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1.
双抗夹心荧光免疫吸附测定法(sFLISA)定量检测转基因玉米中Bt蛋白 总被引：1，自引：0，他引：1
将量子点(Quantum Dots,QDs)应用于标记羊抗兔多克隆抗体,并利用Bt杀虫晶体蛋白作为标准蛋白和免疫抗原,通过抗体-抗原-抗体-量子点标记抗体反应,建立了双抗夹心荧光免疫吸附测定法(sFLISA),以定量检测转基因玉米中的Bt表达蛋白.研究结果表明,该方法的最低检测限为3 pg/mL,线性检测范围为6～200 pg/mL,回收率在90.0%～105.9%,变异系数在3.0%～12.6%. 相似文献
2.
转Bt基因植物中杀虫蛋白的酶联免疫检测技术研究Ⅱ.Bt杀虫晶体蛋白抗体的制备 总被引：7，自引：1，他引：6
用碳酸钠裂解液(50mmol/LNa2CO3,50mmol/LEDTA,pH10)从BacillusthuringiensisHD-1的孢晶混合物中分离提取杀虫蛋白的基础上,进一步用聚丙烯酰胺凝胶制备电泳技术纯化杀虫蛋白,获得了高纯度的杀虫蛋白作为抗原,用于免疫家兔制备抗体。比较了不同抗原注射剂量的免疫效应和免疫过程中(不同注射时间)抗体生成量的变化。结果表明,供试的二种抗原注射剂量对抗体的效价无明显影响,随着免疫次数的增加抗体效价不断上升,最终获得了用琼脂双扩散测定效价为1/120的抗血清。Bt杀虫蛋白的免疫原性低。抗血清中的抗体免疫球蛋白(Ig),首先经硫酸铵分级沉淀粗提,再用DEAE-52纤维素柱层析提取纯化,获得了高纯度的IgG,为抗体的酶标记和ELISA检测杀虫蛋白等研究提供了高特异性的Bt抗体。研究的结果为Bt菌HD-1杀虫蛋白抗体的制备提供了依据。 相似文献
3.
建立了基于量子点标记技术的赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)双抗夹心荧光免疫检测(sandwich fluorescence-linked immunosorbent assay,sFLISA)体系,包含多克隆包被抗体、生物素标记的多克隆检测抗体、量子点标记的链霉亲和素等,获得了sFLISA的最佳操作参数:包被抗体浓度2.5μg/mL,检测抗体稀释500倍,量子点标记链霉亲和素稀释100倍。该方法在OTA浓度3.125~125μg/L之间时,相对荧光强度和OTA浓度呈线性关系,回归方程为y=0.0206x+0.2018,R2=0.9924;加标回收率在90.1%~110.0%之间,变异系数均小于10%,能较好地进行赭曲霉毒素A的定量检测。 相似文献
4.
以自猪肝提取的金属硫蛋白（MT）与牛备清白蛋白（BSA）偶联物为抗原,免疫昆明小鼠以制备多克隆抗体。结果表明：加强免疫间隔时间10d，MT首次免疫量保持在16-32μg／只，加强免疫时用量依次加倍，其免疫效果最佳，可使大部分小鼠抗血清效价达到1：16以上。随后．将这部分抗血清IgG提纯并达到电泳纯，经直接ELISA鉴定其确为猪MT的特异性抗体．表明可用于酶标记方法检测猪MT。 相似文献
5.
利用σ 3和σ 2重组蛋白检测禽呼肠孤病毒抗体ELISA的建立 总被引：5，自引：0，他引：5
将纯化好的两个ARV结构蛋白σ3和σ2作为包被用抗原,分别进行间接ELISA,并确定它们的最佳抗原包被浓度分别为9．5、12．0μg／mL;一抗血清的稀释度为1：200;HRP酶标羊抗鸡IgG稀释度为1：5000,初步建立了能检测ARV抗体的σ3-ELISA、σ2-ELISA以及σ3、σ2两个蛋白同时包被的σ3-σ2-ELISA检测方法。分别用上述3种方法对制备的ARVSPF鸡阳性血清进行检测,结果阳性检出率分别为90．91％、69．70％和100％。表明σ3-σ2-ELISA方法在ARV抗体检测方面具有较高的敏感性。 相似文献
6.
沙丁胺醇时间分辨荧光免疫分析检测技术的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
采用包被二抗间接竞争法,以抗SAL二抗体包被96微孔板作为固相二抗,与游离SAL间接竞争限量的以Eu^3＋标记的SAL-OVA抗原,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测沙丁胺醇（SAL）,以利用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术建立快速、高灵敏度的沙丁胺醇（SAL）全自动检测方法。结果表明该法的灵敏度为0．04ng／mL,批内和批间变异系数分别为2．2％和8．7％,平均回收率为106．5％,与盐酸克伦、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0．93％和0．73％。由此可见,用TRFIA法检测SAL,灵敏度高、特异性强、稳定性好,具有良好的应用前景。 相似文献
7.
