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为了建立桑树根围土壤微生物群落结构的分子生态学试验技术体系,采取不同的细胞裂解方法及DNA沉淀方法直接提取桑树根围土壤微生物总DNA,并以采用试剂盒提取的桑树根围土壤微生物总DNA为参照,筛选出一种能有效提取高纯度、多样性土壤微生物总DNA的方法:以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、溶菌酶、蛋白酶K、十二烷基磺酸钠(SDS)为裂解液,经反复冻融裂解细胞,在DNA提取液中添加聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP K30)、牛血清蛋白(BSA)、CaCl2去除腐殖酸,并结合聚乙二醇8000(PEG8000)沉淀和纯化DNA。该方法简便、快速,获得的桑树根围土壤微生物基因组DNA分子长度在23 kb以上,土壤鲜样的微生物DNA产率为11.2μg/g,且纯度较高,D(260 nm)/D(230 nm)=1.42,D(260 nm)/D(280 nm)=1.37,可直接用于PCR扩增及变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析。 相似文献
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对血液中提取基因组DNA的方法加以改进,获得了一种提取猪肾组织中DNA的有效方法.试验表明,利用SDS裂解,氯仿、异戊醇抽提母猪肝脏中基因组DNA,得到的DNA纯度较高,可用来进一步进行RAPD分析和PCR扩增,用于各种分子生物学实验. 相似文献
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鹅血液基因组DNA的简单快速提取方法研究 总被引：2，自引：0，他引：2
本研究针对家禽血液红细胞有细胞核的特点,研究适合鹅血液基因组DNA的廉价、简便、快速的DNA提取方法,并为其它禽(鸟)类相关操作提供参考。通过裂解细胞,利用简便快速的操作方法将蛋白质和核酸分离,去除杂质,沉淀核酸,获得大量基因组DNA,并通过基因扩增检测其质量和效果。该方法提取的基因组DNA电泳检测条带明量,无拖尾,含量及纯度均较高,能够用于分子生物学实验研究。与传统的酚-氯仿DNA抽提方法相比,本实验建立的血液基因组DNA提取方法具有成本低、操作步骤简便和快速的特点,特别是对大量样品的提取更为实用。 相似文献
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【目的】研究从成熟石榴叶片中提取高质量基因组DNA的方法。【方法】根据成熟石榴叶片组织中富含多酚、多糖的特点,以峄城中国石榴种质资源圃20种石榴成熟叶片为材料,分别采用改良CTAB法(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)4种方法提取成熟石榴基因组DNA,通过琼脂糖凝胶、紫外分光光度计分析、ISSR扩增等方法检测所提取DNA的质量。【结果】改良的CTAB Ⅳ法能从各个石榴品种的成熟叶片中提取出基因组DNA,琼脂糖电泳胶孔干净,无拖带,且DNA的纯度和完整性都较好,OD260 nm/OD280 nm的比值均在1.8~2.0之间,无降解现象,其质量、产量都高于其他改良CTAB法。经ISSR- PCR扩增结果表明,此方法提取的基因组总DNA完全适于ISSR分析。其主要的步骤是：在石榴叶片的研磨中添加Vc、PVP等抗氧化物质,加入CTAB提取液后65 ℃水浴30 min后冷却至室温,离心条件为15℃,10 000 r/min,10 min,DNA粗提液用氯仿抽提3次,可获得高质量的DNA。【结论】改良的CTAB Ⅳ法能有效地从石榴成熟叶片中提取到高质量的基因组DNA。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2016,(10)
为分析不同处理方法对空气中细菌气溶胶样本基因组回收率的影响,本研究利用玻璃纤维滤膜采集空气样品中的微生物气溶胶后,针对采样膜的不同处理(钢珠敲打、研磨、MOBIO PowerWater试剂盒)进行DNA提取方法比较,结果表明利用MOBIO PowerWater DNA Isolation Kit对采样膜进行基因组DNA的提取能获得高纯度的DNA(OD_(260nm)/OD_(280nm)=1.82);利用荧光定量PCR技术对所回收基因组进行定量分析,验证该处理方法的样品DNA得率最高,达到15.81%。起始模板浓度的对数与对应的CT值成反比且具有极强的线性关系,其线性相关系数R~2为0.9985。本研究将对养殖场等环境空气中病原体气溶胶样本处理具有重要指导意义。 相似文献
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为筛选出一种从牛凝固血中高效获得基因组DNA的方法,本研究选择64个凝固血样,分别进行匀浆破碎和手动剪碎的预处理,结合酚-氯仿抽提和试剂盒提取方法,提取基因组DNA,并选择抗凝血作为参照,对试验耗时、DNA数量和质量进行比较。结果表明:通过对牛凝血块进行匀浆破碎预处理,不仅缩短了蛋白酶K的消化时间,而且获得了高质量基因组DNA,浓度和纯度均达到抗凝血提取效果(P0.05)。酚-氯仿提取法相比试剂盒法,虽然得到更多量的DNA,但是DNA质量下降,而且试验耗时增加。本研究证实,匀浆破碎预处理后的牛凝固血样可以作为高质量基因组DNA的样本来源,并可替代抗凝血,解决生产中抗凝血不易获得和采集的问题。 相似文献
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禽类血液中的蛋白质含量较高,用传统方法提取其血液中的基因组DNA比较繁琐、纯度不高,而且提取的产物中有大量蛋白质残留。本研究采用改良的CTAB法从白羽王鸽全血中提取全基因组DNA,并以传统的酚-氯仿抽提的方法和TAKARA公司基因组提取试剂盒法作对照。结果表明：qCTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA,并且纯度达到2．00,浓度达到了144．67ng/μL,完全可以满足PCR扩增限制酶切等实验的要求。 相似文献
