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食源性沙门氏菌快速检测技术的应用研究 总被引：4，自引：0，他引：4
通过样品试验,得到优化的沙门氏菌检验方法,了解上海地区沙门氏菌 污染情况.在免疫胶体金技术、单抗直接ELISA、PCR法检测沙门氏菌的基础上,将 PCR法和单抗直接ELISA三种快速检测方法进行比较研究.用免疫胶体金技术、直接E LISA、PCR法对鸡蛋、水样、牛奶、猪肉、牛肉、虾仁等样品401份进行沙门氏菌检测,并与 常规国标方法对比,直接ELISA法的敏感性和特异性达100%和97.3%,免疫胶体金技术敏感 性和特异性达100%和95.3%,PCR法的敏感性和特异性均为100%.通过对样品的检测, 最终确定较优化的沙门氏菌检测程序.PCR法的特异性优于免疫胶体金技术和直接ELISA法.对大量样品检测,可采用免疫胶体金技术或直接ELISA法筛检,除去大量阴性样品,阳性样品用PCR法作进一步鉴定;需要确定血清型时则用国标法. 相似文献
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沙门氏菌通用PCR快速检测试剂盒的研制与应用 总被引：2，自引：0，他引：2
根据沙门氏菌fimY基因建立了用于检测沙门氏菌的通用PCR方法。对收集的A-F群标准菌株和临床分离的60株沙门氏菌分离株和11种非沙门氏菌进行PCR检测,采用2.0%琼脂糖电泳进行检测,结果所有沙门氏菌均扩增出526bp的特异性条带,而非沙门氏菌均未扩增出任何条带。通过电泳判定结果,该法可检出扩增体系中93cfu的沙门氏菌,还可检出含3cfu的样品用BP预增菌或MM增菌后的菌液。说明该方法敏感性高、特异性强。采用直接菌体加入法、热裂解、反复冻融、CTAB碱裂解法和柱式试剂盒提取法分别提取核酸模板,结果CTAB法效果最好,但操作烦琐,而直接菌体加入法和热裂解法可以达到和柱式试剂盒同样的效果,且操作简便快速、经济、效果好,值得推广应用。 相似文献
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沙门氏菌可广泛引起动物疾病 ,病畜和带菌饲料都是该病的主要传染源。随着动物性饲料———肉骨粉、鱼粉在配合饲料中的广泛应用 ,引起人们对沙门氏菌传播的关注。为此我们对肉骨粉、鱼粉中沙门氏菌的检测进行了研究。1 材料和方法1 1 采样 用无菌方法分别采取国产肉骨粉、进口肉骨粉、国产鱼粉检样各 4份 ,每份约 1 0 0ｇ。1 2 检测方法1 2 1 前增菌 无菌称取检样 2 5ｇ ,置于 2 2 5ｍＬ缓冲蛋白胨水 (ＢＰ)中 ,摇匀 ,36± 1℃ ,4ｈ进行前增菌。1 2 2 增菌 吸取 1 0 0ｍＬ前增菌液 ,分别转接种于 1 0 0ｍＬ氯化镁孔雀绿增菌… 相似文献
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《动物医学进展》2021,42(2)
为了解肠出血性大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌和空肠弯曲菌等3种食源性致病菌在生猪屠宰场的污染情况。采集广东惠州和清远两地共10家生猪屠宰场498头猪肉样品,分别经改良EC新生霉素增菌肉汤、SC(亚硒酸盐胱氨酸增菌液)和Bolton肉汤增菌,用大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌和空肠弯曲菌的特异性引物进行PCR扩增及测序检测,阳性菌液再分别涂抹于山梨醇麦康凯平板、DHL(胆硫乳琼脂)和Skirrow血琼脂,挑取疑似菌落再次PCR验证,计算检出率。结果显示,检出大肠埃希氏菌O157:H7阳性样本2份,检出率0.4%,检出沙门氏菌阳性样本70份,检出率14.06%,空肠弯曲菌未检出。结果表明,惠州和清远两地屠宰场均存在食源性致病菌污染情况,其中沙门氏菌污染较为严重,惠州地区检出率高于清远地区。提示屠宰场应加强屠宰过程中环境和加工用具的消毒,以保证屠宰环节的食品安全。 相似文献
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一沙门氏菌的检测
