整合子intI1与氨苄西林耐药相关性极显著（P<0.01）；intI2与头孢他啶耐药相关性极显著（P<0.01），与头孢噻呋、恩诺沙星、亚胺培南耐药相关性显著（P<0.05）；IScp1+IS26+tnpA+tnp513+intI1组合类型与复方新诺明耐药相关性极显著（P<0.01）；IS26+tnpA+tnp513+intI1组合类型与复方新诺明耐药相关性显著（P<0.05），与头孢噻呋耐药相关性极显著（P<0.01），但与庆大霉素耐药呈负相关关系（P<0.05）。综上，受试菌株对β-内酰胺类、氟喹诺酮类、磺胺类、氨基糖苷类的多重耐药与转座子及整合子携带类型呈显著或极显著相关。 相似文献
9.
《畜牧与兽医》2015,(11):88-90
研究旨在了解江苏省牛奶源金黄色葡萄球菌分离株中抗生素耐药基因的分布特征。经耐热核酸酶基因(nuc)和甲氧西林耐药决定子A基因(mec A)的PCR检测,78个牛奶源菌株中18株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),60株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)。采用PCR方法检测了所有菌株中氨基糖苷类耐药基因aac(6')/aph(2″)、aph(3')-Ⅲ和ant(4',4″),大环内酯类耐药基因erm A、erm C和msr A,四环素类耐药基因tet M和tet K,上述8种耐药基因的检出率分别为32.1%、20.5%、41.0%、16.7%、44.9%、12.8%、29.5%和28.2%。除erm C在MSSA菌株中的检出率高于MRSA菌株之外,其余7种耐药基因的检出率均为MRSA菌株显著高于MSSA菌株。MRSA菌株携带2种及以上耐药基因的百分率较MSSA菌株高,MRSA菌株多重耐药情况更加普遍。 相似文献
10.
为了解动物源性金黄色葡萄球菌对市售常见的各种兽用抗生素药物的耐药情况,掌握并分析其耐药性,指导临床合理使用抗菌药物。本研究通过常规细菌分离鉴定患病动物炎性分泌物,对分离菌株进行生化试验、耐药性试验、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant S.aureus,MRSA)鉴定和耐药基因鉴定,获得4株耐药金黄色葡萄球菌,2株为MRSA,2株为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillinsusceptible S.aureus,MSSA);4株金黄色葡萄球菌均检测出tetA、aac(6')/aph(2')、sul1耐药基因,其中2株MRSA检测出mecA。MRSA与MSSA均表现出了多重耐药现象,其中MRSA比MSSA的耐药现象更为广泛。因此,要更加关注MRSA的流行情况,制定规范的用药行为,严控抗生素药物的滥用。 相似文献
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为了研究前列腺素D2（prostaglandin D2,PGD2）/DP1受体途径对大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染奶牛子宫内膜组织中炎症介质HMGB-1和PAFR的表达及对组织损伤程度的影响,试验以体外培养奶牛子宫内膜组织为研究对象,应用1×10-6 mol/L DP1受体激动剂（BW-245C和15d-PGJ2）和等量（1×106 CFU/mL）大肠杆菌、金黄色葡萄球菌共同处理奶牛子宫内膜组织,采用实时荧光定量PCR、免疫组化和HE染色法检测奶牛子宫内膜组织中HMGB-1和PAFR的表达并评价组织损伤情况。结果显示,与空白对照组相比,大肠杆菌和金黄色葡萄球菌感染奶牛子宫内膜组织中HMGB-1和PAFR表达量显著升高（P<0.05）,而DP1受体激动剂与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌共处理奶牛子宫内膜组织中DP1受体激动剂显著抑制奶牛子宫组织中HMGB-1和PAFR的表达（P<0.05）。HE染色结果显示,大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染的奶牛子宫内膜组织上皮细胞和腺上皮细胞完全脱落、坏死、崩解;而DP1受体激动剂、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌共同处理奶牛子宫内膜组织中,DP1受体激动剂的加入显著减轻奶牛子宫内膜组织的损伤程度（P<0.05）。免疫组化染色法结果与以上两种方法结果一致。结果表明,PGD2能够抑制大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染的奶牛子宫内膜组织中损伤相关因子HMGB-1、PAFR的表达,减轻组织损伤程度,这一作用可能是由DP1受体所介导的。 相似文献
12.
