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1.
《江苏农业科学》2016,(8)
为探讨活性氧自由基在宿主抵抗乳腺感染中的作用,选取36只清洁级SD怀孕大鼠,于产后72 h经乳头管灌注10μg/侧脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)至第4对乳腺(两侧)内。分别于灌注前(定义为0 h)及灌注后2、4、8、16、24 h(n=6)颈静脉放血处死动物,采集样品。结果显示,LPS诱发乳腺炎引起白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)及细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达显著升高,从而促进嗜中性粒细胞(neutrophil,PMN)迁徙及活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的释放。乳腺组织N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGase)活力与ROS释放变化结果一致,LPS灌注后各时间点均显著升高,并于灌注后8 h达到峰值。结果表明,PMN是宿主抵御乳腺感染的主要效应细胞,通过释放ROS消灭病原菌,但大量释放的ROS也是引起组织损伤的重要原因。 相似文献
2.
为研究视黄醇对内毒素诱发乳腺炎大鼠的抗氧化能力的影响,将40只孕鼠随机分为正常对照组(Con,n=8)、阳性对照组(P,n=8)和试验组(T,n=24).自怀孕第10天起,试验组分别灌喂视黄醇(溶解于大豆油)4000 IU/(kg·d)(L,n=8)、8000 IU/(kg·d)(M,n=8)、16000 IU/(kg·d)(H,n=8),对照组灌喂等量的大豆油,连续10 d.产后72 h分别灌注灭菌生理盐水(Con组)和10 μg大肠杆菌内毒素(Escherichia coli endotoxin,LPS)(P和T组)到大鼠第4对乳腺内,12 h处死大鼠,收集血清及乳腺组织.试验结果显示,视黄醇灌喂降低了LPS诱发的乳腺组织中炎性细胞的浸润及组织的损伤;LPS灌注乳腺组织后乳腺组织抗氧化能力降低,灌喂低剂量、中剂量的视黄醇能显著提高乳腺组织和血清总抗氧化能力(P<0.05).研究表明,视黄醇可以通过改善机体的抗氧化机制,对LPS诱发的试验性大鼠乳腺炎发挥一定的预防作用. 相似文献
3.
72只泌乳期SD雌性大鼠随机均分成对照组和试验组(n=36),于产后0 h试验组每只肌注CpG-DNA 200μg,对照组肌注0.01 mol.L-1PBS(pH 7.2)100μL。两组于产后72 h均经乳头管灌注2×1012CFU.mL-1金黄色葡萄球菌,每侧各100μL到第4对乳腺内(两侧);分别于灌注前0 h,灌注后8、16、24、48和72 h(n=6)颈静脉放血处死。组织学观察显示,试验组乳腺腺泡内嗜中性粒细胞(PMN)在感染初期较对照组浸润迅速,试验组在72 h时已无PMN浸润,而对照组仍有浸润。与对照组相比,CpG-DNA能显著降低8、16和72 h的乳腺组织细菌数。IL-2水平在灌注后有显著下降,但与对照组相比CpG-DNA极显著提高乳腺组织0 h IL-2水平,显著提高16、24和48 h乳腺组织IL-6水平,显著降低48 h和72 h乳腺组织中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力。上述结果显示,CpG-DNA可促进炎症初期PMN的快速浸润,促进并加速细胞因子的产生及释放,减少乳腺组织细菌数量,减轻炎症介质对细胞的损伤,表明CpG-DNA对金黄色葡萄球菌感染诱发的大鼠乳腺炎有保护作用。 相似文献
4.