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以根蘖型苜蓿Medicago sativa的根、茎、叶为材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较了改良CTAB法和TRNzol试剂盒法等4种方法提取的苜蓿总RNA的产率和纯度。结果表明:改良CTAB法提取的RNA的OD260nm/OD230nm大于2.0,并且OD260nm/OD280nm接近1.8,具有较高的纯度。凝胶电泳结果表明,改良CTAB法有28S rRNA和18S rRNA 2条清晰的条带,且很少有降解;TRNzol试剂盒法获得的RNA品质也较好,但存在降解和弥散现象;其他2种方法提取效果较差。这证明改良CTAB法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求;TRNzol试剂盒法也可以满足实验的下一步要求,但需要进一步纯化。 相似文献
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低温弱光对苗期紫花苜蓿根颈生理特性的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
以秋眠级不同的2个紫花苜蓿Medicago sativa品种(巨人201和WL414)为试验材料,研究了其在低温(0~5℃和5~10℃)与弱光[50和100μmol/(m2.s)]互作处理条件下的生理响应。结果表明:紫花苜蓿根颈在低温弱光胁迫下启动了自身应激机制,对逆境胁迫做出了适应性反应,相同弱光条件下,低温0~5℃比5~10℃对根颈的影响显著,过氧化物酶活性上升幅度较小,而超氧化物歧化酶活性的下降和丙二醛含量的增加幅度均较大;相同低温处理,弱光50μmol/(m2.s)处理对根颈生理指标影响更为显著,过氧化物酶活性上升、超氧化物歧化酶活性下降和丙二醛含量增加幅度大于弱光100μmol/(m2.s)处理;巨人201各项指标的变化都优于WL414,表明巨人201抗寒耐弱光能力都可能优于WL414。 相似文献
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以热研2号柱花草（Stylosanthes guianensis Reyan No.2）叶片为材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较SDS 酚抽提法、CTAB法、Trizol试剂盒和柱式植物RNAout试剂盒法提取柱花草总RNA的质量和纯度。结果表明,改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的RNA的OD260 nm/OD280 nm分别是1.85和1.93,OD260 nm/OD230 nm均大于2.0。凝胶电泳结果表明,改良CTAB法及柱式植物RNAout试剂盒法均有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。其他两种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的RNA逆转录成cDNA,cDNA能扩增出一条清晰的β actin基因片段,进一步证明了改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的总RNA具有很高的纯度,其中柱式植物RNAout试剂盒法的效果好于改良CTAB法。 相似文献
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1. The aim of this study was to evaluate the amount and quality of genomic DNA isolated from embryos and their chorioallantoic membranes (CAM) and to investigate the utility of different PCR methods for identifying the sex of Japanese quail embryos. 2. Fertilised eggs were incubated at 37°C for 120?h and DNA was isolated from samples of embryos and CAM. Target regions of the CHD-W gene or XhoI repeat sequence were amplified by PCR and examined on agarose gels or by using a capillary electrophoresis system. 3. DNA samples from embryos had significantly higher OD260 values than those from CAM, while OD260/280 values were not significantly different between embryos and CAM. 4. Gender identification was not possible by PCR amplification of the CHD gene region or XhoI repeat sequences examined on agarose gels, whereas males and females of Japanese quail were distinguishable when PCR products of the CHD gene were separated by capillary electrophoresis. 5. The results showed that high molecular weight DNA could be isolated from both embryo and CAM of Japanese quail. DNA isolated from CAM could be used for molecular genetic studies where embryos would be used for other purposes, such as in situ hybridisation. A capillary electrophoresis system could be used for identifying the gender of Japanese quail embryos. 相似文献