了解胶东地区猪源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床感染现状及耐药性,为临床合理使用抗生素类药物提供数据依据。利用多重PCR方法,扩增葡萄球菌属16SrRNA基因,金黄色葡萄球菌属nuc基因以及耐药基因mecA;血浆凝固酶试验对MRSA进行鉴定;微量肉汤稀释法对MRSA的耐药表型进行检测;运用SPSS20.0软件对试验数据进行统计分析。结果显示:共分离出508株金黄色葡萄球菌,其中MRSA 122株,占24.02%;甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)386株,占75.98%。所有样品均来自健康猪只的鼻腔拭子和体表拭子。MRSA对AM和P的耐药率为100%;对CLI、CEF、TIL、CZ、EM、A/C和SXT的耐药率均在80%以上;对OFL、ENR和SF的耐药率较低,分别为13.11%,5.74%和4.10%。MSSA对EM、AM和P的耐药率均在90%以上;对CLI、CEF、TIL、CZ和SXT的耐药率均在50%以上;对ENR、OFL和A/C的耐药率分别为25.65%,47.15%,41.71%;对SF的耐药率最低为2.33%。MRSA与MSSA未检出耐VAN的菌株。MRSA的多重耐药率为100%,多集中在7耐及以上;MSSA多重耐药率为99.22%,多集中在3~11耐。结果表明,MRSA的检出率较高,MRSA的耐药率及多重耐药率高于MSSA,且均处于较高水平,应给予重视,临床应依据药敏试验结果合理选择抗菌类药物。 相似文献
13.
旨在探究原花青素（procyanidins,PC）在玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEA）诱导牦牛颗粒细胞产生氧化损伤后,对颗粒细胞生长增殖、抗氧化性以及激素分泌的影响。本试验选取3～5岁的健康牦牛（n=3）,完成卵巢颗粒细胞的分离培养,并通过免疫荧光染色鉴定颗粒细胞纯度。通过CCK-8法分别比较不同浓度ZEA （0（对照组）、5、10、20、40、60、80和100 μmol·mL-1）、不同浓度PC （0（对照组）、0.05、0.5、2.5、5、10、50和100 μg·mL-1）以及50 μmol·mL-1 ZEA+5 μg·mL-1 PC联合处理对牦牛颗粒细胞活性的影响。通过ELISA法检测对照组（未添加ZEA及PC）、50 μmol·mL-1 ZEA组和50 μmol·mL-1ZEA+5 μg·mL-1PC联合处理组牦牛颗粒细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）以及雌二醇（E2）水平。采用实时荧光定量PCR法检测不同组颗粒细胞中部分增殖生长、凋亡、抗氧化及E2合成相关基因的表达水平。结果显示,本研究所分离培养得到的细胞表达颗粒细胞标志蛋白FSHR,具有较高的纯度,可以满足后续试验要求。添加不同浓度ZEA后,颗粒细胞活力随着ZEA浓度的升高而显著降低（P<0.05）。在一定浓度范围内（0~5 μg·mL-1）,随着浓度的上升,PC对颗粒细胞的活力有显著提高作用（P<0.05）,且在浓度为5 μg·mL-1时对细胞活力的提高作用最明显。与ZEA处理组相比,ZEA与PC联合处理后颗粒细胞的数量增加且细胞活力极显著提高（P<0.05）,颗粒细胞增殖生长相关基因PCNA和IGF-Ⅱ 以及抗凋亡相关基因XIAP和BCL-2的表达显著上调（P<0.05）。相反,促凋亡相关基因BAX和CASP3的表达显著下调（P<0.05）。同时,ZEA+PC联合处理后能显著降低牦牛颗粒细胞活性氧水平并促进颗粒细胞分泌E2（P<0.05）,颗粒细胞中的抗氧化相关基因SOD2、GPX1及CAT和E2合成相关基因STAR、CYP11A1及HSD3B的表达量显著上调（P<0.05）。上述结果表明,PC可提高经ZEA处理后颗粒细胞的生长增殖能力,上调颗粒细胞的活力,提高抗氧化能力,降低ROS水平以及提高E2的分泌水平。综上所述,PC对ZEA诱导的牦牛颗粒细胞氧化损伤有一定保护作用。本研究为ZEA毒性的防治和畜牧业生产中PC的应用提供了一定的研究数据和理论支持。 相似文献