CpG-DNA对金黄色葡萄球菌诱导的乳腺炎大鼠的保护研究 总被引：5，自引：0，他引：5
【目的】建立金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染的大鼠乳腺炎模型，并观察CpG-DNA对乳腺的保护作用。【方法】18只雌鼠分3组(n=6)，产后72h分别灌注磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution，PBS）（C组）、2×105CFU•ml-1（L组）和2×1012CFU•ml-1 (H组)金葡菌到第四对乳腺内，24 h处死。L组乳腺病变轻微，H组腺泡结构破坏严重，并有大量嗜中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMN）浸润；H组乳腺组织TNF-α、IL-6水平显著上升。选择2×1012CFU•ml-1为诱发剂量观察CpG-DNA对乳腺的保护作用：72只雌鼠分成对照和试验组(n=36)，对照组产后0 h肌注PBS；试验组肌注CpG-DNA，72 h后灌注金葡菌到第四对乳腺内。分别于灌注前（定义为0 h），灌注后8、16、24、48和72 h（n=6）处死。【结果】感染初期试验组乳腺腺泡内PMN较对照组浸润迅速。试验组乳腺组织白细胞介素-6（interleukine-6，IL-6）在16、24和48 h显著高于对照组。CpG-DNA能显著提高0、24和72 h乳腺组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平。试验组8、16和72 h的乳腺组织金葡菌数显著低于对照组。CpG-DNA能显著提高乳腺组织中其特异性受体TLR-9（toll-like receptor-9）mRNA表达水平。【结论】CpG-DNA对金葡菌感染诱发大鼠乳腺炎的乳腺有保护作用。 相似文献
5.
为探讨视黄醇对大肠杆菌诱发的大鼠乳腺上皮细胞炎症反应的影响,原代培养大鼠乳腺上皮细胞,试验组预先经视黄醇处理24 h后,对照组和试验组分别经大肠杆菌处理30 min和60 min,收集细胞和上清液。结果显示,大肠杆菌诱发能显著提高TLR4和NF-κB表达,进而促进促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β的释放以及炎性介质iNOS(诱导型-氧化氮合酶)的表达。视黄醇处理能抑制NF-κB表达,进而降低炎性细胞因子和炎性介质的释放和表达,从而达到保护乳腺上皮细胞的作用。 相似文献
6.
[目的]阐明雷帕霉素(Rapa)对大肠杆菌诱发的乳腺感染的保护作用机制,为临床上寻找乳腺炎防控新方法提供理论依据。[方法]原代培养大鼠乳腺上皮细胞,待细胞贴壁后,试验组采用100 nmol·L~(-1)的Rapa处理4 h后,细胞经感染比(MOI)为10的大肠杆菌处理2 h后用细胞刮刀刮取细胞,收集细胞上清液,用于Toll样受体4(TLR-4)及髓样分化因子(MyD88)蛋白、促炎性细胞因子表达及活性氧(ROS)释放检测。[结果]大肠杆菌刺激原代培养的乳腺上皮细胞后,TLR-4和MyD88蛋白表达显著升高;而Rapa预处理可降低MyD88蛋白表达;同时,大肠杆菌刺激后,乳腺上皮细胞中促炎性细胞因子,如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)的表达及ROS的释放均显著升高。雷帕霉素能下调促炎性细胞因子的释放,显著降低ROS的释放量。[结论]Rapa抑制MyD88信号通路后可减轻大肠杆菌诱导的大鼠乳腺炎症反应。 相似文献
7.
