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根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)TK基因序列，设计、合成1对引物，应用PCR技术对ILTV以色列疫苗株、河南分离株（ILTV-CG和ILTV-XY）进行PCR扩增，均能扩增出预期大小的目的片段，测序分析和酶切分析证实了PCR产物的特异性，而对其它禽病原体的扩增均为阴性。PCR检测ILTV DNA的最小检测量为21 pg。应用PCR检测人工接种后不同〖JP2〗天数采集的鸡的结膜拭子，接种后第2~5 d均能检测到ILTV。该方法可用于鸡传染性喉气管炎病的诊断和临诊样品检测。 相似文献
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《现代畜牧兽医》2016,(3)
根据GenBank传染性喉气管炎病毒(ILTV)基因序列,设计合成了1对特异性引物。以ILTV DNA为模板,建立了检测ILTV的PCR检测方法。通过优化PCR反应条件,成功扩增出一条约690 bp的目的基因片段。而鸡传染性法氏囊病病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、禽流感病毒基因组均未扩增为出相应的片段。敏感性试验检测出其DNA最小检出量为10-2μg。重复性试验中对3份检测为传染性喉气管炎病毒阳性病料进行检测,发现3次重复检测的结果完全一致。临床应用中运用上述优化的PCR反应条件进行PCR检测临床送检的16份疑似鸡传染性喉气管炎病毒感染病料,结果显示检出阳性样品6份,将阳性样品的PCR扩增产物克隆后序列分析显示均为鸡传染性喉气管炎病毒。结果表明,建立的PCR方法具有良好的特异性,敏感性和稳定性,可应用于传染性喉气管炎病毒鉴定和临床诊断。 相似文献
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鸡传染性喉气管炎病毒TK基因的克隆与鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
根据鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）TK基因的核苷酸序列，设计并合成了1对引物，利用该引物扩增出了长1800bp的TK基因核苷酸片段。将该基因克隆入PGEM-T载体后，对其进行酶切分析和序列测定。结果表明，扩增片段与发表的ILTV的TK基因核苷酸序列一致。以ILTV、正常绒毛尿囊膜组织、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）、鸡新城疫病毒（NDV）感染鸡胚的尿囊膜DNA为模板进行PCR反应，结果该PCR反应体系对ILTV是特异的。敏感性试验表明，该PCR系统能检出50pg的ILTV感染尿囊膜的DNA。 相似文献
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根据GenBank登录的传染性喉气管炎病毒(ILTV)的TK基因序列设计并合成1对特异性引物,以ILTV疫苗株DNA为模板,建立了检测ILTV TK基因的PCR方法。应用该方法能从临床分离毒株和疫苗株中扩增到长为427 bp的目的片段;但不能从新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、H9亚型禽流感病毒(H9-AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌等病原中扩增出阳性条带;敏感性试验表明其DNA最小检出量为4.9 ng;应用该方法和病毒分离法对2份临床病例和人工感染鸡的检测,两者符合率为100%。上述结果表明该PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可用于传染性喉气管炎病毒鉴定和临床诊断。 相似文献
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河北省沧州市某养鸡场饲养的510日龄蛋鸡发生急性上呼吸道疫病。为确定病因,采集发病鸡气管组织样品处理后接种鸡胚,利用特异性引物进行禽传染性喉气管炎病毒（ILTV）、禽传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、J型禽白血病病毒等有关病原的PCR扩增,结果从接种病毒的鸡胚绒毛尿囊液中只扩增出ILTV gD基因片段（1 133 bp）,将分离的毒株命名为Hebei2021株;将分离株扩增产物连接载体构建质粒,测序后进行核苷酸序列同源性分析、氨基酸序列比对,并对分离株及参考株gD基因序列进行遗传进化分析,利用在线预测服务器预测gD蛋白二级结构及糖基化位点。结果显示：分离株与国内外参考株及疫苗株gD基因的核苷酸同源性均在99.0%以上,与参考毒株相比仅极个别氨基酸序列位点发生突变;分离株与江苏省分离株之外的国内其他分离株均在同一进化分支上,与疫苗株相比其糖基化位点并未发生突变。结果表明,此次河北省分离株gD基因较为保守,变异程度较低,当前疫苗对ILTV依然有较好的免疫保护力。本研究为禽传染性喉气管炎的流行病学调查和疫苗选择提供了参考。 相似文献
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将鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和皮下刺种2种不同免疫途径免疫1日龄雏鸡,评价其安全性和效力。以10羽份/只剂量接种后,两组鸡均未观察到全身反应。以1羽份/只剂量接种后28d攻毒,两种免疫方式均可以使免疫鸡产生较强免疫力,能够抵抗传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株强毒和鸡痘病毒(FPV)102株的攻击。以上结果显示,鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和皮下刺种2种不同途径免疫1日龄雏鸡,具有良好的安全性和有效性。 相似文献
