猪源HBV样病毒感染的研究     

沈柏青  孙连贵  董跃  王宝生  孙昌荣  曹占国  赵丽泽  杨福林  童文德  孙长春  王志泉  黄创海  刘伟林  曲颖  贾琳  任政华 《中国兽医学报》1992,(4)

用检测人血清乙肝标志物的试剂和方法,检测2823份猪血清,检出HBsAg阳性血清56份(56/2823),阳性率为1.98%,不同地区的检出率在1.0%～4.5%之间.对37份HBsAg阳性血清检测了抗—HBS、HBeAg、抗—HBe、抗—HBe.共检出阳性23份(23/37);100份HBsAg阴性猪血清与37份HBsAg阳性猪血清经双育试验检测谷丙转氨酶,有非常显著性差异,血清HBsAg阳性猪的肝脏有中等度到重度的病理组织学变化(11/11);用ELISA法检测HBsAg阳性猪血清中人聚合白蛋白受体(PHSA—R),21份样品中有19份阳性(19/21),而HBsAg阴性猪血清10份未检出阳性;用生物素—亲和素标记的HBV—DNA探针检测HBsAg阳性猪血清.11份样品有41份阳性(4/11);采用从人血清中提纯Dane颗粒的方法,从8份猪血清中都提纯了类似Dane颗粒的病毒粒子(8/8);提纯的病毒粒子和Dane颗粒与羊抗—HBV作免疫电泳,沉淀线基本一致;用2mL含HBV样病毒颗粒的猪血清接种10头仔猪,有3头感染(3/10).传至第3代,10头仔猪4头感染(4/10).实验证实,猪源HBV样病毒粒子是一种新发现的病毒,和HBV相比,抗原有相关性,基因有同源性.  相似文献   

免疫组织化学法检测北京地区牛肝脏中戊型肝炎病毒抗原   总被引：1，自引：0，他引：1  

尹君  佘锐萍  李睿文  孙泉  毛晶晶  于品  吕东强  潘亚涛 《动物医学进展》2010,31(Z1)

收集北京地区2月龄犊牛49份肝脏样品,34份血清样品,屠宰肉牛肝脏样品153例和60份屠宰牛血清样品。肝脏样品经戊二醛-多聚甲醛固定,包埋,切片,最后进行HE及免疫组化染色。肝脏HE染色结果显示,大多数的肝脏中均出现炎性细胞浸润及纤维组织增生。免疫组织化学染色结果显示,在49例犊牛肝脏样品中,阳性检出率为48.8%(24/49),而153例屠宰牛肝脏样品阳性检出率仅为13.7%(20/153)。血清样品HEV ELASA检测结果表明,34份犊牛血清中检测出1例阳性样品,阳性率为2.95%,60份屠宰牛血清样品检出阳性样品2例,占3.33%。  相似文献   

猪源乙型肝炎病毒样病毒的提纯与鉴定   总被引：4，自引：0，他引：4  

沈柏青  任政华 《黑龙江畜牧兽医》1993,(7):7-9

用检测人血清乙肝标志物的试剂和方法,检测2823份猪血清,检出HBsAg阳性血清56份。对37份HBsAg阳性猪血清检测抗—HBs、HBeAg、抗—HBe、抗—HBc,有23份呈阳性结果。取双阳性血清经氯化铯梯度离心,获得了形态与HBV相似的病毒粒子,其比重为1.30,分子量为2.2×10~5道尔顿。将其与抗HB_(?)做免疫电泳,可见有沉淀线形成。以常规方法提纯其基因片段,以HBV引物为以基因引物做PCR扩增,结果可见有基因片段形成。其位置与HBV扩增物相近,证实两株病毒有基因同源性。试验结果认定,此毒为猪源HBV样病毒。  相似文献   

用酶联免疫吸附试验检测牛传染性鼻气管炎病毒抗体的敏感性和特异性     

H.J.Cho  J.G·Boh  方芷平 《中国动物检疫》1986,(1):43-47

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测牛血清中牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体的技术已经得到了发展。我们用ELISA方法检测从无IBR病毒牛群中采集的304份血清,其特异性为100%;检测经鼻内疫苗接种免疫后采集的62份牛血清,其诊断敏感性在免疫后第一个月为27.4%,第六个月为100%,检测标准血清中和抗体滴度≥1:2的303份牛血清,其敏感性为100%;463份随意诊断样品经比较试验证明ELISA检出血清阳性牛(61.6%)比标准血清中和试验(49.9%)要高。因此,我们认为ELISA具有技术上的优越性,可以作为一种常规诊断试验来检测牛血清中IBR病毒抗体。  相似文献   

