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将电镜检查鸭冠状病毒阳性的病鸭肠管及粪便,经PEG沉淀及蔗糖线性梯度超速离心提纯抗原。用其免疫豚鼠制备抗血清,经饱和硫酸铵粗提,再经QAE-ScphadcxA50离子柱纯化提取IgG。纯化IgG与辣根过氧化物酶(HRP)用过碘酸钠法进行标记,制备酶标抗体,建立ELISA了双抗体夹心法,以诊断鸭冠状病毒性肠炎抗原,对发病鸭及回归试验、人工感染试验中收集的55份粪便样品,用本试验检测,并用电镜检查作为对照,证明该法具有特异、敏感、快速、简便之优点,解决了仅靠电镜检查的局限性。 相似文献
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应用硫酸萄聚糖钠沉淀的方法从新城疫免疫鸡卵黄液中提取出高效价纯净的IgG,平均浓度为10.839mg/ml,每枚鸡卵可提取出162 mg IgG,其HI抗体效价与提纯前的无明显差异。提纯的卵黄Ig G在—30℃低温冰箱内保存1年、在冻干状态下保存1.5年,抗体活性仍无明显影响。 相似文献
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鸡IgG快速分离纯化和纯度鉴定 总被引：5，自引：0，他引：5
随着免疫学实验技术的普及和发展,从鸡高免血清中提纯IgG已成为常用的免疫化学技术. 在提纯鸡IgG过程中,不但要保证除去绝大多数杂蛋白和白蛋白,保留大多数免疫球蛋白,包括各种IgG亚类,而且又不影响IgG生物活性.这就需要一种好的提纯方法,既要保证IgG纯度,又要保证其生物活性. IgG的经典提纯法是先用硫酸铵盐析,得到粗制的Ig(Immoun-globulin)然后再经分子筛层析,离子交换层析,亲和层析等方法进一步分离纯化IgG.这些纯化方法需要一定的仪器、设备,操作复杂,工艺流程较长,且试剂昂贵,在一般实验室难以推广使用.而且辛酸-硫酸铵两步法提纯的IgG同样能得到高纯度、高生物活性的IgG. 相似文献
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本试验采用辛酸去脂、饱和硫酸铵溶液盐析法提纯鹅卵黄抗体IgY,采用SDS-PAGE方法分析其纯度;用纯化后的IgY免疫试验兔,收集血清,测定血清抗体效价;采用辛酸-硫酸铵法结合Protein G树脂亲和层析法纯化免血清IgG,用改良的高碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记,直接ELISA法测定标记物效价.结果表明,提纯的鹅卵黄IgY浓度为11.5 mg/mL,纯度约为92％;血清琼脂扩散抗体效价为1∶32;Western Blotting试验证明,兔血清中含有抗鹅卵黄抗体IgY重链及轻链的特异性抗体;直接ELISA法测得标记物效价为1:1 100. 相似文献
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1酶联免疫吸附试验抗原采用猪囊尾蚴的囊液,经亲和层析纯化、浓缩、分装后,于-20℃保存,使用前,用0.1M pH值9.6醋酸盐缓冲液稀释,使蛋白含量为30毫克/分升.酶结合物用兔抗猪IgG免疫血清,经硫酸铵盐析沉淀,再经DEAE-纤维素纯化提取免疫抗猪IgG抗体,用辣根过氧化物酶标记兔抗猪IgG,经酶活力测定,应用时最适稀释浓度为1∶1000。操作方法为,以40孔聚苯乙烯微量反应为固相 相似文献
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鸭卵黄抗体IgY作为一种特异性多克隆抗体，被称为新生代抗体。它有完整型的和缺失型的两种类型的IgY，其缺失型IgY（△Fc）可以有效的排除假阳性反应，能够与别的特异性抗原有效结合而不会发生交叉反应。两种类型的IgY仅在一定的盐浓度环境中产生沉淀反应，目前己建立起多种鸭IgY分离纯化方法。卵黄抗体IgY具有类似于哺乳类IgG、IgE的功能，但鸭I既具有IgG的生物活性，又具有许多比哺乳类IgG更为优越的特点。 相似文献
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鹌鹑血清免疫球蛋白G的纯化及分子量的测定 总被引：1，自引：0，他引：1
利用机体自身的防御机能来抵御疾病侵袭的免疫学技术如今很受重视,免疫球蛋白G(I mmunoglobulin简称IgG)是血液和组织液中一类有特异免疫效应的糖蛋白,绝大部分分布于血清中,在脊椎动物体液免疫中起着十分重要的作用,是血清学诊断和疫苗免疫后检测的主要抗体。它广泛用于疾病诊断、免疫检测、治疗及独特型抗体疫苗制备等方面。目前,鹌鹑血清IgG的纯化及分子量的测定国内未见文献报道,本文通过饱和硫酸胺(SAS)分级沉淀、葡聚糖凝胶Sephadex-25层析脱盐、DEAE-纤维素纯化获得鹌鹑血清IgG,并采用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对… 相似文献
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免疫亲和层析纯化EGF-PE40 总被引：2，自引：0，他引：2
用PEG融合法建立了分泌抗EGF-PE40抗体的杂交瘤细胞株,并筛选了一杂交瘤细胞株D7.用此细胞株制备了高抗体含量的腹水,用辛酸-硫酸胺沉淀法纯化了抗体IgG,用ELISA法测定其与EGF-PE40的亲和常数2.24×109L/mol,并鉴定其亚类为IgG1.将纯化后的单抗IgG与CNBr活化的Sepharose 4B偶联,并用免疫亲和层析的方法纯化粗提物中的EGF-PE40,得到了大于80%的纯化率,且产物显示了良好的生物学活性,这为EGF-PE40的进一步纯化和大量生产提供了可能. 相似文献