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本研究旨在阐明金黄色葡萄球菌脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞免疫作用的影响，为金黄色葡萄球菌致病性研究提供理论参考。以金黄色葡萄球菌野生株SA113（WT SA113）和SA113 lgt：：ermB脂蛋白表达缺失菌株（SA113Δlgt株）体外感染M1型小鼠骨髓源巨噬细胞，分为3组：空白对照组、WT SA113感染组（MOI：3：1）、SA113Δlgt感染组（MOI：3：1）。采用ELISA法检测M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、趋化因子（RANTES）和白细胞介素10（IL-10）的水平，实时荧光定量PCR检测Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）和含NLR家族Pyrin域蛋白3（NLRP3）基因的表达，免疫荧光法检测脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌作用的影响。结果显示，与空白对照组相比，WT SA113感染组和SA113Δlgt感染组均可显著上调M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中TNF-α、RANTES、IL-10分泌量以及WT SA113感染组TLR2、NLRP3基因表达水平（P<0.05），而TLR4基因表达量显著降低（P<0.05）；与WT SA113感染组相比，SA113Δlgt感染组M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中TNF-α、IL-1β、RANTES、IL-10分泌量以及TLR2（12 h除外）、NLRP3基因表达水平显著降低（P<0.05）。免疫荧光结果显示，M1型巨噬细胞对SA113Δlgt株的吞噬作用显著低于对WT SA113株的吞噬作用（P<0.05）。综上，金黄色葡萄球菌的脂蛋白在M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中主要通过激活TLR2和NLRP3受体，诱导细胞因子TNF-α、IL-1β、RANTES和IL-10的产生和释放。 相似文献
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通过了解胶东地区肉鸡、蛋鸡和水禽(鸭、鹅)中甲氧西林敏感/耐药金黄色葡萄球菌(MSSA/MRSA)的流行情况及耐药现状,为临床合理用药、有效控制耐药菌株的流行传播提供依据。采用细菌常规分离培养、质谱/PCR鉴定、微量肉汤稀释法和spa分型等方法,对2021年8月至10月在青岛地区采集的2730份禽源咽拭子进行MSSA及MRSA分离鉴定、spa分型及药敏试验,利用SPSS26.0软件和BioNumericsv7.6软件进行数据处理分析。2730份禽源咽拭子中共获得金黄色葡萄球菌742株(27.18%),其中MSSA 528株(19.34%),MRSA 214株(7.84%)。三种家禽菌株分离率依次为水禽(38.33%)、蛋鸡(28.45%)、肉鸡(20.33%)。351株代表性金黄色葡萄球菌共获得16种spa型别,MSSA(70.80%)和MRSA(95.30%)均是以t899为主。部分型别仅在蛋鸡(t010、t002、t3155)或肉鸡(t571、t011)或水禽(t1793、t5268、t267)中分离到。MSSA和MRSA对青霉素类、喹诺酮类等多种药物显示出高水平耐药,分别对8种和... 相似文献
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旨在探讨山羊HOX转录反义RNA（HOTAIR）及其部分家族基因与山羊皮肤黑色素沉积的关系以及它们在黑色素细胞中的表达规律。本研究采用qRT-PCR检测HOTAIR和HOXD10、HOXC11、HOXC12基因在健康成年雌性酉州乌羊（（19.16±1.44）kg）、板角山羊（（23.27±3.24）kg）皮肤组织中的mRNA水平，及其在小鼠皮肤黑色素瘤细胞（B16-F10）增殖、分化过程中（培养1、3、5和7 d）的表达模式，并分析HOTAIR与其他3个基因表达的相关性。结果显示，在皮肤组织中，酉州乌羊HOTAIR和HOXC12的相对表达量极显著高于板角山羊（P<0.01），酉州乌羊HOXD10的相对表达量显著低于板角山羊（P<0.05）；HOTAIR与HOXC12表达显著正相关（P<0.05），与HOXD10表达显著负相关（P<0.05）。在B16-F10细胞增殖阶段，HOTAIR在各阶段表达差异不显著（P>0.05），HOXC11、HOXC12和HOXD10呈"高-低-高"的表达模式，且均在培养1 d的相对表达量极显著高于3和5 d（P<0.01）；HOTAIR与HOXC11表达呈极显著正相关（P<0.01）。在B16-F10细胞分化阶段，HOTAIR表达持续上升，HOXD10表达持续下降，HOXC11在各阶段的相对表达差异不显著（P>0.05），HOXC12在培养1和5 d的相对表达量极显著高于3和7 d（P<0.01）；HOTAIR与HOXD10表达极显著负相关（P<0.01）。HOTAIR在乌皮山羊皮肤中高表达，在B16-F10细胞分化阶段的表达随着培养时间的延长而增加，HOTAIR对HOXD10存在负向调控作用。HOTAIR与HOXD10互作可能调控山羊皮肤黑色素细胞的分化与黑色素生成。 相似文献