【目的】为探讨卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid fraction of Bacillus Calmette Guerin,BCG-PSN)对内毒素(endotoxin or lipopolysaccharide,LPS)诱发实验性动物乳腺炎的保护机制,【方法】72只清洁级SD大鼠被随机分成实验组和对照组(n=36)。确定怀孕14d起,隔日左后腿胫骨前肌肌内注射BCG-PSN(实验组)或灭菌生理盐水(对照组)0.33mL/只,连续5次;产后72h经乳头管灌注LPS10μg/侧到第4对乳腺(两侧)内。分别于灌注前(定义为0h)及灌注后3、6、9、12和24h(n=6)颈静脉放血处死动物,采集样品。【结果】组织病理学观察显示,BCG-PSN加快了LPS诱发炎症的组织修复进程,促进了炎症后期泌乳量的恢复。定量RT-PCR结果显示,BCG-PSN能降低乳腺组织中Toll样受体-4(toll-like receptor-4,TLR-4)mRNA表达水平,实验组与对照组相比,第6、9、24h差异显著。酶活性检测结果显示,诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOs)活性在乳腺组织中和血清中变化规律相反;组织中酶活性,实验组和对照组分别在6、9h达到最高,血清中活性分别在6、3h最低。放射免疫检测结果显示,同对照组相比,BCG-PSN使乳腺组织中炎症相关细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌极值降低,极值出现时间提前,而血清中未表现出明显的变化。【结论】BCG-PSN可能通过降低TLR-4的表达,抑制炎性细胞因子及酶的过度分泌,缓解LPS及相关因子(TNF-α、iNOs)对乳腺组织的损伤。 相似文献
8.
黄芪多糖对内毒素诱发大鼠实验性乳腺炎的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
选取40只SD雌性大鼠使之交配受孕。在确定其怀孕后,30只孕鼠随机分成正常对照组、阳性对照组和试验组,每组10只。试验组大鼠每天按100 mg/kg体重灌喂黄芪多糖(APS),直至试验结束,而对照组大鼠灌喂相应体积的生理盐水(PSS)。孕鼠于产后72 h分别用灭菌PSS和50μg大肠杆菌内毒素经乳头管灌注到大鼠第4对乳腺内。灌注后24 h处死大鼠,取乳腺组织和颈静脉血进行指标测定。结果显示,阳性对照组大鼠乳腺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活性,与正常对照组相比显著升高(P<0.05);试验组大鼠乳腺组织中TNF-α浓度、NAGase活性与阳性对照组相比,显著降低(P<0.05)。结果表明,灌喂APS可以抑制乳腺组织内炎性细胞因子TNF-α的过度释放,对内毒素诱发的大鼠实验性乳腺炎有一定的保护作用。 相似文献
9.
选择同处于泌乳初期的睢宁白山羊6头,产后第5、8灭分别向左、右乳区灌注等体积的灭菌PBS和10 μg·kg-1CpG-ODN(cytosine-phosphate-guanosine dinucleotides) ,第9天于左、右乳区经乳导管灌注大肠杆菌(2 × 109CFU·mL-1) 和金黄色葡萄球菌(2 × 109CFU·mL-1) 混合菌液3 mL.分别于灌注细菌前0 h,灌注后8、16、24、48和72 h采集乳样,动态监测乳中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase) 和髓过氧化物酶(MPO) 的活力及乳铁蛋白含量变化.灌注72 h后处死动物,取乳腺组织进行组织学观察.结果显示:灌注细菌后72 h,灌注PBS的乳腺腺泡内仍有大量嗜中性粒细胞浸润,但灌注CpG-ODN的乳区已无明显细胞浸润.灌注CpG-ODN侧乳中NAGase、MPO活性均随时间变化先上升后下降,在24 h达到最大值,乳铁蛋白含量则在16 h达到最高.灌注PBS的侧乳中NAGase、MPO活性随时间变化表现出相同的规律,但NAGase峰值高于灌注CpG-ODN的一侧,MPO峰值低于灌注CpG-ODN的一侧;乳铁蛋白含量在24 h达到最大,峰值也有所升高.上述结果表明,CpG-ODN可以增强乳腺对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌联合感染诱导的山羊实验性乳腺炎的非特异性防御能力,减轻乳腺L皮细胞的损伤. 相似文献
10.