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鸡传染性喉气管炎病毒PCR诊断方法的建立与研究 总被引：1，自引：0，他引：1
根据GenBank注册发表的传染性喉气管炎病毒（ILTV）的TK基因序列,设计并筛选出1对引物扩增ILTV TK基因片段长为400 bp。以ILTV疫苗株的DNA为模板,进行特异性和灵敏性试验,结果该对引物检测ILTV DNA的最小检测量为1.15 ng,与NDV、H5和H9亚型AIV、IBV灭活抗原、大肠杆菌、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌等抗原无交叉反应。用所建立的方法对发病禽场进行临床检测,结果与病毒分离和动物回归试验结果相一致。结果表明本研究建立了传染性喉气管炎PCR检测方法,并可应用于临床检测和诊断。 相似文献
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传染性喉气管炎病毒基因疫苗免疫效应 总被引：3，自引：1，他引：3
以传染性喉气管炎病毒（ILTV）WG株gB和gD基因为目的基因构建真核表达质粒pCAGG-gB和pCAGG-gD。将75只SPF鸡随机分为7组，经肌肉注射接种pCAGG-gB、pCAGG-gD、pCAGG-gB＋pCAGG-gD、pCAGG-gB＋rFPV-ILTVgB以及rFPV-ILTVgB，并设有生理盐水和空载体（pCAGG）对照组。免疫2周后以500EID50 ILTV WG株强毒进行攻击，以评价ILTV基因疫苗以及基因疫苗和重组病毒联合应用对SPF鸡的免疫保护作用。血清抗体的检测表明：在免疫后的2周，各免疫组的鸡只均产生了特异性的ILTV抗体，外周血CD4^＋T、CD8^＋T、TCRTγδ^＋T细胞明显高于对照组，并且pCAGG-gB和pCAGG-gD分别诱导了高水平的IL-18和IFN-γ的表达。ILTV强毒攻击后，非免疫鸡全部发病，并在第2天出现死亡。而各质粒免疫组均获得了一定的保护（保护率44％），两种质粒联合免疫（pCAGG-gB和pCAGG-gD）和重组病毒（rFPV-ILTVgB）与质粒（pCAGG-gB）联合免疫的免疫组的保护率（56％）高于单独免疫组，产生高水平细胞因子表达的免疫组的保护率高于对照组。重组鸡痘病毒免疫组的保护率（69％）最高。这些结果表明ILTV的DNA疫苗能够诱导鸡体产生特异性免疫应答，并能对传染性喉气管炎强毒的攻击提供一定的免疫保护。 相似文献
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二温式多重PCR同时检测鸡的6种呼吸道病病原方法的建立 总被引：7，自引：1，他引：7
设计了6对分别针对鸡传染性支气管炎病毒（IBV），禽流感病毒（AVI）、鸡毒素霉形体（MG）、鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）、新城疫病毒（NDV）和滑液霉形体（MS）的特异性引物，根据反转录滞酶链反应（RT－PCR）和多重PCR原则，优化建立了一次PCR反应同时检测6种禽呼吸道病原的二温式多重PCR。该方法可同时扩增出6条区段大小与设计相符符的特异性片段，即IBV 1720bp,AIV 1050bp,ILTV647bp,NDV310bp,MS207bp，对人工感染鸡临床样品检测结果证明，该方法可用于临床诊断。 相似文献
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传染性喉气管炎新城疫鸡痘重组病毒免疫效力的研究 总被引：1，自引：2，他引：1
在表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB基因和新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB-F)安全性检验合格后,以5.0×101~5.0×104PFU不同含量按0.1mL/鸡的剂量免疫100只30日龄SPF鸡,30d后分组分别用ILTVWG株和NDVF48E9株强毒进行攻击。免疫鸡抗鸡痘病毒抗体都转为阳性,痘反应和接种剂量有关,重组疫苗的最小反应剂量为50PFU。重组疫苗可以诱发对新城疫和传染性喉气管炎的保护,0.1mL/鸡的接种量在500~5000PFU浓度范围内的免疫效果最好,对于ILTV攻击的发病保护率在70%以上,对NDV强毒攻击的抗死亡保护率可以达到80%,这为进一步考察疫苗的免疫效力试验以及进行田间试验奠定了基础。 相似文献
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本研究从江苏省某养鸡场采集临床疑似鸡传染性喉气管炎(infectious laryngotracheitis,ILT)的病鸡喉头气管,接种鸡胚绒毛尿囊膜分离病毒,命名为LJS091151。以分离毒人工感染SPF鸡,于攻毒后d3出现了ILT的典型临床症状,剖检亦可见喉头气管黏膜充血肿胀、消化道空虚、黏膜充血等病理变化。根据GenBank发表的鸡传染性喉气管炎病毒(Infectiouslaryngotracheitis virus,ILT)gB、TK基因保守序列设计2对引物对分离株基因组DNA进行扩增和序列测定。序列分析表明,获得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank发表的序列相似性均在99%以上,证明了分离株LJS091151为鸡传染性喉气管炎病毒。 相似文献