赤羽病病毒Real-time RT-PCR检测方法的建立与初步应用     

《黑龙江畜牧兽医》2010,(13)

为了研究赤羽病病毒的检测方法,试验根据GenBank中已发表的赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)的S基因序列建立了检测AKAV的Real-timeRT-PCR方法。结果表明:该方法对AKAV的检测有高度的特异性,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)等13种病毒均无交叉反应;Real-timeRT-PCR能够扩增稀释度为1×10-5的病毒RNA(核酸含量约1.18ng/μL),比普通RT-PCR高出1000倍;用此方法检测130份奶牛血清样品与1份流产胎儿病料,均未检测到阳性样本;AKAV在血清模拟样品中可被有效检出。  相似文献   

四种方法检测广西奶水牛结核病的比较     

谢志勤  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢丽基  温娟  蓝如束  张振荣  黄海强 《中国动物检疫》2010,27(11):52-55

应用牛结核菌素对奶水牛进行牛结核病皮内变态反应的检测,然后对皮内变态反应阳性牛采样进行分离培养、γ-干扰素ELISA和聚合酶链反应检测,比较这四种检测方法的符合率。结果共对1850头奶水牛进行皮内变态反应检测,皮内变态反应阳性的奶水牛有78头,从78头反应阳性的奶水牛中分离鉴定为牛分枝杆菌的有2份,γ-干扰素ELISA方法检测为牛分枝杆菌阳性的有5份,PCR方法鉴定阳性的有4份;阳性检出率以变态反应为最高78/1850(4.21%),γ-干扰素ELISA方法为5/78(0.27%),PCR检测方法为4/78(0.21%),而分离培养为最低2/78(0.105%)。变态反应与分离鉴定的符合率最低,为0.105%;γ-干扰素ELISA方法、PCR方法与分离鉴定的符合率较接近,分别为40%和50%。γ-干扰素ELISA检测方法和PCR检测方法具有较好的特异性,可以作为变态反应检测的补充。  相似文献   

贵州奶牛传染病检测和预防的研究     

谭诗文  冉懋韬  艾玉萍  腾传孝  王凡 《中国畜牧兽医》2010,37(6):199-202

2006—2008年对贵州省内610份奶牛血清进行检测,其中有116份血清为乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性,平均阳性率19%;534份牛血清样品中,检出奶牛传染性鼻气管炎阳性血清29份,阳性率为5.4%,而运用血清补体结合反应(CFT)检测奶牛传染性胸膜肺炎,均为阴性。将HBsAg、HBeAg双阳性奶牛肝组织做电镜观察,发现肝组织中有密集的HBV颗粒。结果表明,贵州省奶牛可能存在乙型肝炎、传染性鼻气管炎的感染,应当引起奶牛养殖者的高度重视。  相似文献   

犊牛流行性腹泻病原研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

宋广林  董惠兰  滕庆  杨峥  刘笃冠  王清兰  段廷樾  孟加敏  秦政 《畜牧兽医学报》1985,(2)

犊牛流行性腹泻是乳牛主要死亡原因之一,1982年7月底至1983年5月底北京市某牛场发生犊牛流行性腹泻,患病率86.6％,腹泻死亡率为30.5％。通过直接电镜观察27份粪便标本发现牛细小病毒14份(51.9％)、轮状病毒1份、冠状病毒6份(其中2份与细小病毒混合感染)。观察到牛细小病毒颗粒的11头收集到双份血清以恢复期血清制备免疫电镜标本,均可见免疫复合物。以电镜仅发现较多牛细小病毒颗粒之几份粪便标本混合,粗提抗原,做微量补体结合试验,19份获双份血清者,17份恢复期血清抗体滴度呈4倍以上增高。首次采用SPA协同凝集试验方法检测牛细小病毒,阳性率为48.2％。  相似文献   

广西牛羊赤羽病和蓝舌病流行病学调查   总被引：1，自引：0，他引：1  

林俊  覃绍敏  白安斌  曹颖颖  饶桂波  吴健敏 《中国预防兽医学报》2014,36(10)

为了解赤羽病病毒(AKAV)和蓝舌病病毒(BTV)2种虫媒病毒(Arbovirus)在广西的流行与分布情况,本研究对采集自2010年～2011年广西11市的706份牛、羊血清样品进行检测,共检测出AKAV抗体阳性样品382份,总阳性率为54.11％.其中山羊血清82份,阳性率为28.37％(82/289);牛血清300份,阳性率为71.94％(300/417).BTV抗体阳性样品279份,总阳性率为39.52％.其中山羊血清95份,阳性率为32.87％(95/289),牛血清样品184份,阳性率44.12％(184/417).同时检测出2种虫媒病毒抗体185份,占样品总数的26.20％.本研究结果表明2种虫媒病毒在广西广泛流行,并首次证明广西存在AKAV的感染.  相似文献   