CpG-ODN对大肠杆菌诱导的山羊实验性乳腺炎乳腺的保护作用研究 总被引：1，自引：0，他引：1
选择同处于泌乳初期的睢宁白山羊6头,体重为30～40kg.产后第5d早上挤奶后,于右乳区经过乳头管灌注10μ/kg CpG-ODN,左乳区则通过乳头管灌入等体积的灭菌0.01 mol/L pH值7.2磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)作为对照,灌注后第3d按同等剂量进行二次灌注,二次灌注后第2d早上挤奶后,于左右乳区经乳导管灌注2×109CFU/ml大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)各3 ml,分别于灌注细菌前(定义为0 h),灌注后8,16,24,48,72 h收集左右乳区乳汁,灌注大肠杆菌72 h后,处死动物,取乳腺组织.临床症状观察显示,乳腺内灌注3 ml 2x 109CFU/ml的大肠杆菌能迅速诱导山羊典型的急性乳腺炎症状.组织学观察显示感染大肠杆菌后72 h乳腺腺泡内仍有少量嗜中性粒细胞(PolymorphonDClear neutrophils,PMN)浸润,但实验乳区已无浸润.乳汁大肠杆菌数在感染后16 h上升至最高.乳汁白细胞介素-6(Interleukihe-6,IL-6)水平在感染后16 h上升至最高,CpG-ODN能显著提高感染前乳汁IL-6水平,而在感染后24 h实验乳区较对照下降了33.73%(P相似文献
11.
单一或连续高温处理对奶牛乳腺细胞的生长及凋亡的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
用细胞流式、台盼蓝染色、免疫组织化学等方法研究单一高温(40 ℃1 h)或连续高温(40 ℃1 h·d-1)3～7 d对乳腺上皮细胞细胞周期、凋亡及热休克蛋白(HSP70)表达的影响.结果表明:40 ℃1 h单一高温处理乳腺上皮细胞后24 h,G2比例极显著高于对照组(37 ℃)(P＜0.01),细胞死亡率在热处理后6 h达到最大值,并极显著高于对照组(P＜0.01).高温(40 ℃1 h)诱导细胞HSP70的表达,HSP70阳性细胞比率在热处理后3 h达到最大值.连续的40 ℃1 h·d-1诱导细胞产生G2期阻滞;连续4 d以上的40 ℃1 h热处理显著地抑制了细胞的增殖(P＜0.05).结果提示:高温诱导乳腺细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,并诱导乳腺细胞HSP70的表达. 相似文献
12.
应用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定、透射电镜、免疫组化和Caspase-3活性分析等技术,检测转化生长因子猹1(TGF-β1)对奶牛乳腺组织细胞活性、凋亡和HSP70蛋白表达的影响.用10 ng·mL-1 TGF-猹1处理乳腺组织48 h,分别在不同时间点收集组织和培养液检测各指标,以0 h不加TGF-β1作为对照组.结果显示,随TGF-猹β1作用时间的延长组织细胞活率逐渐降低,24 h和48 h组显著低于对照组(P<0.05),LDH活性逐渐升高,6、12、24和48 h组极显著高于对照组(P<0.01).处理12、24和48 h组织DNA发生断裂;Caspase-3活性在24 h达到高峰,并极显著高于对照组(P<0.01);上皮细胞逐渐由腺泡脱落,腺泡塌陷,但间质结构基本完整;超微结构观察显示,48 h时上皮细胞呈现染色质凝集、线粒体肿胀等明显凋亡特征,而成纤维细胞胞浆致密、线粒体丰富,结构较完整.处理3～12 h后组织过表达HSP70,且均显著高于对照组(P<0.05).结果提示:TGF-猹1以促进上皮细胞凋亡的方式促进奶牛乳腺发生退化. 相似文献
13.