1常规细菌学分离方法（GB/T13091-2002）
第一步,前增菌,使样品在含有营养的非选择性培养基中增菌,使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。第二步,选择性增菌,在含选择性抑制剂的促生长培养基中间,样品进一步增菌。 相似文献
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为建立一种简单、快速、灵敏、准确的沙门菌检测方法，根据沙门菌fimY保守基因序列设计合成了1对引物，建立了快速检测沙门菌的PCR方法，并对反应条件进行优化，组装成快速检测试剂盒。结果显示，所有沙门菌均扩增出526bp的特异性条带，而非沙门菌均未扩增出任何条带。检测灵敏度达93CFU，还可检出含3CFU的样品用BP预增菌的菌液或用MM增菌后的菌液，而且稳定性良好，冷冻至少能保存12个月。采用直接菌体加入法、热裂解法、反复冻融法、CTAB碱裂解法和柱式试剂盒提取法分别提取核酸模板，结果CTAB法效果最好，但操作烦琐，而直接菌体加入法和热裂解法可以达到和柱式试剂盒提取法相同的效果，且操作简便、快速、经济、效果好。通过对临床样品的检测，证实该试剂盒具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性高等优点，值得推广应用。 相似文献
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本研究针对沙门氏菌invA基因的保守序列,设计特异的LUX^TM荧光标记引物,通过优化反应奈件和参数,建立可快速检测沙门氏菌的LUX^TM荧光PCR检测方法。结果显示,该方法高度敏感,其对纯菌的检测低限达到10^2cfu／mL,经6h增菌培养后检测,对样品液的检测低限达到1cfu／mL;特异性强,测试的全部13株沙门氏菌标准和参考菌株均呈阳性反应,测试的全部27株非目标菌均呈阴性反应;重复性好,定量检测批内和批间的变异系数均小于2％。应用本方法检测食品样品240份,结果检出阳性4份,与TaqMan荧光PCR和SN标准检测结果完全一致。本方法可在8h内完成对样品中沙门氏菌的检测,其检测的快速性、敏感性和特异性与TaqMan荧光PCR技术相当,且检测成本较低。 相似文献
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猪霍乱沙门氏菌的快速分离鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
猪霍乱沙门氏菌是引起仔猪副伤寒的主要病原菌,给养猪业造成重大危害。本文旨在建立一套细菌快速分离鉴定方法,为该病流行病学调查提供有效手段。从临床初诊为仔猪副伤寒的病猪采集粪便,接种亚硒酸盐亮绿增菌液增菌后,划线于SS琼脂培养基,挑无色透明菌落纯化。纯化菌落用美国B IOLOG自动细菌鉴定仪GN2肠杆菌鉴定板鉴定,同时用常规生化鉴定管鉴定,结果符合猪霍乱沙门氏菌的生化特征。PCR扩增invA基因,测序鉴定PCR产物,结果与猪霍乱沙门氏菌参考序列同源性达99%以上。分离菌株接种小白鼠,证明其对小白鼠有致病性。用沙门氏菌属标准血清检测证实其抗原式为6,7∶c∶1,5,符合猪霍乱沙门氏菌的抗原特征。应用以上方法从全国各地病料中分离鉴定了40多株猪霍乱沙门氏菌,为猪霍乱沙门氏菌病的流行病学调查提供了依据,同时证明该方法切实可行。 相似文献
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吖啶橙免疫荧光菌团培养法对沙门氏菌的快速检测 总被引：6，自引：0，他引：6
本实验通过用吖啶橙免疫荧光菌团培养法对快速检测沙门氏菌的特异性和敏感性进行了研究,对肉品模拟标本,通过先增菌再用菌团培养法进行检测,证明该检测方法对于34个菌/ml的沙门氏菌均可检出;与枯草杆菌、大肠埃希氏杆菌等八种杂菌均不形成菌团交叉。与杂菌的浓度比在1∶640之内均不受干扰。对125份样品进行检测,并与常规方法进行比较,相差不显著。运用本检测方法,30小时即可获得结果(而常规方法则一般需要4～6天),大大缩短了检测时间。所以吖啶橙免疫荧光菌团培养法对沙门氏菌的快速检测是一种敏感性高、特异性强、简便快速、所需仪器简单的检测方法。 相似文献