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1.
以低致病性禽流感病毒（AIV）H9N2亚型株的鸡胚适应毒经尿囊腔接种10日龄鸡胚，从24h后死亡胚及96h后4℃致冷死亡胚收集尿囊液，尿囊液的血凝价约7log2，每毫长约含10^8.6个ELD50的病毒。将尿囊液经0.1%福马林灭活后，用超滤器将尿囊液浓缩5倍后分别制成双联灭活疫苗。对4周龄SPF鸡肌肉注射0.5ml或0.3ml单联H9亚型AIV灭活苗，在接种后2、3、4、5周后，血清中对H9亚型AIV的血凝抑制（HI）抗体效价分别是5.1、7.2、8.3、10log2或3.8、6.5、6.3、8.31log2。注射0.5ml的H9亚型AIV和NDV二联油乳苗的鸡，在接种后2、3、4、5周对H9亚型AIV及Lasota株NDV的HI滴度分别是4.6、5.6、6.7、8log2及7、7.6、6.7、7log2。显然，二联苗对H9亚型AIV及NDV均产生了理想的免疫效果。 相似文献
2.
用60Coγ射线对不同状态不同体积的鸡新城疫病毒(NDV)、H9N2亚型禽流感(H9N2 AIV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进行辐照,研究60Coγ射线对灭活疫苗中病毒的灭活效果。结果表明,6.0 kGy 60Coγ射线辐照对冷冻和液态下5000和10000 mL的NDV、H9N2亚型AIV和PRRSV均不能灭活,辐照后NDV和H9N2亚型AIV冷冻尿囊液的HA效价降低而液态尿囊液的HA效价升高;液态下,60Coγ射线能够灭活250 mL细胞培养液中的PRRSV,不能灭活250、5000和10000 mL尿囊液中的NDV和H9N2 AIV,250 mL与5000、10000 mL的NDV HA效价间差异显著(P＜0.05)。60Coγ射线辐照对液态的PRRSV细胞培养液灭活效果良好,有望用于灭活苗的病毒灭活。 相似文献
3.
四种不同灭活剂对新城疫病毒的灭活效果研究 总被引：2，自引：0，他引：2
为探索甲醛、β-丙内酯(BPL)、二乙烯亚胺(BEI)和盐酸聚六亚甲基胍(PHMG)对新城疫病毒(NDV)的最佳灭活条件,试验采用不同浓度梯度的甲醛、BPL、BEI和PHMG对NDV进行不同时间的灭活处理,通过血凝(HA)试验、无菌检验和灭活检验确定灭活效果。结果显示,37℃下,NDV的最佳灭活条件为0.1%～0.2%的甲醛灭活22～24h、0.02%～0.025%的BPL灭活9～10h、2%～3%的PHMG灭活16～20h,该研究为筛选规模化生产ND疫苗所需的理想灭活剂提供了依据。 相似文献
4.
提高鸡传染性支气管炎病毒血凝抗原滴度途径及抗原灭活 总被引：4，自引：0，他引：4
将７株传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准株（Ｍ４１、Ｈ１２０、Ｈｏｌｔｅ、Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｉｏｗａ６０９和Ｔ株）和６株分离株（ＮＩＢＶ、ＧＩＢＶ、Ｍ、ＳＨ、Ｊ和Ｈ株）分别接种于鸡胚，收获尿囊液，经浓缩后，用魏氏梭菌培养液处理，制备血凝抗原。其中，Ｈ１２０株血凝滴度最高，Ｔ、Ｍ、Ｊ和Ｈ株无血凝性。应用含有不同滴度ＩＢＶ母源抗体的鸡胚增殖病毒制备抗原，效价与用ＳＰＦ鸡胚增殖病毒制备的抗原效价一致。尿囊液经反复冻融后再制备抗原会使血凝价降低。抗原分别用甲醛、高碘酸钠、硼氢化钾和ＳＤＳ灭活，其中甲醛灭活效果最理想。抗原对氯仿敏感，对乙醚稳定。适宜浓度的Ｎａ＋、Ｍｇ２＋可显著提高抗原的血凝性 相似文献
5.
为研究热灭活、甲醛、β-丙内酯(BPL)三种不同灭活方法对新城疫病毒(NDV)血凝和RT-PCR试验结果的影响,将收获的NDV鸡胚尿囊液分别用浓度为0.1%~0.5%的甲醛37℃灭活24 h或4℃灭活48 h、浓度为0.02%~0.2%的BPL 37℃灭活9 h、60℃热灭活30~90 min,并于灭活前后进行血凝试验和RT-PCR检测。结果表明,用0.02%的BPL 37℃灭活9 h或0.1%的甲醛4℃灭活48 h,不影响NDV的血凝价;采用热灭活30 min或0.02%的BPL 37℃灭活9 h,不影响NDV核酸检测。本研究可为相关病原检测以及诊断制品制备过程中灭活方法的选择提供参考。 相似文献
6.
