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1.
多年来,都用琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验检测牛白血病病毒(BLV)抗体。而此疫病的普查和根除需要检测大量的样品,酶联免疫吸附试验就可满足这一要求,间接法是先将提纯的抗原包被到固相载体,再加试验血清和特异性IgG结合物,阻断法是利用试验血清中的抗体干扰或阻断标准抗原-抗体 相似文献
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用兔抗牛睾丸细胞培养物的IgG琼脂糖4B偶联制备亲和层析柱,以反向亲和层析法纯化SFV—C抗原,即通过亲和层析免疫吸附除去PEG沉淀法部分纯化抗原中的残留牛睾丸细胞培养物成分。结果表明.通过3次反向亲和层析柱的纯化抗原.其总蛋白去除率达76.9％;应用纯化前后抗原检测猪瘟免疫血清.纯化抗原可以除去猪瘟免疫血清中的非相关抗体反应,确保猪瘟免疫抗体检测的特异性. 相似文献
3.
将FLK/BLV培养上清经差速和梯度离心提纯的牛白血病病毒(BLV).经NP-40裂解后.分别采用Poly(A)·oligo(dT)_(12_18_)纤维素.Poly(G)-DEAE-纤维素和Poly(G)-磷酸纤维素等亲和层析法纯化了BLV反转录酶(RT)及前体.酶活性回收率分别为16.6％、3.34％和38.6％。经Cs-930凝胶扫描分析,酶制剂中RT的相对百分含量分别为53.9％、67.5％.实验表明,Poly(G)-磷酸纤维素层析是提纯BLV-RT的有效方法;用DEAE-纤维素和肝素-琼脂糖层析法不能提纯BLV-RT.提纯的酶制剂经SDS-PAGE分析,测得RT分子量为69.6kd(P69.6).发现了酶的前体蛋白.其分子量为95kd(P95)同时还发现有一条分子置为15kd(P15)的多肽区带,推测为BLV该酸内切酶结构的一部分。 相似文献
4.
牛副结核胶体金免疫层析试纸条的研制 总被引：2，自引：0，他引：2
将提纯的牛副结核分支杆菌重组蛋白MAP0862-2154c作为硝酸纤维素膜检测线的包被抗原,兔抗羊IgG作为硝酸纤维素膜质控线的包被抗体,金标羊抗牛IgG点喷到玻璃纤维素膜上,制成用于检测牛副结核抗体胶体金免疫层析试纸条。用牛的副结核标准阳性血清与检测试纸条反应,在检测线处出现红色反应带,而滴加阴性血清的试纸条检测线处未出现反应条带,上述2种血清在质控线处均出现红色反应条带;试纸条可检出牛副结核抗体的最低抗原包被浓度为400μg/mL;试纸条不与牛结核病、牛布鲁氏菌病的阳性血清发生反应;试纸条37℃保存9d后的检验结果与4℃保存的检验结果相同。所制备的试纸条具有灵敏、特异的优点,稳定性良好;10min左右即出结果,操作简便,可用于临床诊断。 相似文献
5.
应用牛腹腔唇乳突丝虫提纯抗原（简称牛丝虫Ｇ抗原）和抗人ＩｇＧ酶标记物的酶联免疫吸附试验，检测２２７例班氏丝虫病人血清的阳性率为９５．５９％；检测１３２例健康人血清的假阳性率为２．２７％，１０例血吸虫病人血清的阳性率为０。应用牛丝虫Ｇ抗原和马来丝虫抗原同步检测５０例班氏丝虫病人血清的阳性睾，前者为９８％，后者为８６％，二者有显著差异（Ｐ〈０．０５）。因此认为，牛丝虫Ｇ抗原可以作为人丝虫病人的异种抗原 相似文献
6.