山西省牛羊蓝舌病血清流行病学调查与分析     

陈建闪  申杜娟  于叶平  王俊东  马海利 《中国动物检疫》2016,33(9):16-19

为了解蓝舌病病毒(BTV)在山西省的感染及分布情况,采用竞争ELISA方法,对分别在2013年和2015年的5—6月份采自山西省11个市的1 090份牛羊血清样品进行了BTV抗体检测,分析BTV阳性分布与地理、气候因素的关系。结果共检测出BTV抗体阳性样品127份,总阳性率为11.65%。其中,羊阳性血清96份,阳性率为19.28%(96/498);牛阳性血清31份,阳性率为5.24%(31/592)。结果表明,山西省部分地区牛羊群中存在BTV感染,且阳性率与纬度、降雨量有关。  相似文献   

河南省牛病毒性腹泻病毒地方株的分离及鉴定   总被引：2，自引：0，他引：2  

张光辉  王富晓 《河南畜牧兽医(综合版)》2005,26(5):8-10

从河南省不同地区规模化肉牛场牛病毒性腹泻(BVD)疑似病例中采集病料,将处理好的6份病料接种MDBK细胞,并盲传4代,得到了两株可产生细胞病变的病毒,经测定该两株病毒的TCID50分别为10-6.59/0.1ml和10-6.51/0.1ml;琼脂扩散试验表明该两株病毒均能与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)OregonC24标准阳性血清反应,出现沉淀线,且均能被BVDV标准阳性血清中和;电镜观察到圆形、有囊膜、直径为40～60nm、囊膜表面有突起的病毒粒子,与BVDV颗粒基本一致。动物回归试验表明,用两株分离毒攻毒的2头3月龄犊牛均出现了和BVD自然病例相似的临床症状,并检测其抗原和抗体,结果均为阳性,从而确定分离的两株病毒均为BVDV,分别将其命名为HN-1和HN-2株。  相似文献   

1.1倍全长HBV基因组克隆转染细胞系的建立     

罗强  苏怀彬  梁盼盼  袁作为  张文露  黄爱龙  胡接力 《兽医导刊》2012,33(8)

目的 构建pneo-CH9/3091真核表达质粒,并建立其稳定表达的HepG2细胞系.方法 质粒pCH9/3091包含HBVl.1倍体和CMV启动子,将PCR扩增出的带有新霉素(neo)抗性的基因片段插入pCH9/3091构建成重组质粒pneo-CH9/3091.重组质粒经酶切,测序验证正确后,通过脂质体介导转入人肝癌细胞HepG2.G418筛选后,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所得单克隆细胞培养上清液的HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg),PCR检测细胞上清液的病毒颗粒,Western blot检测细胞内HBV核心蛋白(HBcAg)的表达,以及Southern blot检测细胞内核心颗粒HBV DNA的复制情况.结果 有3株细胞系培养上清HBsAg和HBeAg检测呈现阳性,且HBV C区片段可通过PCR扩增出来,Western bot结果 提示只有细胞株HepG2 -H7可以表达HBV核心蛋白.Southern blot结果 说明此细胞株基因组中有HBV基因组的稳定整合,并且能在细胞内检测出HBV DNA复制中间体.结论 成功构建1株HBV稳定整合细胞株HepG2-H7,能持续产生HBV病毒颗粒.  相似文献   

牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒荧光探针定量RT-PCR检测方法的建立     

季新成  黄玲  段晓东  员丽娟  牛国辉  于学辉  曾新强  张彦明 《中国预防兽医学报》2011,33(1)

为建立牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒(BVDV-1)的快速检测方法,本研究采用Sephycral S-400凝胶对牛精液过滤处理后提取病毒核酸,根据BVDV-1 5'UTR保守区基因序列,设计特异性引物和荧光探针,通过反应条件的优化,建立了牛精液中BVDV-1荧光定量RT-PCR检测方法.该方法可以检测到牛精液中含量为0.0125 TCID50的病毒,灵敏度比病毒分离方法高200倍～2000倍,比常规RT-PCR方法高10倍.对从同一个牛场6个月内采集的120份新鲜牛精液和40份冷冻牛精液用该荧光RT-PCR方法检测,没有检测到BVDV-1阳性样品.对其中的10头牛定期检测精液中病毒的同时,并同步检测了全血中的病毒和血清抗体,结果血清抗体阳性牛精液中没有检测到病毒,本研究结果表明,不能以血清抗体阴阳性做为精液是否带毒的依据.  相似文献   