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鹅卵黄IgG的纯化及兔抗鹅IgG酶标抗体的制备 总被引：4，自引：0，他引：4
采用三氯甲烷去脂、无水Na2S04盐析、DEAE23纤维素层析相结合的方法纯化鹅卵黄IgG,SDS-PAGE检测表明,所得鹅卵黄IgG纯度可达93%;用纯化的IgG免疫家兔,抗血清经双向琼脂扩散,证明兔抗鹅IgG抗血清效价约1:64,免疫电泳试验检测,证明得到了特异性抗血清,提取兔抗血清的IgG,用辣根过氧化物酶标记,制备了兔抗鹅IgG的酶标抗体,酶标抗体的效价为1:6400. 相似文献
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鸭瘟抗体检测方法研究 总被引：12，自引：0，他引：12
将鸭瘟组提病毒经Sephadex G200柱层析纯化后作为包被抗原，以健康鸭IgG提纯后免疫羊，制备羊抗鸭IgG，并用过碘酸钠法进行辣极过氧化物酶标记，建立了检测鸭瘟病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。经对不同血清样品的检测，表明此方法特异性高，重复性好，操作简便，适于大批鸭群抗体水平监测和流行病学调查，为合理免疫和科学预防提供了技术手段。 相似文献
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本研究利用经纯化的原核表达禽呼肠孤病毒(ARV)结构蛋白σ3作为免疫抗原,免疫兔子三次,血清效价达到27时采血分离血清.用硫酸铵沉淀法浓缩纯化血清中的IgG,纯化的IgG用荧光素FITC加以标记.利用制备的荧光标记特异性抗体和对反应条件进行优化,建立了表达σ3蛋白荧光抗体检测ARV的诊断方法.结果经纯化获得特异性抗ARV结构蛋白σ3的荧光标记IgG抗体.用标记的抗体检测ARV病毒感染的单层细胞,出现特异性的荧光.用建立的σ3-FA方法检测接种疑似ARV感染的病料的鸡胚原代成纤维细胞,检出的阳性样品与病毒分离结果一致.表明本研究建立的σ3-FA方法检测ARV病毒有较好的特异性,可用于ARV感染的临床样品检测. 相似文献
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应用猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株活疫苗免疫兔,制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株的特异性抗体IgG,应用15%SDS-PAGE和Western-blot进行纯化鉴定.结果表明:抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG经15%SDS-PAGE纯化分析和Western-blot的鉴定显示该特异性抗体IgG具有很好的免疫原性,特异性强,仅与该病毒毒株的ORF5发生特异性结合.说明兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体具有良好的免疫原性和特异性,可与猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5特异性结合,可以作为诊断试剂和诊断试剂盒的一抗. 相似文献
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为了探究重链抗体在骆驼免疫保护中的生物学作用,本研究利用Protein G和Protein A亲和层析纯化新疆双峰驼血清中总IgG和重链抗体IgG2,并免疫昆明小白鼠制备抗双峰驼总IgG和抗双峰驼重链抗体IgG2的多抗血清;通过ELISA检测双峰驼在体液免疫应答过程中针对spaA-N、溶菌酶和蒜氨酸酶3种抗原的重链抗体的滴度变化。结果从新疆双峰驼血清中亲和层析纯化出天然重链抗体IgG2,蛋白质分子质量约为46 ku;免疫昆明小白鼠后获得抗双峰驼总IgG多抗血清的效价为1∶204800,抗双峰驼重链抗体IgG2多抗血清的效价为1∶6400。在spaA-N免疫骆驼诱导的体液免疫应答过程中,重链抗体IgG2出现延迟反应。3种蛋白均能诱导抗原特异的IgG2亚类重链抗体的产生。 相似文献
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《畜牧与饲料科学》2017,(9)
以饱和硫酸铵沉淀法和Agarose-Protein G亲和层析技术相结合从银狐血清中提纯免疫球蛋白(IgG),再经SDS-PAGE电泳鉴定,将纯化的免疫球蛋白(IgG)作为抗原,采用常规方法免疫BALB/c小鼠,3次免疫后取脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞相融合制备杂交瘤细胞,利用间接ELISA、Western blot等方法进行鉴定及阳性克隆的筛选,对杂交瘤细胞产生的单克隆抗体进行鉴定和活性测定。结果得到与银狐免疫球蛋白(IgG)发生特异性反应的3株单克隆抗体,分别命名为E2、1E3和2G10。Western blot结果表明,E2、1E3和2G10单克隆抗体能与银狐IgG蛋白特异性结合。经抗体亚型鉴定E2、1E3和2G10均为IgG1、Kappa链。生产提纯的腹水单克隆抗体经Western blot分析效价可达到1∶6 000。该研究利用抗银狐IgG单克隆抗体制备检测感染主要传染病的银狐血清抗体试纸条具有良好的特异性与灵敏性,可以作为检测银狐主要传染病的一种新方法。 相似文献