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应用辛酸硫酸铵法提取纯化兔IgG 总被引：2，自引：0，他引：2
血清中IgG的提取和纯化方法很多,但是各有其优点与不足。单一辛酸法和硫酸铵法操作简单但提取的IgG纯度不高,柱层析可获得高纯的抗体,但成本很高,而且回收率低。本试验应用辛酸硫酸铵法提取和纯化兔抗粪肠球菌血清中的IgG,取得比较理想的结果,现报告如下:1材料与方法1.1材料1.1.1血清:兔抗肠球菌血清(自制)。1.1.2主要药品及仪器:正辛酸(天津市化学试剂一厂),硫酸铵(西安化学试剂厂),凝胶成像系统SYDR2/1779,DYY-6B型稳压稳流电泳仪,透析袋(购自华美公司),UV-754型紫外分光光度计。1.1.3试验动物:健康家兔4只(由石河子大学实验动物中… 相似文献
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两种方法纯化免抗绵羊肺炎支原体IgG的比较 总被引：2，自引：0，他引：2
目的:比较两种方法纯化兔抗绵羊肺炎支原体IgG的效果。方法:采用饱和硫酸铵和辛酸-硫酸铵两种方法分离纯化兔抗绵羊肺炎支原体抗体,并用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、分光光度计和琼脂扩散(AGP)试验对纯化产物进行相对分子质量、蛋白质含量及免疫活性进行鉴定。结果:纯化后抗体的蛋白含量基本相同;产物纯度和效价以辛酸-硫酸铵法较高。结论:辛酸硫酸铵法是一种简便、快速、高效的抗体纯化方法。 相似文献
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利用辛酸首先沉淀掉非 IgG 类蛋白,再用硫酸铵沉淀出 IgG.此法提纯的 IgG 纯度与 DEAE-32柱层析、Pro-tein A 亲和层析纯化的结果相似.抗体提纯前、后的效价不变,抗体收获量达90%以上。该法可广泛应用于鸡、猪、绵羊血清 lgG 的纯化,适用于从大批量样品中提纯lgG. 相似文献
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为了研究兔抗鹅IgG酶标抗体的制备,试验采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提,透析除盐,DEAEA-50纤维素层析相结合的方法提取鹅卵黄IgG,经核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG浓度;制备兔抗鹅IgG酶标抗体;利用酶标抗体检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗的免疫效果。结果表明,粗提的IgG浓度为10 mg/mL,抗体纯度可达到94.5%;免疫扩散得出兔抗鹅 IgG抗血清效价约 1∶32,抗体酶标后效价为1∶3000;酶标抗体可以作为检测疫苗效果一种很好的工具。 相似文献
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本文对鸭血清分别采用了硫酸钠法、辛酸-硫酸铵法、硫酸铵法进行了鸭IgG的提取。提取后的鸭IgG样品用纯度和蛋白含量两个指标来衡量。用辛酸-硫酸铵法提取的鸭IgG样品蛋白含量为9.45mg/ml,纯度能达到用于免疫标记技术的要求,而且操作简单、价格低廉,适于从大批量样品中提纯鸭IgG;用硫酸钠法提取的鸭IgG样品蛋白含量为9.14mg/ml,相对较高,但纯度较低;用硫酸铵法提取的鸭IgG样品蛋白含量、浓度都较低。 相似文献
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本试验采用辛酸去脂、饱和硫酸铵溶液盐析法提纯鹅卵黄抗体IgY,采用SDS-PAGE方法分析其纯度;用纯化后的IgY免疫试验兔,收集血清,测定血清抗体效价;采用辛酸-硫酸铵法结合Protein G树脂亲和层析法纯化免血清IgG,用改良的高碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记,直接ELISA法测定标记物效价.结果表明,提纯的鹅卵黄IgY浓度为11.5 mg/mL,纯度约为92％;血清琼脂扩散抗体效价为1∶32;Western Blotting试验证明,兔血清中含有抗鹅卵黄抗体IgY重链及轻链的特异性抗体;直接ELISA法测得标记物效价为1:1 100. 相似文献
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鸡IgG快速分离纯化和纯度鉴定 总被引：5，自引：0，他引：5
随着免疫学实验技术的普及和发展,从鸡高免血清中提纯IgG已成为常用的免疫化学技术. 在提纯鸡IgG过程中,不但要保证除去绝大多数杂蛋白和白蛋白,保留大多数免疫球蛋白,包括各种IgG亚类,而且又不影响IgG生物活性.这就需要一种好的提纯方法,既要保证IgG纯度,又要保证其生物活性. IgG的经典提纯法是先用硫酸铵盐析,得到粗制的Ig(Immoun-globulin)然后再经分子筛层析,离子交换层析,亲和层析等方法进一步分离纯化IgG.这些纯化方法需要一定的仪器、设备,操作复杂,工艺流程较长,且试剂昂贵,在一般实验室难以推广使用.而且辛酸-硫酸铵两步法提纯的IgG同样能得到高纯度、高生物活性的IgG. 相似文献