用异源抗体免疫荧光技术检测禽脑脊髓炎病毒和抗体     

杜元钊  李增光  隋锡俭  李葳 《中国动物检疫》1992,(3):9-11

用禽脑脊髓炎病毒免疫的鼠阳性血清作为诊断抗体,对21份待检禽血清和10份病料进行检测,其结果如下:抗体阻断荧光试验(ABET)检测21份血清中,阳性血清11份,阴性血清10份,中和试验测得,阳性血清11份(NI＞1.17),阴性血清10份;琼扩试验测得阳性血清5份。间接免疫荧光试验测得10份病料中有7份阳性,2份可疑,1份阴性,用这些可疑病料脑内接种1日龄雏鸡,成功  相似文献   

凌源县犬病毒病的调查     

张宏民  董利丰  林庆年  袁书智  郭学军  武银莲  夏咸柱 《中国预防兽医学报》1993,(1)

在凌源地区五个品种的犬中,德国黑背犬的发病率最高.达65.3%;2～3月龄幼犬发病率(82.6%)高于其它年龄组的犬.抽样检查的11份样品,有10份血清为犬细小病毒(CPV)血凝抑制抗体阳性;10份粪便的CPV血凝阳性或疑似阳性,经电镜观察见有典型的细小病毒和冠状病毒颗粒,1份脏器样品见有典型犬瘟热病毒。从2份粪便样品中分离出CPV.  相似文献   

牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立     

向文杰  李德栋  林俊  陈瑞红  杨木娇  薛飞  朱远茂 《中国预防兽医学报》2020,(1):33-39

为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)血清抗体的阻断ELISA方法,本研究以经蔗糖密度梯度离心法纯化的IBRV作为免疫原制备1株单克隆抗体(MAb),命名为cp-1-1。经间接ELISA、IFA和western blot鉴定,该MAb与IBRV呈阳性反应,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)及牛副流感病毒3型(BPIV3)呈阴性反应,具有较强的特异性。质谱分析结果显示MAb cp-1-1识别的表位位于IBRV VP8蛋白。以纯化的IBRV作为包被抗原、MAb cp-1-1作为检测抗体,建立检测IBRV血清抗体的阻断ELISA方法。该检测方法的抗原包被量为0.89μg/孔,样品稀释度为12,检测抗体MAb量为1.3μg/孔,二抗稀释度为15000。利用50份IBRV抗体呈弱阳性的牛血清(中和抗体效价为14~116)作为标准参考血清,确定该检测方法的阻断率Cut Off值为52.06%,即阻断率高于52.06%时判为阳性,低于52.06%时判为阴性。阻断ELISA方法特异性试验显示仅IBRV阳性血清检测为阳性,而BVDV、BPIV3、牛腺病毒3型(BADV-3)和O型口蹄疫病毒(O-FMDV)阳性牛血清均检测为阴性,表明该方法具有较强的特异性;该方法可检测的最低中和抗体效价为14,与病毒中和试验的敏感性一致,表明该方法具有较高的敏感性;重复性试验显示该方法批内、批间变异系数均小于10%,显示较好的重复性。对130份现地牛血清检测结果显示,该方法与病毒中和试验的符合率为98.46%。用该方法对某牛场接种IBRV灭活疫苗的牛血清进行检测,抗体阳性率为99.51%(205/206)。另外,采用该方法对我国8个省(市、自治区)的801份牛血清进行检测,IBRV的抗体阳性率为41.6%(333/801)。本研究建立的阻断ELISA方法可以用于IBRV疫苗免疫监测和血清流行病学调查,为我国IBR的防控提供技术支持。  相似文献   

河北省奶牛牛病毒性腹泻/粘膜病病毒的分离鉴定   总被引：5，自引：0，他引：5  

赵月兰  杨汉春  左玉柱  秦建华  刘占民  范京惠  张宁 《中国动物检疫》2006,23(11):29-32

从河北省某规模化奶牛场牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD/MD)疑似病例中采集病料,将处理好的病料接种MDBK细胞,盲传9代,得到了不产生细胞病变的病毒。琼脂扩散试验表明本病毒能与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)OregonC24标准阳性血清反应,出现沉淀线;细胞培养物用BVD/MD荧光抗体染色检测,可见到荧光着染的特异性细胞,荧光颗粒出现于胞浆中。双抗体夹心ELISA检测病毒抗原结果BVDVOregonC24VP/N为3.141,分离毒P/N为3.012,P/N>2,与BVDVOregonC24V结果一致;电镜观察到圆形、直径为40～60nm,有囊膜,囊膜表面有突起的病毒粒子,与BVDV颗粒基本一致。经RT-CR检测,扩增出了唯一的315bp的目的条带,进一步证实为牛病毒性腹泻/粘膜病病毒。  相似文献   