选取鸡源补体C3a链的21个氨基酸残基序列，人工合成模拟C3分子的21肽^[741-761]，与牛血清白蛋白载体偶联结合后，制成人工合成抗原复合物。将此人工合成抗原加弗氏佐剂制成油乳剂疫苗，免疫注射家兔制备成抗21肽抗体。从抗血清中提纯IgG，用以检测不同动物血清中C3含量。结果表明，人工合成的c3分子的21肽复合抗原具有很强的免疫原性，制成的抗血清的IgG效价达2。，且能与不同动物血液的c3分子发生特异性结合；用该IgG对鸡、猪、山羊、牛和豚鼠体内的C3进行了检测，其含量分别为（0．34±0．005）、（1．47±0．008）、（1．70±0．005）、（1．78±0．007）、（4．18±0．008）g／L，发现鸡体内的C3含量明显低于其他几种动物，差异极显著（P〈0．01），这可能是鸡体对细菌性疫苗免疫效果不佳的主要原因。 相似文献
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应用牛腹腔唇乳突丝虫（Ｓｅｔａｒｉａｌａｂｉａｔｏｐａｐｉｌｌｏｓａ）提纯抗原（简称牛丝虫Ｇ抗原）和抗人ＩｇＧ酶标记物的酶联免疫吸附试验，检测２２７例班氏丝虫病人血清的阳性率为９５．５９％；检测１３２例健康人血清的假阳性率为２．２７％，１０例血吸虫病人血清的阳性率为０。应用牛丝虫Ｇ抗原和马来丝虫抗原同步检测５０例班氏丝虫病人血清的阳性率，前者为９８％，后者为８６％，二者有显著差异（ｐ＜０．０５）。因此认为，牛丝虫Ｇ抗原可以作为人丝虫病的异种抗原诊断试剂。 相似文献
8.
以兔抗正常绵羊血清的IgG与CNBr活化的Sepharose 4B交联作免疫吸附剂进行亲和层析,除去绵羊棘球蚴囊液(SHF)中的绵羊血清成分。用亲和层析纯化的SHF作抗原进行酶联免疫吸附试验(ELISA),对棘球蚴感染绵羊和黄牛的敏感性分别为92.16％和95.83％;健康绵羊和黄牛的特异性分别为95.63％和93.33％;细颈囊尾蚴感染绵羊有22.73％出现阳性反应。讨论了宿主抗原对ELISA结果的干扰,以及各种带科绦虫的中绦期幼虫之间的交叉反应问题。 相似文献
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以50％饱和硫酸铵沉淀的兔抗伊氏锥虫高免血清球蛋白制备琼脂糖-4B免疫吸附柱,对马媾疫锥虫超声全虫可溶性抗原进行反亲和层析免疫吸附。当抗原量在抗体吸附范围内时,最先洗脱下来的成分即为媾疫锥虫特异性抗原(差异抗原)。该抗原与媾疫锥虫血清抗体反应较强,与伊氏锥虫血清抗体反应较弱,经SDS-PAGE检测,其为分子量大于68000的大分子蛋白。 相似文献
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间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)的第二抗体,根据国内外文献记载,必须与第一抗体相对应。如检测患马血清的抗体,必须制备兔抗马IgG;检测患牛血清的抗体,必须制备兔抗牛IgG。从1980年以来,我们用ELISA检测牛伊氏锥虫病抗体,发现第二抗体可用免抗马IgG;用ELISA检测马伊氏锥虫病抗体,第二抗体亦可用兔抗牛IgG,现将结果报道如下。 相似文献
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从牛白血病病毒(BLV)传代绵羊肿瘤组织中提取了肿瘤细胞相关抗原(TAA),它在聚丙烯酰胺电脉中出现一条带,分子量为73500,主要存在于肿瘤细胞胞膜。经动物接种和血清学试验等证实,TAA 具有抗原性和反应原性,与 BLV 抗原无交叉反应。建立了检测血清中抗 TAA 抗体的 ELISA 方法和用抗 TAA 相应抗体的 F(ab′)_2片段标记物检查组织和血液中肿瘤细胞的免疫组化法,为进一步提高肿瘤细胞诊断及研究肿瘤细胞的病理发生提供了可能性。 相似文献