利用ELISA检测新疆转基因抗虫棉组织中Bt杀虫蛋白 总被引：3，自引：0，他引：3
利用抗体一抗原一酶标抗体反应,建立了酶联免疫吸附测定法(ELISA),检测转基因抗虫棉中Bt杀虫蛋白的表达。这一检测方法不仅对转基因抗虫棉组织中Bt杀虫蛋白表达量进行定性、定量测定,也对转基因抗虫棉的选育和抗虫性测定提供了依据。 相似文献
8.
用rcPL对6-8周龄的昆明小鼠进行免疫注射制备多抗,第3次加强免疫后第6天采集少许血清,用琼脂凝胶免疫扩散（AGID）和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗体的产生情况;分娩后立即通过剖腹产的方法获得山羊胎盘组织,用获得的抗血清通过免疫组织化学（IHC）和间接荧光抗体试验（IFA）的方法定位胎盘催乳素。结果表明,琼脂扩散检测抗原浓度为100μg／mL,用ELISA中酶标仪检测450nm处OD值,免疫血清与阴性对照的比值P／N为7．77;IHC和IFA显示胎盘催乳素在肉阜和子叶的双核细胞及单核细胞中表达。使用背部皮下多点注射的方法对昆明小白鼠进行免疫来制备重组山羊胎盘催乳素多克隆抗体是可行的,制备的抗体能满足免疫组织化学和荧光免疫组织化学检测胎盘催乳素的要求。 相似文献
9.
以纯化pQE31表达的融合蛋白仙台病毒EP（S）为诊断抗原、融合蛋白FP（S）免疫鼠血清为阳性抗体,建立了小鼠仙台病毒抗体检测的间接ELJSA诊断方法。该抗原FP（S）不与其他常见的小鼠病毒（小鼠肝炎病毒、鼠痘病毒、小鼠肺炎病毒和呼肠孤病毒Ⅲ型）的阳性缸清发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于7％,与中国药品生物制品检定所的试剂盒符合率为98％。本研究建立的检测仙台病毒抗体的间接ELISA诊断方法,有很好的特异性和敏感性,为仙台病毒的抗体的检测提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。 相似文献
10.
转Bt抗虫基因植物中杀虫蛋白的酶联免疫检测技术研究Ⅲ.酶联免疫(ELISA)间接法检测Bt杀虫蛋白研究 总被引：6，自引：0，他引：6
采用ELISA间接检测法,研究了2种酶标羊抗兔抗体(辣根过氧化物酶与碱性磷酸酶)和2种检测载体(聚苯乙烯多孔板和硝酸纤维膜)对检测灵敏度和样本检测效果的影响。结果表明,在采用纯的杀虫晶体蛋白进行灵敏度检测时,2种酶标抗体的测定结果非常相近,无明显差别,灵敏度可达7·8~15·6ng。但在检测植物样本时,不同酶标抗体则存在差异。表现为碱性磷酸酶标记的抗体优于辣根过氧化物酶标记的抗体。这主要是由于植物样本中有内源过氧化物酶所致。用硝酸纤维素膜和聚苯乙烯多孔板作载体进行检测纯的Bt杀虫蛋白的效果二者相当。但检测植物样本时,植物中的叶绿素对Dot-ELISA的干扰很大,准确性差。本研究所制备的Bt杀虫蛋白抗体具有高的特异性。 相似文献
11.
3种ELISA法定量检测转cry1Ac基因水稻Cry1Ac蛋白的比较研究 总被引：3，自引：1，他引：3
用从细菌中分离的纯品CryIAe蛋白作为抗原成功制备出了效价较高的CryIAe蛋白的兔多抗，对制备的抗体的免疫学分析表明，其与CryIAc有极显著的免疫交叉反应，并在对转cryIAc基因水稻的检测中具有良好的特异性。用戊二醛一步法对纯化的IgG进行了碱性磷酸酶标记。应用制备的抗体进行了直接法、间接法和双抗夹心法等ELISA方法检测转cryIAc基因水稻中Bt的含量，结果表明直接法和间接法ELISA只能定性而不能定量测定转cryIAc基因水稻，而双抗夹心法是一种比较理想的定量检测水稻中Bt含量的方法。同时确定了双抗夹心法的各项具体条件。 相似文献
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13.
