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1.
根据已克隆的堆型艾美球虫(Eimeria acervulina)广东株子孢子表面抗原基因cSZ1的cDNA序列设计了特异性引物,用PCR方法扩增cSZ1的开放阅读框架(ORF)后克隆至表达载体pET-32a( ),构建了重组表达质粒pET-32a( )-cSZ1,并将其转化至大肠埃希氏菌BL21(DE3)。经IPTG诱导,获得了cSZ1重组抗原在大肠埃希氏菌中的高效表达,表达产物量可达菌体总蛋白的9.3%,融合蛋白的分子质量约为40ku。重组菌诱导表达的产物经SDS—PAGE后,用堆形艾美球虫感染鸡的超免疫血清进行免疫印迹分析,结果为阴性,提示cSZ1所编码的抗原可能主要是T细胞抗原表位。 相似文献
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猪附红细胞体16S rRNA基因的序列测定和系统进化分析 总被引:11,自引:3,他引:11
从确诊为猪附红细胞体感染的猪场,无菌采集血样,抽提猪附红细胞体基因组DNA,采用真细菌的通用引物进行16S rRNA基因扩增,对扩增产物进行克隆和测序。从3个地理位置不同的猪场均成功地扩增出长度为1469bp的核苷酸序列。系统进化分析表明,3个猪场样品所测序列一致性达99.52%以上,具有相同的基因型,但与国外报道的猪附红细胞体Illinois株同源性为95%,属于同一基因群,但基因型不同;所有种类的附红细胞体和血巴尔通氏体组成同一进化分支,这类血营养菌与支原体科,支原体属的病原最靠近(75%),而与立克次氏体目的病原较远(70%)。上述研究证实,广东所流行的猪附红细胞体是一种新基因型的猪附红细胞体,建议命名为猪附红细胞体广东株型;为反映进化关系,猪附红细胞体和其它血营养菌应划归于支原体科的支原体属。 相似文献
3.
根据克隆的毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因(EnMIC-2(Gd))的cDNA序列设计特异性引物,用PCR方法扩增其阅读框架(ORF)后,克隆至质粒表达载体pET-32a( ),成功构建了重组表达质粒pET-32a( )-EnMIC-2。用CaCl2法将其转化至宿主细菌E.cliBL21(DE3),并用IPTG成功诱导了EnMIC-2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的10.8%,其相对分子质量约为55000。重组蛋白经SDS-AGE分析后,用E.necatrix(广东株)感染鸡的高免血清进行Western Blotting分析,结果为阳性。 相似文献
4.
为研究谷氨酸铜制剂对罗非鱼、草鱼的生长性能、血清生化指标和鱼体组成的影响,选用180尾罗非鱼、135尾草鱼,分别随机分为3个处理组,每组3个重复,每个重复20或15尾。在基础饲料中添加五水硫酸铜作为对照组(10 mg/kg),试验组添加谷氨酸铜(高、低剂量组分别为10、5 mg/kg,按铜离子计),饲养8周。结果表明:与对照组相比,谷氨酸铜高、低剂量组罗非鱼的增重率分别提高3.9%和5.8%,草鱼的增重率分别提高4.0%和5.9%;罗非鱼特定生长率分别提高1.9%和3.3%,草鱼分别提高2.5%和3.5%;罗非鱼和草鱼的平均饵料系数分别降低7.6%和3.7%。两种鱼的血清生化指标及体组成各试验组间均无显著差别(P>0.05)。由此可见,日粮中添加适量谷氨酸铜可提高鱼体的生长性能,且效果优于五水硫酸铜。 相似文献
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柔嫩艾美耳球虫表面抗原SAG2基因的克隆与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
根据生物信息学预测的基因序列设计引物,应用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA扩增获得了鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原2(surface antigen 2,SAG2)基因序列,将其与pGEM-T easy载体连接后转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆,以带有限制酶切位点的特异性引物用PCR方法扩增不含SAG2 N端信号肽序列的ORF序列后克隆至表达载体pET-32 a(+),构建了重组表达质粒pET-32 a(+)-SAG2,并将其转化至E.coliBL21(DE3)。经IPTG诱导,获得了SAG2重组抗原在大肠杆菌的高效表达,重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白的分子量约为47 ku。菌体经超声处理后进行SDS-PAGE分析表明,表达蛋白以包涵体的形式存在。 相似文献