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从15头BLV阳性牛和20头BLV阴性牛采集血清、乳样和尿样。血清用含0．2％吐温一20，0．001％硫柳汞的＊BS作1：100稀释，乳样作1：4稀释，阳性和阴性参照血清溶于0．sml灭菌蒸馏水中，再作1：100稀释。阳性参照血清稀释后一式3份用于各个试验板中，以便计算阳性临界值。ELISA试验步骤为；100PI稀释血清加入含病毒抗原孔或阴性对照抗原孔．4C“作用18～24h．用稀释缓冲液洗板3次．每孔加入100ul过氧化物酶结合物（抗牛IgGI单克隆），371：温有比，洗涤后加入10On底物（PH4．2，0．SM醋酸盐缓冲液中溶有ZmMABTS，添有外l％H。0，… 相似文献
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应用体外培养的泰氏锥虫制备可溶性抗原Ⅰ、抗原Ⅱ和代谢抗原.经测定,其蛋白含量每毫升分别为6.5mg、7.4mg和7.1mg.薄层等电聚焦电泳测定结果表明,抗原Ⅰ出现22条区带,抗原Ⅱ21条区带,代谢抗原28条区带,对照的伊氏锥虫琼脂免疫扩散抗原14条区带.经分析,泰氏锥虫抗原和伊氏锥虫抗原有4条区带在同一迁移率上.琼脂免疫扩散反应中,3种泰氏锥虫抗原均与相应免疫兔血清发生沉淀反应,抗原Ⅰ出现1条致密沉淀线,抗原Ⅱ和代谢抗原出现2～3条沉淀线,抗原效价为1:4～16.免疫电泳显示了类似的结果,抗原Ⅰ与免疫兔血清出现1条弧形沉淀线,抗原Ⅱ和代谢抗原与免疫兔血清出现了3条弧形沉淀线.间接血凝试验结果表明,泰氏锥虫自然感染牛血清效价为1:20～40,免疫兔血清为1:1280～5120.所制泰氏锥虫抗原对伊氏锥虫和媾疫锥虫血清也能很好地发生交叉反应,3份伊氏锥虫病马血清和3份伊氏锥虫人工感染兔血清血凝效价分别为1:10～40和1:8～1024;5份媾疫马血清有4份血凝效价为1:20～320.4份环形泰勒虫病牛血清均为阴性. 相似文献
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采用辛酸-硫酸铵法提取兔抗牛病毒性腹泻-黏膜病毒(BVDV)高免血清中的免疫球蛋白IgG,辣根过氧化物酶标记提纯后IgG,建立了检测BVDV抗原的双抗体夹心斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)法。结果显示,抗体最佳包被量为300μg/mL,酶标记抗体的最适浓度为1∶50倍稀释,以5%牛血清作为封闭液、封闭45min效果最佳,抗原最小检出量是1.34μg/mL。应用建立的检测方法对河北省内78份腹泻奶牛血样进行了检测,阳性检出率为57.69%;经卡方检验分析,建立的Dot-ELISA与琼脂扩散(AGP)法相比较,阳性检出率差异显著。试验证明,该方法具有简便快速、特异性强、重复性高的优点,适合于基层兽医的检测诊断。 相似文献
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作为牛白血病病毒检定的一种新方法,合胞体检出是以被感染牛和羊的淋巴细胞来评价的。只有当采用地方流行性白血病牛和BL实验感染羊的淋巴细胞时,始在指示细胞中诱发合体形成。合胞体形成数与BLV—感染牛接种淋巴细胞数显示一种用量的正比反应关系。成熟型淋巴肉瘤牛的胚淋巴细胞用抗BLV血清处理能抑制合胞体形成,然而用牛合胞体病毒的抗血清或用散发性淋巴肉瘤牛血清均不能引起抑制。这些结果表明这种检出方法对BLV感染的检定是特异性的和有用的。关于牛白血病病毒的作用与在数个指示细胞上可形成合胞体已有报导[2,6,7],在其试验体系中,正常牛胚胎细胞和变态细胞被用作指示细胞。已往的研究已经确认合胞体检出(SA)对定量BLV的感染性是一种简易、可靠的技术。了解具有抗BLV抗体的牛是否在它们的淋巴细胞中携带有BLV是很重要的。电子显微镜及合胞体检出揭示了在具有BLV抗体牛的外周血液淋巴细胞培养中病毒复制物已有产生。[4,10] 这篇论文是关于用BLV所感染的牛和羊的淋巴细胞测定SA的进一步评价。 相似文献