为了研究鸡新城疫-禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(La Sota株+HP株)中两种病毒的最佳甲醛灭活浓度和灭活时间,试验选取四种甲醛最终浓度0.1%、0.2%、0.4%、0.8%,分别对两种抗原进行灭活,在灭活10 h、12 h、14 h、16 h、18 h、24 h、30 h、36h、42 h分别取样,对每个样品进行灭活检验和血凝价测定。从试验结果得出,新城疫病毒(La Sota株)最适合的甲醛浓度为0.1%,灭活时间为16 h;禽流感病毒(H9亚型HP株)最适合甲醛浓度为0.1%,灭活时间为18 h。 相似文献
7.
以H3亚型禽流感病毒(AIV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)筛选阳性杂交瘤细胞并克隆化。结果获得了4株针对H3亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体,分别命名为1D7、1F9、5A4、5F5。这些单克隆抗体小鼠腹水HI效价为212～214。用H1、H6、H10亚型禽流感病毒各2株,H4、H5、H9和新城疫病毒(NDV)各1株进行特异性试验。结果表明:所有这些单抗仅与H3亚型AIV发生特异性HI反应,而不与其他亚型AIV及NDV反应。用28株H3亚型禽流感病毒进行排谱试验,结果证明:4株单抗均具有广谱性,其中1F9、5A4、5F5与受试的28株H3亚型AIV均反应,而1D7只与其中的26株反应。以上单抗将为控制畜禽及人类的流感提供必需的诊断试剂。 相似文献
8.
《四川畜牧兽医》2021,(4)
为探究甲醛对猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液最佳的灭活条件,本试验采用10%的甲醛溶液与猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液混匀,使甲醛终浓度分别达到0.05%、0.07%、0.10%、0.15%、0.20%,在4～8℃下经过不同时间的灭活,通过对灭活液不同时间点的无菌检验及灭活检验,综合判定灭活效果。结果显示:猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液在甲醛终浓度为0.07%时灭活72 h,或甲醛终浓度为0.10%和0.15%时灭活60 h,或甲醛终浓度为0.20%时灭活48 h,均取得可靠的灭活效果。考虑到甲醛的毒副作用,笔者认为4～8℃下用0.07%甲醛终浓度灭活72 h是比较理想的灭活条件。 相似文献
9.
用不同毒株鸡传染性支气管炎病毒(F3株、肾型J株、H120-28/86株、H52、H120株)分别按不同浓度(100倍、400倍、700倍和1000倍)与100倍稀释的Lasota鸡新城疫病毒联合接种到10日龄鸡胚尿囊腔，同时设单独培养作对照，96h后收取尿囊液，用对流免疫电泳法检测鸡传染性支气管炎病毒效价，用血球凝集试验检测尿囊液鸡新城疫病毒效价。结果表明.以NDV100倍和IBV1000倍稀释混合作用后联合培养对二者病毒效价均无明显影响，NDV血凝效价可达1b11，IBV对流免疫电泳沉淀效价可达1b11，效果最佳。然后将上述培养液，用福尔马林溶液对其进行灭活，通过常规途径制备鸡新支二联油乳刑灭活苗。将此苗接种于21日龄雏鸡，接种后0，7，14，21，28，35，42，49d分别检测雏鸡NDV抗体和IBV抗体，检出的抗体平均值分别为2，3.6，4.8，5.8，6.2，6.5，6.8，6.5和2，3.3，4.6，5.9，6、2，6.4，6.6，6.4；攻毒保护率为100％。实验证明。以NDV100倍与IBV1000倍稀释混合作用后联合培养的尿囊液制得的鸡新支二联油乳荆灭活苗可以预防鸡新城疫和鸡传染性支气管炎。 相似文献
10.
为确保提取卵黄抗体的安全性,防止其中混入外源病毒,为此使用了化学药品灭活的方法。试验对不同终浓度的甲醛和二乙烯亚胺(BEI)对卵黄抗体灭活效果进行了比对。将鸡新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV H9型)、禽传染性囊病病毒(IBDV)、减蛋综合征病毒(EDS-76)和禽脑脊髓炎病毒(AEV)分别混入到卵黄抗体中,混合后加入终浓度为0.03%、0.05%、0.1%甲醛和0.02%BEI于室温条件下,灭活24h,从试验结果我们可以看出0.02%BEI和0.03%甲醛只能灭活部分病毒,而0.05%和0.1%甲醛能灭活全部病毒,并且对抗体活性无任何影响。因此,综合以上结果选用0.05%的甲醛进行灭活,保证疫苗的安全性。 相似文献
11.