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采用辛酸-硫酸铵法提取兔抗牛病毒性腹泻-黏膜病毒(BVDV)高免血清中的免疫球蛋白IgG,辣根过氧化物酶标记提纯后IgG,建立了检测BVDV抗原的双抗体夹心斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)法。结果显示,抗体最佳包被量为300μg/mL,酶标记抗体的最适浓度为1∶50倍稀释,以5%牛血清作为封闭液、封闭45min效果最佳,抗原最小检出量是1.34μg/mL。应用建立的检测方法对河北省内78份腹泻奶牛血样进行了检测,阳性检出率为57.69%;经卡方检验分析,建立的Dot-ELISA与琼脂扩散(AGP)法相比较,阳性检出率差异显著。试验证明,该方法具有简便快速、特异性强、重复性高的优点,适合于基层兽医的检测诊断。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2020,(10)
为了制备抗新型鸭细小病毒卵黄抗体并改良其制备工艺,试验采用新型鸭细小病毒SD株尿囊液制备的油乳剂灭活苗免疫产蛋鸡,收取高免蛋分别用氯仿法、辛酸法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对其中的卵黄抗体进行提纯,比较提纯效果,然后采用SDS-PAGE和Western-blot法对制备效果进行评价,采用鸭细小病毒抗体酶联免疫检测试剂盒进行效价测定,分析卵黄抗体的消长规律。结果表明:氯仿法提取的卵黄抗体浓度为4.512 mg/mL,透明,呈浅黄色;辛酸法提取的卵黄抗体液浓度为3.422 mg/mL,半透明,呈浅白色;水稀释-硫酸铵二次沉淀法提取的卵黄抗体浓度为3.837 mg/mL,透明,澄清。SDS-PAGE结果显示卵黄抗体有两条特异性条带,一条重链(约为65 ku)和一条轻链(约为33 ku)。制备的卵黄抗体具有特异性。试剂盒测定卵黄抗体效价,氯仿法为1∶6 000;辛酸法为1∶8 000;水稀释-硫酸铵二次沉淀法最高,为1∶10 000,其中水稀释-硫酸铵二次沉淀法效果较优。说明本试验成功制备了新型鸭细小病毒的卵黄抗体。 相似文献
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鸭IgG提取方法的比较试验 总被引：7，自引：0，他引：7
用辛酸－硫酸铵法提取鸭IgG并与传统提取方法硫酸钠、硫酸铵法进行比较，结果表明，3种方法回收的IgG依次为12．35、8．36和10．14mg/mL，而且辛酸－硫酸铵法回收IgG纯度高，可用于免疫标记，比色谱层析快速、操作简单、价格低廉。用该法以鸭卵黄提取IgG，回收的IgG为13．58mg/mL，氯仿法为8．55mg/mL，PEG不能回收；辛酸－硫酸铵法从鸭卵黄得到的IgG活性最高。 相似文献
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分别采用饱和硫酸铵法和辛酸—硫酸铵法纯化兔抗酸性红73(acid red 73,AR73)免疫球蛋白G(IgG)。通过二喹啉甲酸(BCA)法、十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试验、间接ELISA法分别测定IgG的浓度、纯度及效价。结果显示,饱和硫酸铵法所提IgG浓度为36.44 mg/mL,最高效价达1.6×105;辛酸—硫酸铵法所提IgG浓度为15.79 mg/mL,最高效价达3.2×105。提示,辛酸—硫酸铵法IgG纯度优于饱和硫酸铵法。 相似文献
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分别用碳二亚胺(EDC)法和生理学法将半抗原青霉素G与BSA、OVA偶联,合成4种抗原分别为PEN-EDC-BSA、PEN-BSA、PEN-EDC-OVA和PEN-OVA。用PEN-EDC-BSA与PEN-BSA分别免疫兔获抗青霉素G多克隆抗体,间接ELISA法检测结果表明使用生理学偶联方法合成的结合抗原其免疫原性好于EDC法。免疫PEN-BSA组的兔抗血清效价达到1∶204800。用正辛酸-饱和硫酸铵法纯化抗血清,IgG的最高浓度为27.42mg/mL。 相似文献
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本试验分别用蛋白G亲和层析法、饱和硫酸铵法和辛酸-硫酸铵法纯化兔抗H9N2亚型禽流感病毒血清,发现蛋白G亲和层析法纯化得到的抗体纯度最高,回收率较低,抗体活性未变,操作简便,但成本较高,适合实验室研究及小量样品的纯化;饱和硫酸铵法纯化得到的抗体纯度较蛋白G亲和层析法低一些,抗体活性不变,可通过多次盐析来提高抗体纯度,多作为蛋白G亲和层析法纯化前的初步纯化;辛酸-硫酸铵法纯化得到的抗体纯度不及前两种方法,回收率较高,抗体活性亦无改变,纯化时对pH的精确性和辛酸的浓度要求较高,多用于样品的粗提和单抗的纯化。 相似文献
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用差速离心和非线性蔗糖密度梯度离心法提纯了感染雏鸡血浆中禽成髓细胞性白血病病毒(AMV),并用SDS-PAGE法提取了AMV的结构蛋白P_(27)~(838)。以纯化的P_(27)~(838)高免家兔,制备了兔抗P_(27)~(838)的禽白血病/肉瘤病毒群特异性抗体。选用兔抗P_(27)~(838)IgG作为包被抗体,该抗体与辣根过氧化物酶的结合物作为酶标抗体,以聚苯乙烯微量板为固相载体,建立了监测禽白血病的ELISA双抗体法,经试验证明该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点。 相似文献