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猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以猪附红细胞体和多种血营养菌16S rRNA基因的保守区设计合成引物HM-f/HM-r,在反向引物的5′端用生物素标记,以猪附红细胞体广东株16S rRNA基因的可变区序列设计种特异性寡核苷酸探针,探针的5′端用地高辛标记,成功地建立了猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法。通过测定不同浓度PCR产物对应的微孔板杂交-酶反应显色OD值,用SPSS统计软件进行回归分析,得到回归方程为y=2.1012-0.4492×logx,其相关系数R为0.977,显示对未知样品可进行定量检测。该方法与猪的多种细菌性病原、猫血巴尔通氏体CA株和E.wenyonii无交叉反应,其敏感性比常规PCR琼脂糖电泳检测提高了近100倍。用建立的方法对38份临床样品进行检测,结果有12份检测结果为阳性。 相似文献
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给11日龄雏鸡分别口服接种鸡传染性腔上囊炎(IBD)弱毒疫苗(法贝灵,IBD-Blen)1和3头份后,于不同时间采集脾和腔上囊组织,分离纯化淋巴细胞,常规方法抽提总RNA,以鸡伊actin基因为内参,采用半定量RT—PCR法检测两种组织中鸡Toll样受体7(ChTLR7)基因的表达动态。结果显示,接种IBD弱毒疫苗前,试验鸡脾和腔上囊组织中均有ChTLR7的微量表达,疫苗接种后第7h,脾中ChTLR7 mRNA的表达开始显著上调,至接种后第12h达峰值,此后迅速下降,至第130h时降至疫苗接种前的水平;而腔上囊组织中ChTLR7 mRNA的表达自接种后第12h开始增加,第24h时达峰值,随后迅速下降,约72h后恢复至疫苗接种前水平。表明ChTLR7可能参与了IBDV感染早期的天然免疫反应过程。 相似文献
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荒川库蠓人工繁殖的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
实验室人工模拟条件下成功地进行荒川库蠓的饲养和繁殖。荒川库蠓吸鸡血的饱血时间为10min,饱血率为88.46%,饱血库蠓饲养3d后产卵,产卵率为69.56%。产卵后第2天开始孵化,一般在24h内孵化结束,孵化率为76.75%。幼虫先后蜕皮3次,共分4龄幼虫,1-4龄幼虫的体长分别为:0.3-1.12mm,1.12-3.02mm,3.02-4.55mm和4.55-5.90mm,其幼虫期分别为7、4、4和5d。4龄幼虫化蛹2-3d后即羽化为成蠓,羽化为81.82%,不同温度条件对卵到成蠓的发育影响较大,26℃是荒川库蠓发育相对适宜的温度条件。 相似文献
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堆型艾美耳球虫子孢子表面抗原基因cSZ1的克隆及序列分析 总被引:1,自引:1,他引:0
根据已报道的堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)子孢子表面抗原基因cSZ1的cDNA序列设计特异性引物,以孢子化12h的E.acervulina广东株卵囊的总RNA为模板,用RT-PCR方法成功克隆了其子孢子表面抗原基因cSZ1(cSZ1(Gd))的cDNA。所克隆cSZ1(Gd)的cDNA全长940bp,其中第3~512位是其阅读框架,共编码170个氨基酸,两端为非编码区。与已报道的cSZ1基因的cDNA序列相比,cSZ1(Gd)有4个位置的核苷酸发生了变异,即原序列中第294、443、569、586位的G、G、G、A在cSZ1(Gd)分别为A、A、A、G,二者核苷酸序列的同源性为99.57%(936/940),其中阅读框架的核苷酸同源性为99.61%(508/510)。比较根据核苷酸序列推导的氨基酸序列,第294位的变异导致了所编码氨基酸由缬氨酸(V)变为异亮氨酸(Ⅰ),而第443位的变异则为无义突变,氨基酸序列的同源性为99.41%(169/170)。 相似文献