为比较二乙烯亚胺(BEI)和甲醛对猫杯状病毒(FCV)的灭活条件,采用终浓度分别为0.05%、0.1%、0.2%和0.3%的甲醛和终浓度分别为0.5%、1%、2%和3%的BEI在37℃对FCV灭活6、12、24、36、48 h,通过微量滴定法检测灭活病毒滴度变化,于F81细胞盲传3代验证病毒灭活效果,采用巢式PCR和ELISA法检测病毒抗原完整性。结果显示:37℃下作用48 h,1%、2%、3%的BEI和0.05%、0.1%、0.2%、0.3%甲醛均可灭活FCV。本研究结果可为FCV灭活疫苗的灭活工艺研究提供参考。 相似文献
12.
新城疫与禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活苗免疫效力试验 总被引：1，自引：1，他引：0
用新城疫病毒（NDV）LaSota株与禽流感病毒（AIV）F株尿囊腔接种非免疫难胚，取72－120小时死亡鸡胚液。灭活后分别制成新城疫油乳剂灭活苗、禽流感（H9亚型）油乳剂灭活苗、新城疫与禽流感（H9亚型）二联油乳剂灭活苗，免疫7日龄非免疫雏鸡，一周后开始检测ND、AI血凝抑制（HI）抗体体，两周时各免疫组鸡的抗体效价都达到6log2以上，3周达到高峰，后维持在较高水平达45天以上，在65日龄进行攻毒，结果单苗和二联苗免疫鸡全部得到保护。 相似文献
13.
采用不同温度、浓度的甲醛处理病毒，在一定的条件下完全能够使病毒灭活而保持其红细胞凝集活性的特性。人而简易的灭活方法是加热至６５或７０℃，但是红细胞凝集活怀水平下降９７％，抗原材料损耗太多。较为理想的灭活方法是２０℃条件下，终浓度是０．１％的甲醛处理４８小时，不仅能使病毒完全灭活，而且病毒的红细胞凝集活性下降不超过５％。 相似文献
14.
《中国家禽》2019,(7)
为研制鸡新城疫(ND)-传染性支气管炎(IB)-禽流感(AI,H9亚型)-传染性法氏囊病(IBD)四联灭活疫苗,用易感鸡胚增殖NDV La Sota株、IBV M41株及AIV H9亚型WD株,用DF-1细胞增殖IBDV BJQ902株,收获病毒液,经浓缩、灭活后,制成3批油乳剂灭活疫苗。按照《中国兽药典》对疫苗进行检验。结果显示:3批疫苗的性状检验、装量检验、无菌检验、甲醛、汞类防腐剂残留量测定和安全性检验均合格。效力检验显示:NDV血凝抑制(HI)效价为6.0～6.2 log2;IBV HI效价二免是首免的8.00～13.92倍;AIV(H9)HI效价8.8～9.1 log2;IBDV中和抗体效价15.7～16.1 log2。攻毒后免疫鸡均100%保护(10/10),对照鸡全部发病(5/5)。研究结果表明制备的四联苗安全有效、免疫效力高,为该疫苗的产业化开发提供了依据。 相似文献
15.
将分离于河南省的YX08、YX12和YB02野毒株的第10代鸡胚传代毒作为种毒接种鸡胚,用收获的鸡胚绒毛膜尿囊液试制出三价油乳灭活苗,并对其进行检测和免疫效果比较。结果表明：三价油乳灭活苗和三价油乳灭活苗与活疫苗联合免疫效果均明显优于活疫苗免疫组,平均AGP效价分别达到2^2.8和2^3.0;当活疫苗免疫组鸡血清中已无可测性抗体时,三价油乳灭活苗免疫组和联合免疫组仍具有2^1．8和2^1.2的AGP效价。在接种后第30,60天,分别用传染性法氏囊病病毒标准强毒株BC6／85、地方野毒株YX08、YX12和YB02进行攻毒试验。在接种后第30天,三价油乳灭活苗和联合免疫疫苗对这4个毒株的攻击可提供93．3％～100％的保护;单独的活疫苗可提供60．0％～80．0％的保护;在接种后第60天,三价油乳灭活苗、联合免疫疫苗和活疫苗分别能提供80．0％～93．3％、80．0％～93．3％和40．0％-53．3％的保护。 相似文献
16.