[目的]研究了植物病毒表达载体pCIYVV／CP／W的构建及用pClYVV／CP／W表达绿色荧光蛋白（GFP）,为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考。[方法]用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA克隆pCIYVV基因组的NIb／CP基因之间的一段多克隆位点和两侧含有病毒蛋白酶NIa切割识别序列的多聚脱氧核糖核苷酸接头,构建pCIYVV／CP／W载体,并将绿色荧光蛋白基因插入pCIYVV／CP／W中构建pCIYVV／CP／W／GFP载体,用反转录PCR对重组病毒克隆转录情况进行检测,并用Western杂交对重组病毒克隆表达的目的基因产物进行测定。[结果]pCIYVV／CP／W／GFP接种的蚕豆幼苗表现出与野生型CIYVV相同的症状,发病率达100％,表明重组病毒克隆pCIYVV／CP／W／GFP．有侵染性,外源基因的插入没有破坏载体pCIYVV／CP／W的开放阅读框;以感染叶总RNA为模板,对pCIYVV／CP／W／GFP表达GFP外源基因的稳定性进行了检测,从F0（重组病毒质粒最初转录出的病毒）一直检测到Fd子代病毒。检测结果表明,外源基因在L子代病毒基因组中稳定存在;以从感染叶中提取的总蛋白为抗原,以GFP抗体为第1抗体,以碱性磷酸酶标记抗体为第2抗体,用Western杂交对重组病毒克隆pCVYVV／CP／W／GFP表达外源蛋白进行了定性检测。从F0一直检测到F4子代病毒。检测结果表明,重组病毒克隆pCIYVV／CP／W／GFP至少到F4子代病毒能稳定表达GFP。 相似文献
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禽流感疫苗不同免疫剂量对免疫鸡产生的抗体效价影响 总被引：1，自引：0，他引：1
通过应用同一批次的禽流感疫苗，在同一鸡群中采用相同的免疫方法和部位（均采用颈部皮下注射）。在同一时间内进行不同免疫剂量的禽流感疫苗免疫注射试验。根据免疫剂量的不同，将所选养殖场的同群鸡分别分为4个试验组（O．3mL／只、0．4mL／只、0．5mL／只和0．8mL／只）进行疫苗免疫，免疫后采用相同的饲养管理方式进行同群饲养管理，在间隔相同的时间后，采样进行免疫抗体水平检测，结果其产生的免疫抗体效价阳性率与免疫剂量成正比．高的达到92％，而低的仅11％。根据群体抗体达标检测要求，抗体效价检测阳性率达到全群的70％才能达到免疫合格．而该次试验中免疫剂量为0．5mL／R和0．8mL／R的试验纽其群体抗体效价阳性率达到免疫抗体效价群体合格的要求．其余2组未达标。 相似文献
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利用抗体－抗原－酶标抗体反应，建立了间接酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ），以检测转基因抗虫棉品系３１０幼叶Ｂｔ毒蛋白含量。初步测定结果：转基因抗虫棉幼叶中Ｂｔ毒蛋白含量为总可溶性蛋白南的（０．１２６±０．００８）％。提纯的伴胞晶体样品经ＥＬＩＳＡ法检测，基Ｂｔ毒蛋白最低可检值为２０ｎｇ／ｍｌ。这一检测技术既可对转 Ｂｔ毒蛋白表达量进行定性、定量测定，也为阐明转基抗虫棉的抗虫特性提供了理论依据。 相似文献
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为了制备可用于检测氟苯尼考的特异性多克隆抗体,采用戊二醛法合成氟苯尼考的人工抗原FFA－BSA、FFA－OVA、紫外分光光度计进行鉴定,用FFA－BSA免疫BALB／C雌性小鼠获得可用于检测氟苯尼考的特异性多克隆抗体,并用间接ELISA法对其进行特异性鉴定。结果显示：经过紫外扫描鉴定,成功合成了人工抗原合 FFA－BSA和FFA－OVA,偶联比分别为12∶1和11∶1。制备的抗体效价低于1∶32000,抑制率为50％（ IC50）时的氟苯尼考浓度为36．9 ng／mL。可见,本试验制备的氟苯尼考多克隆抗体具有较好的亲和力和高特异性,有良好的应用价值。 相似文献
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21日龄伊莎珍珠鸡分别用于新城疫病毒（NDV）、传染性法氏囊炎病毒（IBDV）攻毒，并设相同日龄雏鸡攻毒做对照。经口感染NDV组珍珠鸡全部发病，死亡率30％（3／10），雏鸡对照组亦全部发病，死亡率70％（7／10）；经口接种IBDV的珍珠鸡无一发病，剖检无病变，琼脂扩散试验亦未检测到IBDV抗体，也未能在法氏囊中检测到IBDV抗原，而经口腔接种IBDV的对照鸡则有80％发病，死亡率20％，血清中检测到IBDV抗体，并从其法氏囊中检测到IBDV抗原，经泄殖腔接种IBDV的珍珠鸡亦未见发病，但经病理组织学检查发现在法氏囊，脾脏及肾脏等处出现病变。 相似文献
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犬冠状病毒基因重组抗原间接ELISA检测方法的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
以在E、coli高效表达的犬冠状病毒核蛋白为抗原,用辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗犬IgG为二抗,建立了检测犬冠状病毒抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定确定出最佳反应条件为lμg／孔纯化的E．coli表达的重组N蛋白抗原包被酶标板,用10％的兔血清进行封闭,以正常E．coli裂解上清液稀释待检血清。结果表明：应用重组N蛋白作为诊断用抗原具有特异性强、稳定性高、成本较低等特点。 相似文献
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