为探明在酯多糖（LPS）致炎的大鼠乳腺中,黏附因子-1（ICAM-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）表达分布的变化。取产后5 d乳房注射LPS致炎大鼠的乳腺组织,及LPS致伤的体外培养大鼠乳腺MVECs（Microvascular Endothelial Cells）,采用免疫组化方法检测ICAM-1、TNF-α和IL-1β的表达。结果表明：LPS处理大鼠乳腺后4~24 h内,乳腺组织切片试验和体外培养大鼠乳腺微血管内皮细胞（Rat MammaryMicrovascular Enclothelial Cells,RMMVECs）试验中ICAM-1和IL-1β的表达逐渐增强,TNF-α在乳腺组织切片试验中6 h表达显著增强,之后则逐渐减弱。在体外培养RMMVECs中-α表达逐渐增强。表达部位主要在乳腺上皮细胞和血管内皮细胞,IL-1β在腺泡腔中的白细胞中也有表达。由此可见,LPS处理大鼠乳腺后ICAM-1、TNF-α和IL-1β这三种细胞因子均参与了乳腺炎症过程中的免疫反应。 相似文献
14.
8只泌乳期的健康睢宁白山羊,产后72 h分别用内毒素和灭菌生理盐水经乳头管灌注左右侧乳房.灌注前及灌注后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、24 h观察山羊整体及乳房局部变化.灌注24 h后,处死动物,取乳腺组织,部分用Bou in氏液固定,部分用液氮保存.临床症状及病理切片观察均显示,山羊表现典型的急性乳腺炎症状.检测两侧乳腺组织中部分与乳腺炎症相关因子的含量及其基因表达水平的结果表明:与灌注生理盐水对照相比,灌注内毒素侧乳腺组织中N-乙酰-β-D氨-基葡萄糖苷酶(NAGase)、髓过氧化物酶(MPO)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的活性及IL-1β、IL-6的含量极显著升高(P<0.01),TNFα-含量显著升高(P<0.05);相同条件下对2种处理组织样中3种细胞因子mRNA表达水平进行PCR扩增,灌注内毒素侧能检到明显的目的条带,对照侧未见明显的目的条带. 相似文献
15.
用细胞流式、台盼蓝染色、免疫组织化学等方法研究单一高温(40 ℃1 h)或连续高温(40 ℃1 h·d-1)3～7 d对乳腺上皮细胞细胞周期、凋亡及热休克蛋白(HSP70)表达的影响.结果表明:40 ℃1 h单一高温处理乳腺上皮细胞后24 h,G2比例极显著高于对照组(37 ℃)(P＜0.01),细胞死亡率在热处理后6 h达到最大值,并极显著高于对照组(P＜0.01).高温(40 ℃1 h)诱导细胞HSP70的表达,HSP70阳性细胞比率在热处理后3 h达到最大值.连续的40 ℃1 h·d-1诱导细胞产生G2期阻滞;连续4 d以上的40 ℃1 h热处理显著地抑制了细胞的增殖(P＜0.05).结果提示:高温诱导乳腺细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,并诱导乳腺细胞HSP70的表达. 相似文献
16.
目的 研究半边旗二萜类成分PAG对人肝癌耐药细胞株增殖与凋亡机制.方法HepG2/ADM细胞用不同浓度(0～75μmol/L)PAG处理24、48、72 h,分别用MTT、流式细胞术、Western blot、DCFH-DA法检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达、活性氧自由基(ROS)水平.结果PAG呈剂量依赖性抑制细胞增殖及caspase 3、PARP和Bcl-2表达,增加G2/M期细胞分布、细胞凋亡、细胞内ROS水平及actived-caspase 3、cleaved-PARP和Bax表达,促进线粒体中细胞色素C释放到胞质;l mmol/L乙酰半胱氨酸可阻断PAG对细胞增殖的抑制作用.结论 半边旗二萜类成分PAG可通过ROS诱导的线粒体凋亡克服肝癌多药耐药. 相似文献
17.