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高质量DNA的提取是开展分子生物学研究的重要环节。针对梨组织中含有大量多糖、多酚等影响DNA提取质量的次生代谢产物的特点,本研究以梨叶片、果皮和果肉为材料,开发了一种新的基因组DNA提取方法——N-月桂酰肌氨酸钠法,并分别与常用的试剂盒及CTAB法进行比较分析。对三种方法提取DNA的总量、浓度及OD值等进行检测分析,结果表明：相比试剂盒及CTAB法,N-月桂酰肌氨酸钠法不需水浴加热,步骤少,操作简单,提取的DNA纯度、浓度均有较大提高,并且适用于大片段DNA的提取。因此,N-月桂酰肌氨酸钠法是一种可靠的高效获得梨基因组高质量DNA的新方法。 相似文献
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牛结核杆菌DNA疫苗的纯化工艺研究及质量鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
为获得纯度较高,能进行动物免疫试验的DNA疫苗,在高密度发酵工程菌的基础上,通过传统的碱裂解,获得粗提的质粒;用氯化钙去除裂解液中的大部分RNA,并用Sartobran P囊式过滤器获得了澄清的溶液。用聚乙二醇法沉淀超螺旋质粒DNA,去除大部分菌体蛋白和宿主DNA。最后用source 30Q阴离子交换色谱填料去除几乎全部的内毒素并浓缩了质粒。本试验纯化的DNA疫苗经质量检验达到了转染动物的要求。该工艺实现了一步色谱纯化DNA疫苗的目的,具有工艺简单、快速的优点。 相似文献
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从临床病鸭中分离并鉴定了1型鸭疫里默氏杆菌,并在提取鸭疫里默氏杆菌的基因组DNA后,用Sau3A I酶切,回收大小为0．07～4 kb的片段;将酶切片段与酶切的质粒载体pRSET连接后,电转化大肠杆菌Rosetta,成功构建了1型鸭疫里默氏杆菌的基因组文库,经检测库容量约为40000个。随机筛选30个单菌落,用pRSET通用引物进行PCR鉴定,统计结果显示插入片段的大小93．3％在1～3 kb范围内,成功构建了鸭疫里默氏杆菌基因组文库,为鸭疫里默氏杆菌功能基因的克隆及鉴定奠定了基础。 相似文献
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It is essential to isolate high-quality DNA from muscle tissue for PCR-based applications in traceability of animal origin. We wished to examine the impact of cooking meat to a range of core temperatures on the quality and quantity of subsequently isolated genomic (specifically, nuclear) DNA. Triplicate steak samples were cooked in a water bath (100 degrees C) until their final internal temperature was 75, 80, 85, 90, 95, or 100 degrees C, and DNA was extracted. Deoxyribonucleic acid quantity was significantly reduced in cooked meat samples compared with raw (6.5 vs. 56.6 ng/microL; P < 0.001), but there was no relationship with cooking temperature. Quality (A(260)/A(280), i.e., absorbance at 260 and 280 nm) was also affected by cooking (P < 0.001). For all 3 genes, large PCR amplicons (product size >800 bp) were observed only when using DNA from raw meat and steak cooked to lower core temperatures. Small amplicons (<200 bp) were present for all core temperatures. Cooking meat to high temperatures thus resulted in a reduced overall yield and probable fragmentation of DNA to sizes less than 800 bp. Although nuclear DNA is preferable to mitochondrial DNA for food authentication, it is less abundant, and results suggest that analyses should be designed to use small amplicon sizes for meat cooked to high core temperatures. 相似文献