牛病毒性腹泻病毒重组E2蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用     

《畜牧与兽医》2020,(2):101-106

为建立一种简单快速、敏感特异、高通量的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体检测方法,采用原核表达方法对BVDV E2基因中免疫原性强的1段序列进行截短表达,获得了具有良好反应活性的重组E2蛋白,以重组E2蛋白为包被抗原建立了检测BVDV抗体的间接ELISA方法。结果显示:该方法检测牛副流感病毒3型(BPIV-3)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)阳性血清均为阴性,检测BVDV抗体的灵敏度可达1∶12 800,批内和批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%,与中和试验的符合率为94.44%。应用该方法检测国内外5个生产厂家的53批次细胞培养用牛血清样品,阳性污染率达39.62%;检测589份临床牛血清样品,阳性感染率为34.80%。研究表明,建立的BVDV重组E2蛋白间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和适用性,为BVDV感染的监测提供了重要工具。  相似文献   

猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立与应用     

李文良  毛立  江杰元  李彬  茅爱华  甘源 《动物医学进展》2012,33(5):8-13

采用RT-PCR方法扩增猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白主要抗原区基因,克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌BL21构建重组表达菌,经SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白得到成功表达。利用纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了间接ELISA抗体检测方法。ELISA抗原最适包被浓度为0.5μg/mL(0.05μg/孔),最佳封闭液为5g/L BSA,待检血清最适稀释度为1∶100,作用时间为1h,酶标抗体最适稀释度为1∶2 000,最适作用时间为45min,室温显色10min。用该方法检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)阳性血清结果均为阴性;批内和批间重复试验变异系数分别<5%和<8%,表明本方法具有较好的特异性和重复性。应用△E2-ELISA对350份血清样品进行检测,阳性率为77.71%,高于IDEXX试剂盒检测阳性率(67.14%),与IDEXX试剂盒阳性符合率91.06%,阴性符合率50%,总符合率77.43%。表明本试验建立的间接ELISA方法适于临床CSFV血清抗体的检测。  相似文献   

A型口蹄疫抗体固相竞争ELISA检测方法的建立     

《中国预防兽医学报》2020,(9)

为评价A型口蹄疫疫苗免疫水平,本研究以本实验室前期制备的口蹄疫病毒(FMDV)的单克隆抗体(MAb)3D9为捕获抗体,以HRP标记的MAb 9A9作为检测抗体,建立了基于MAb的检测A型FMDV抗体的固相竞争ELISA(SPCE)方法,并对其条件进行优化。结果显示,MAb 3D9的包被浓度为1.16μg/mL,A型FMDV抗原的最佳稀释度为1:5,HRP标记的MAb 9A9的最佳稀释度为1:5 000,当血清132稀释时,检测的临界值确定为35%。利用该方法分别检测A型、O型口蹄疫抗体阳性标准血清以及牛冠状病毒、牛轮状病毒以及猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒的标准阳性血清。结果显示,除A型口蹄疫阳性标准血清为阳性结果外其余均为阴性结果,未出现交叉反应,表明本研究建立的方法特异性强。该方法对经病毒中和试验(VNT)检测为阳性的3份血清进行敏感性试验,敏感性分别为1:1 024、1:256、1:128,均高于VNT,表明其敏感性较高;重复性试验结果显示,该方法批内和批间重复试验的变异系数均小于10%,表明其重复性较好。利用该方法与液相阻断ELISA方法(LPBE)和VNT对112份血清样品同时检测,分析三者相关性。结果显示,本实验建立的SPCE方法与二者的相关系数分别为0.901和0.916,表明该方法可靠性较好且与VNT的相关性更高。进一步利用本研究建立的SPCE方法和韩国Jeno A型FMDV ELISA抗体检测试剂盒同时检测470份临床血清样品(90份羊血清、170份牛血清和210份猪血清),结果显示该方法检测羊血清、牛血清和猪血清与Jeno试剂盒总体符合率分别为90.0%、91.8%和89.0%。表明该方法的检测结果较为准确。本研究为建立A型口蹄疫检测方法奠定了基础。  相似文献