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鸡柔嫩艾美尔球虫ZJ株3-1E基因的原核表达及鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
本实验对E.tenellaZJ株的3-1E基因进行了克隆和表达。根据已报道的柔嫩艾美尔球虫3-1E基因序列设计引物,以孢子化卵囊总RNA为模板,用RT—PCR方法扩增得到一条特异片段,将扩增产物克隆至pUCM—T,转化感受态菌DH5仅,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99.5%。然后将重组质粒和表达载体pET-30a分别以EcoRⅠ、SalⅠ酶切后构建重组表达载体pET-30a-3—1E,并将其转化入大肠杆菌BL21中,提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后,用IPTG诱导表达。表达产物经SDS—PAGE和Westernblot检测显示,3-1E基因在大肠杆菌中成功表达;融合蛋白的分子量约为27ku,诱导6h的蛋白表达量可达到47、024%。  相似文献   

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根据克隆的毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因(EnMIC-2(Gd))的cDNA序列设计特异性引物,用PCR方法扩增其阅读框架(ORF)后,克隆至质粒表达载体pET-32a( ),成功构建了重组表达质粒pET-32a( )-EnMIC-2。用CaCl2法将其转化至宿主细菌E.cliBL21(DE3),并用IPTG成功诱导了EnMIC-2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的10.8%,其相对分子质量约为55000。重组蛋白经SDS-AGE分析后,用E.necatrix(广东株)感染鸡的高免血清进行Western Blotting分析,结果为阳性。  相似文献   

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鸡大肠杆菌病是埃希氏大肠杆菌的某些血清型(常见的楚O2、O78、O1、O35和O36)引起的全身性疾病的总称。各个日龄、各个品种的鸡均易感。呈现急性、致死性败血症和亚急性,临床上表现为败血症、心包炎、气囊炎、肝周炎和腹膜炎。常继发于禽流感、新城疫、支原体等感染性疾病,加剧鸡群发病率和死亡率。鸡肠道中的大肠杆菌约有10%~15%的血清型有一定的致病力,且各地流行菌株不同,往往给本病的免疫预防带来许多困难。此外。由于盲目用药,造成耐药菌株不断产生,致使该病治疗效果下降,给养鸡业造成了严重的经济损失。针对上述情况,我们对山东北部地区(包括德州、潍坊、青岛、烟台等)肉鸡养殖集团自养鸡场进行了流行病学调查、临床症状和病理变化观察以及细菌学诊断。结果表明:本次地方流行病的发病率达29%以上,病死率达93%:从病死鸡中分离出的细菌,通过菌体形态、染色特性、生化试验等系统鉴定,致病菌为大肠杆菌;药敏试验表明,该地区流行的大肠杆菌均呈现多重耐药性。选用高敏的硫酸丁胺卡钠霉素或氟苯尼考治疗并采取综合性措施,迅速控制了疫情。  相似文献   

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大肠杆菌(E.coff)是一种革兰氏阴性菌,能导致家禽爆发多种不同症状的疾病。由这种大肠扦菌细菌引发的疾病统称为大肠杆菌病,并且可感染所有种类和所有年龄段的家禽。大肠杆细菌到处存在,无论在什么情况下均能从动物的龚便中分离出来。与大肠杆菌有关的疾病继续处于或靠近于肉鸡、火鸡和蛋鸡重要疾病名录的前列。本文将对各种疾病的并发症状及其控制措施进行介绍。  相似文献   

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本研究对普通枇杷(Eriobotrya japonica Linl.)、大渡河枇杷(Eriobotrya prinoides Rehd.& Wils. var. dadunensis H. Z. Zhang)和栎叶枇杷(Eriobotrya prinoides Rehd.& Wils.)的叶、果等性状进行了调查考证,结果表明,大渡河枇杷的各种性状都处于二者之间;不同大渡河枇杷单株的许多性状也有不同程度的分离,有些偏向于栎叶枇杷,有些偏向于普通枇杷,支持大渡河枇杷为栎叶枇杷和普通枇杷种间杂种的结论。  相似文献   

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Eimeria parasites were isolated from Nanhai Guangdong province (southern China) and studied in chickens in wire cages to evaluate their drug resistance against commonly used ionophores: monensin (100 mg/kg of feed), lasolacid (90 mg/kg), salinomycin (60 mg/kg), maduramicin (5 mg/kg) and semduramicin (25 mg/kg). Chinese Yellow Broiler Chickens were infected with 40,000 crude sporulated Eimeria oocysts at 15 days of age and prophylactic medication commenced a day prior to infection. Drug resistance was assessed for each ionophore drug by calculating the anticoccidial index (ACI) and percentage optimum anticoccidial activity (POAA) based on relative weight gain, rate of oocyst production and lesion values. Results revealed that Nanhai Eimeria oocysts comprising of E. tenella, E. maxima and E. acervulina, were resistant to monensin, sensitive to both salinomycin and lasolacid and partially sensitive to maduramicin and semduramicin. By selection for early development of oocysts during passage through chickens, the prepatent time of E. tenella, E. maxima and E. acervulina were reduced by 49, 36 and 22 h, respectively. The precocious lines are less pathogenic than the parent strains from which they were selected and conferred a satisfactory protection for chickens against coccidiosis. These ionophore-tolerant precocious lines could have wider applications in the development of anticoccidial vaccines for sustainable control of coccidiosis.  相似文献   

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