由于经济和技术因素的制约,尚未有成功的禽流感细胞疫苗产品上市.为此,本研究在细胞扩增而来的含有H9亚型禽流感病毒(AIV)HA和NA基因的SH441HANAPR8(NS mutant)重组病毒里加入终浓度为0.1％的甲醛进行灭活.结果显示,37℃条件下灭活24 h的效果最佳.灭活好的H9 AIV SH441HANAPR8(NS mutant)与佐剂Montanide ISA 70VG乳化制备成灭活苗,以0.05、0.1、0.2、0.3 mL/只的剂量,分别胸部肌肉注射免疫3周龄的SPF鸡,并于免疫后21d静脉感染A/Chicken/Shanghai/441/2009 (H9N2) AIV.结果显示,该疫苗的最小免疫剂量为0.2 mL.此外,研究还发现,当HI抗体效价≥25时,疫苗对鸡只的攻毒保护率达到100％. 相似文献
17.
为了优化疫苗制造过程中的灭活工艺，本课题组针对甲醛的使用浓度以及灭活时间进行了试验。试验结果表明，兔多杀性巴氏杆菌JN株菌液按0．2％的比例（v／v）加入甲醛溶液，37℃条件下灭活48h，灭活彻底，以该灭活工艺制备的免多杀性巴氏杆菌灭活菌液注射试验兔，试验兔10／10健活，注射部位无炎性反应，试验兔采食量、饮水量无明显异常变化，精神状态良好，表明该灭活工艺灭活的菌液安全性良好，该灭活工艺切实可行。 相似文献
18.
β-丙内酯对脑心肌炎病毒灭活效果的试验 总被引：1，自引：0，他引：1
通过研究β-丙内酯(BPL)对脑心肌炎病毒(EMCV)灭活效果以及优化灭活条件,为制备脑心肌炎诊断试剂和疫苗提供参考依据.用终浓度分别为1∶1 000、1∶2 000、1∶4 000等的β-丙内酯灭活103 TCID50滴度猪脑心肌炎病毒,采用4℃灭活4 h、8h、12h后37℃C 2h,并将灭活后的病毒接种敏感细胞VREO上观察细胞病变(CPE)情况,选择未出现CPE的细胞孔盲传3代后,采用ELISA和PCR的方法观察灭活效果.结果显示:BPL浓度和反应时间与灭活效果存在明显的线性关系,但BPL浓度越高抗原性下降幅度越大,RT-PCR未有扩增,说明BPL可以用于EMCV的灭活,且根据试验结果优选灭活条件为BPL浓度为1∶2 000,4℃灭活8h为最佳.结论表明:BPL完全可以用来灭活EMCV,为今后开发灭活疫苗或诊断试剂的生物安全性提供了保证. 相似文献
19.
从山东省莱芜、泰安、潍坊等3个养兔场发生疑似梭菌性下痢的病兔体内分离到3株魏氏梭菌，鉴定为A型。利用该分离菌株和A型魏氏梭菌标准株(CVCC37)所产外毒素经甲醛灭活并加入氢氧化铝胶佐荆吸附浓缩后制备了A型魏氏梭菌类毒素疫苗。对该疫苗分别进行了安全性检验、有效免疫剂量试验和接种家兔1～23周血清中抗毒素(Ab)消长规律研究。结果表明，魏氏梭菌外毒素用0．3％甲醛32h能够彻底灭活，并最大可能地保持其抗原性；制备的魏氏梭菌类毒素疫苗无毒副作用，安全可靠；用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗对家兔的有效免疫剂量为2mL／只，免疫保护效果可靠；采用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗免疫接种家兔后第2周血清抗毒素效价迅速升高，到第4周达最高峰，分别为6．6 log2和7．125 log2，较高抗体滴度维持约17周后缓慢下降，至23周时血清平均抗毒素滴度仍维持在4．0 log2和3．4 log2以上，所以，该类毒素疫苗的免疫保护期可以设定为6个月。 相似文献
20.
以抗H5亚型禽流感病毒（AIV）JSD株鸡胚尿囊液免疫8周龄BALB/c小鼠,第4次免疫后取其脾淋巴细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验（HI）对杂交瘤进行筛选,经3次亚克隆后,共获得4株针对血凝素（HA）蛋白的特异性单克隆抗体,分别命名为：2D2、2C8、3D3和3D11。该4株单抗的小鼠腹水的HI效价在2^13～2^15,ELISA效价为1.2×10^5～5.1×10^5。亚类鉴定结果表明,2D2和3D11属于IgG1,2C8属于IgG3,3D3属于IgG2a亚类;特异性试验结果表明,上述4株单抗仅与H5 AIV毒株发生特异性反应,而不与其他亚型AIV以及NDV、IBV和EDSV-76等病毒反应;鸡胚中和试验结果显示,4株单抗均具有较好的中和活性。本研究成功获得4株针对H5 AIVHA蛋白的特异性单抗,为临床H5 AIV的血清学监测及鉴定提供了必需的试剂。 相似文献