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为揭示盘状结构域受体1（discoidin domain receptor1,DDR1）基因对水牛泌乳性能的影响,本研究构建了水牛DDR1基因真核表达载体,并对其最佳转染时间进行摸索,同时分析DDR1基因过表达对水牛乳腺上皮细胞的影响。琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,载体片段大小与目标载体片段大小一致,均为8.8 kb,测序结果显示其与目的片段序列匹配率为100%。细胞转染试验结果显示,DDR1基因过表达最佳转染时间为48 h。细胞增殖检测结果显示,DDR1基因过表达组与对照组细胞相对荧光值差异不显著（P>0.05）。细胞凋亡检测结果显示,DDR1基因过表达对水牛乳腺上皮细胞的晚期凋亡率（19.87% VS 17.49%）无影响（P>0.05）,但极显著增加了水牛乳腺上皮细胞早期凋亡率（6.48% VS 1.35%,P<0.01）。同时,DDR1基因过表达上调了水牛乳腺上皮细胞中抑凋亡基因BCL-2和XIAP的表达,而下调了促凋亡基因P53的表达。此外,DDR1基因过表达显著提高了水牛乳腺上皮细胞的迁移率（66.26% VS 58.76%,P<0.05）。综上,试验成功构建了水牛DDR1基因真核表达载体并证明了DDR1基因过表达促进了水牛乳腺上皮细胞的早期凋亡和迁移,为今后进一步研究水牛乳腺发育和泌乳性能提供了一定理论依据。 相似文献
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通过将小干扰-17β-羟基固醇脱氢酶Ⅳ（si-HSD17B4）基因转染水牛乳腺上皮细胞,检测酪蛋白、甘油三酯含量及脂肪酸相关基因的表达变化,从而揭示干扰HSD17B4基因对水牛乳腺上皮细胞中乳脂和酪蛋白的影响。采用实时荧光定量PCR检测HSD17B4 mRNA在水牛各个组织中的相对表达量。合成3条水牛HSD17B4小干扰RNA （siRNA）和1条对照si-HSD17B4-nc （si-nc）,并筛选干扰效果最佳的片段和时间。si-HSD17B4转染水牛乳腺上皮细胞后,通过酪蛋白试剂盒检测酪蛋白的表达情况,通过甘油三酯测定和油红O染色检测甘油三酯含量,通过实时荧光定量PCR检测干扰HSD17B4基因对甘油三酯、脂肪酸合成以及氧化相关基因表达的影响。结果表明,HSD17B4基因在水牛心脏和卵巢中相对高表达,且显著高于其他组织（P<0.05）。3条HSD17B4 siRNA片段均能有效地抑制HSD17B4基因的表达,其中si-HSD17B4-1干扰效果最佳,HSD17B4 mRNA表达量极显著低于对照组（P<0.01）;最佳干扰时间为24 h。酪蛋白检测结果显示,干扰HSD17B4基因对水牛乳腺上皮细胞中酪蛋白合成无影响。甘油三酯测定结果显示,干扰HSD17B4基因后细胞中甘油三酯含量上升,差异显著（P<0.05）。油红O染色结果显示,干扰HSD17B4基因后细胞中的脂滴明显增多。实时荧光定量PCR检测结果显示,干扰HSD17B4基因会使FABP3、ACSL1、DGAT1、DGAT2、PLIN2、BTN1A1基因表达量上调,分别上调9.28（P<0.01）、1.36（P<0.05）、1.17（P<0.05）、1.83（P<0.01）、1.60（P<0.01）和2.17（P<0.01）倍;同时使PPARA、SREBP1C、SCD、ACSS2、ACACA、AGPAT6、LPIN1、XDH、ABCD1、ACOX2、EHHADH、SCP2基因表达量下降,分别下调至50.55%（P>0.05）、61.15%（P<0.01）、84.91%（P<0.01）、89.34%（P<0.01）、21.88%（P<0.01）、86.48%（P<0.01）、25.35%（P<0.01）、27.24%（P<0.01）、41.74%（P<0.01）、22.17%（P<0.01）、62.70%（P<0.01）和70.33%（P<0.01）。结果表明,HSD17B4基因在水牛组织中广泛表达;si-HSD17B4高效抑制HSD17B4基因在水牛乳腺上皮细胞中的表达,未检测到干扰HSD17B4基因对乳腺上皮细胞酪蛋白的影响,干扰HSD17B4基因上调了FABP3、ACSL1、DGAT1、DGAT2基因的表达,从而促进甘油三酯的合成,同时降低ABCD1、ACOX2、EHHADH、SCP2基因的表达,减少脂肪酸β-氧化。 相似文献