目的:探讨半夏生物碱对肺上皮细胞炎症损伤的保护作用。方法:通过脂多糖(LPS)诱导肺上皮细胞(A549细胞)构建肺上皮细胞炎症损伤的体外模型,CCK-8法检测细胞活性;Griess试剂法测定NO释放量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测上清液中TNF-α、IL-8、ICAM-1水平;Real time-PCR法检测IL-8、ICAM-1 mRNA表达。结果:半夏生物碱能保护LPS诱导的A549细胞炎症损伤(P0.05),降低炎症模型细胞NO、TNF-α、IL-8、ICAM-1的释放(P0.05),抑制IL-8、ICAM-1 mRNA的表达(P0.05);结论:半夏生物碱可有效保护肺上皮细胞的的炎症损伤,其机制可能与抑制NO、TNF-α能炎症因子的释放有关,还可通过抑制IL-8、ICAM-1的表达,减缓其中性粒细胞的趋化作用,有利于急性肺损伤的早期防治。 相似文献
18.
支持细胞是构成曲细精管上皮的重要组成细胞,视黄醇及其衍生物是雄性动物睾丸发育和精子发生中所必须的物质,支持细胞是睾丸内视黄醇及其衍生物作用的靶细胞。本研究以3~5周龄仔猪睾丸支持细胞为材料,通过分析视黄醇对体外支持细胞活力、增殖和凋亡相关基因表达、相关细胞因子转录及合成的影响,评价视黄醇对支持细胞体外生物学特性的影响。结果显示,与对照组相比,视黄醇添加浓度达到5.000、0.125 μmol·L-1时,显著抑制培养24 h和72 h的细胞活性(P<0.05);添加1.250 μmol·L-1视黄醇组和对照组相比,增殖相关基因PCNA、BCL-2和C-MYC显著下调(P<0.05),凋亡相关基因BAX显著上调(P<0.05),且支持细胞内GDNF、CSF-1和EGF在基因表达和蛋白质水平上均显著降低(P<0.05)。体外培养条件下,添加视黄醇抑制支持细胞活性,促进细胞凋亡。 相似文献
19.
实验性乳腺炎山羊乳和血液中相关酶与细胞因子的变化 总被引：2，自引：0，他引：2
8只泌乳期的健康睢宁白山羊,产后72 h分别用内毒素(LPS)和灭菌生理盐水经乳头管灌注左右侧乳房。于灌注后0、3、6、9、24 h分别采集颈静脉血和左右两侧乳房的乳汁,分析相关酶活性和细胞因子含量。结果表明:在实验乳腺(灌注LPS)的乳中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG ase)、碱性磷酸酶(ALP)活性在24 h内持续上升,髓过氧化物酶(M PO)活性先上升后下降;而在血清中NAG ase、M PO活性先下降后上升,ALP活性在24 h内持续下降。TNFα-、IL-1、IL-6细胞因子水平在实验乳腺的乳中先上升后下降,S IgA水平在24 h内持续上升;血清中这些细胞因子也是先上升后下降;而灌注生理盐水的对照乳腺的乳中酶和细胞因子水平均无显著变化。 相似文献
20.
[目的]探究AAPH诱导的槲皮素氧化产物对Hep G2细胞氧化还原状态的影响。[方法]用紫外-可见波长扫描、HPLC-MS方法分析AAPH和槲皮素在37℃下反应12 h生成的产物结构;以槲皮素-AAPH反应产物处理Hep G2细胞24 h,测定其对细胞存活率、ROS水平及细胞总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、GSH/GSSG比值及丙二醛(MDA)含量的影响,并测定Nrf2、Keap1、NQO1、Prdx1相关抗氧化基因的mRNA表达。[结果]AAPH与槲皮素体系在反应12 h后于294 nm波长处有特征吸收,LC-MS解析结果表明该体系反应生成了含4种主要氧化产物的混合物。与空白组相比,槲皮素与AAPH氧化产物孵育显著降低了细胞存活率,同时细胞内ROS水平和MDA含量升高,细胞内T-AOC水平、GSH-Px及SOD活性显著降低,并显著下调Nrf2、NQO1、Prdx1 mRNA表达,上调Keap1 mRNA表达。[结论]槲皮素氧化产物可造成Hep G2细胞出现氧化应激。 相似文献