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牛源金黄色葡萄球菌耐药性及甲氧西林敏感和耐甲氧西林菌株演化相关性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为研究牛源金黄色葡萄球菌耐药性以及甲氧西林敏感(MSSA)和耐甲氧西林(MRSA)菌携带的耐药基因、MRSA的SCCmec基因型,揭示牛源MSSA与MRSA之间的演化相关性和MRSA起源和扩散途径,对2009年以来中国五省区不同牛场分离的54株金黄色葡萄球菌进行了药敏试验.对确定的12株MSSA和MRSA进行了耐药基因检测、SCCmec基因型分型和多位点测序分型(MLST)研究.54株菌的药敏结果显示,对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素、氯霉素、环丙沙星、庆大霉素的耐药菌株分别为88.8％、81.5％、88.9％、90.7％、92.6％、94.4％、79.6％、63.0％和70.4％.其中,对所测10种抗生素完全耐药的占5.6％,对5种以上耐药的占85.2％,6株(11.1％)对头孢西丁耐药.12株MSSA和MRSA菌株的药敏和耐药基因检测结果显示,3株MRSA对10种抗生素耐药;6株MSSA菌中,新疆分离株对2～4种抗生素耐药,其它省区分离株对7种以上抗菌素耐药.12株MSSA和MRSA菌均检出ermC和tetK基因;6株MRSA中均检出aac(6′)/aph(2")基因,5株检出tetM基因,4株检出aph(3′)-Ⅲ基因;6株MSSA均未检出aac(6′)/aph(2")和aph(3′)-Ⅲ,4株检出tetM基因.用多重PCR对MRSA进行SCCmec基因分型显示,5株为SCCmec Ⅳ,1株未能分型;12株菌的MLST分型发现,所有菌株分为ST50、ST965、ST6、ST97和ST9序列型.经eBURST v3分析,MRSA分布在CC7、CC4、CC21和CC9四个克隆复合群(CCs)中,MSSA分布在CC7和CC32克隆复合群中.以上研究表明,我国牛源金黄色葡萄球菌不仅耐药严重,且表现多重耐药;MRSA基因型以SCCmec Ⅳ为主.对牛源SCCmec Ⅳ型MRSA与同型人源MRSA的耐药谱分析发现有较大差异,推测位于质粒或转座子上的耐药基因可能插入到金黄色葡萄球菌基因组中,导致耐药基因在不同菌株间传播.根据ST97中有MSSA和MRSA以及牛源MRSA与人源MRSA的MLST比较,确认我国牛源MRSA是在抗生素的选择压力下由来源于不同克隆复合群的MSSA获得SCCmec Ⅳ而产生,推测同一克隆株MRSA的扩散并不是MRSA大范围出现的主要原因. 相似文献
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为探明牦牛隐性乳房炎（SCM）主要病原菌及其耐药和毒力基因的分布情况，本研究自甘肃省甘南州夏季牧场收集无乳房炎临床症状牦牛乳样，通过兰州乳房炎试验（LMT）筛选SCM乳样，从中分离病原菌并纯化培养，利用16S rDNA鉴定主要病原菌，通过纸片扩散法判定其药物敏感性，并采用PCR方法对相关耐药及毒力基因进行检测。结果显示，共筛选出牦牛SCM乳样324份，检出率14.43%；主要病原菌为葡萄球菌属、埃希氏菌属和肠球菌属，其中葡萄球菌分离株对青霉素和四环素耐药率最高，分别为59.57%和47.52%；大肠埃希氏菌分离株对四环素和氨苄西林耐药率最高，分别为43.40%和20.75%；粪肠球菌分离株对四环素和红霉素耐药率最高，分别为25.00%和16.67%；59株耐青霉素金黄色葡萄球菌中共检出MRSA 12株，其中7株携带mecA基因，5株含mecC基因；四环素外排泵基因tetK、tetA携带率最高（85.45%、56.36%），核糖体保护基因tetM携带率最低（34.55%）；毒力基因中，clfA、clfB、fib、coa基因检出率较高（87.64%、84.27%、83.15%、82.02%）。研究表明，牦牛SCM的主要病原菌为金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌，均对青霉素类和四环素类抗生素耐药性较高，其中金黄色葡萄球菌的主要毒力因子为黏附因子和凝固酶。 相似文献