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1.
以5株堆形艾美耳球虫为研究对象,对其线粒体细胞色素c氧化酶第Ⅲ亚基(cox3)的部分基因(pcox3)进行了PCR扩增、测序及序列分析,并与GenBank上已发表的顶复门原虫相关序列进行比较,研究其线粒体cox3基因遗传变异情况。结果每个虫株均获得572bp的目的片段,利用DNAStar软件进行序列比对,5株堆形艾美耳球虫线粒体pcox3序列完全一致,与疟原虫和住白细胞虫相应序列的相似性分别为51%和50%,而与泰勒虫的相似性少于50%。本研究首次报道了堆形艾美耳球虫pcox3序列,结果显示不同来源的堆形艾美耳球虫pcox3序列没有差异,与毒力无关,为进一步研究艾美耳球虫的群体遗传学奠定了基础。 相似文献
2.
以5株堆形艾美耳球虫为研究对象,对其线粒体细胞色素c氧化酶第Ⅲ亚基(cox3)的部分基因(pcox3)进行了PCR扩增、测序及序列分析,并与GenBank上已发表的顶复门原虫相关序列进行比较,研究其线粒体cox3基因遗传变异情况.结果每个虫株均获得572 bp的目的片段,利用DNAStar软件进行序列比对,5株堆形艾美耳球虫线粒体pcox3序列完全一致,与疟原虫和住白细胞虫相应序列的相似性分别为51%和50%,而与泰勒虫的相似性少于50%.本研究首次报道了堆形艾美耳球虫pcox3序列,结果显示不同来源的堆形艾美耳球虫pcox3序列没有差异,与毒力无关,为进一步研究艾美耳球虫的群体遗传学奠定了基础. 相似文献
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青海巨型住肉孢子虫线粒体cox1基因的克隆及进化分析 总被引：1，自引：0，他引：1
《中国兽医杂志》2017,(10)
为了研究青海省巨型住肉孢子虫线粒体细胞色素C氧化酶第一亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)的遗传变异情况,并用pcox1序列构建巨型住肉孢子虫与其他住肉孢子虫的种群遗传关系。利用PCR技术扩增巨型住肉孢子虫的pcox1,将测序所获序列进行比对,并进行同源性分析和系统发育树的构建。结果显示,所获得的pcox1序列长度均为968 bp,与GenBank已公布的巨型住肉孢子虫相似度为99.1%~99.8%。系统发育树表明,所有分离株与已知巨型住肉孢子虫位于同一分支。巨型住肉孢子虫pcox1序列种内相对保守(0.2%~0.7%),种间差异较大(6.8%~20.8%),可用作种间遗传变异研究的标记。 相似文献
4.
青海省共和县藏羊心肌住肉孢子虫的种类鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
《动物医学进展》2020,(5)
采用压片镜检法对采自青海省共和县藏羊心肌的住肉孢子虫进行形态观察,发现虫体包囊呈梭型、纺锤形或椭圆形,经HE染色呈蓝紫色,平均大小为50μm～84μm×110μm～180μm。采用PCR对其线粒体细胞色素C氧化酶第一亚基部分序列(pcox1)进行扩增、测序与分析,结果表明,所测样品pcox1的序列长度约为1000bp,与柔嫩住肉孢子虫(Sarcocystis tenella)基因序列的相似性为93.5%～100%,与羊犬住肉孢子虫(Sarcocystis capracanis)的相似性为93.6%～100%;系统发育树显示,试验样品与柔嫩住肉孢子虫和羊犬住肉孢子虫在同一分支。综上结果,表明本次采集自共和县藏羊心肌的住肉孢子虫存在2个种,分别鉴定为柔嫩住肉孢子虫(S.tenella)和羊犬住肉孢子虫(S.capracanis)。 相似文献
5.
《经济动物学报》2021,25(2):86-90
为阐明鱼头槽绦虫线粒体中的细胞色素c氧化酶第一亚基部分序列(pcox1)的遗传多态性,研究鱼头槽绦虫种系发育关系,以湖南省部分地区鱼头槽绦虫为研究对象,通过聚合酶链式反应(PCR)对其线粒体pcox1基因进行扩增并测序。序列分析比对后,结合Gen Bank收录的头槽绦虫以及其他科绦虫的序列,共同构建系统进化树,以此分析鱼头槽绦虫种内与种间的遗传关系。结果表明:湖南各分离株的pcox1长度为389～412 bp,各分离株间的同源性为93%～100%,与Gen Bank中收录的鱼头槽绦虫的同源性为99.2%～100%,序列均位于进化树同一分支上;本次收集的21株分离株与其他种绦虫序列的同源性为70.3%～80.0%,且进化树分支相距较远。结果说明鱼头槽绦虫的pcox1在不同地区种内均相对保守,种间差异较大,可以作为种间遗传变异研究的分子标记。 相似文献
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7.
《中国兽医学报》2019,(7):1325-1329
本研究从河北省奶牛场有腹泻症状2月龄左右的犊牛粪便中分离卵囊,进行病原分离与虫株鉴定。采集腹泻犊牛的新鲜粪便24份,采用饱和蔗糖溶液漂浮法和抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊,观察卵囊形态、大小。提取卵囊基因组DNA,进行18S rRNA基因PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测。对扩增片段进行序列测定及分析,进一步确定分离虫株隐孢子虫的种类/基因型,根据18S rRNA基因核苷酸序列构建系统发育进化树,确定虫株亲缘关系。结果显示,5份样品检出隐孢子虫卵囊,感染率为20.83%。形态学观察卵囊呈长圆形或椭圆形,大小为(5.0～8.2)μm×(4.2～6.3)μm,平均大小为6.6μm×5.3μm,卵囊指数为1.24,鉴定分离虫株为安氏隐孢子虫。PCR扩增出预期大小为1 188 bp的特异性片段,序列分析和同源性分析结果表明,分离株与安氏隐孢子虫AB089285.2株、AB513856.1株、AY954885.1株的同源性为98.7%～98.8%,进一步表明分离的隐孢子虫虫株为安氏隐孢子虫。在种系进化关系上,分离株与安氏隐孢子虫AB513856.1株亲缘关系最近。本研究为揭示河北省奶牛隐孢子虫病的流行特征,实施有效防制措施提供了科学依据。 相似文献
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9.
从家蚕体内分离得到一株新的病原性微孢子虫,编号为GXM1。光学显微镜下观察GXM1微孢子虫为长卵圆形,大小(1.85±0.15)μm×(4.19±0.18)μm,在生活史的各发育阶段均为双核,以二分裂方式增殖,发育速度缓慢,发育周期约8～10 d。GXM1微孢子虫与家蚕微孢子虫(Nb)的抗血清产生阳性凝聚反应。利用透射电子显微镜观察到GXM1微孢子虫的超微结构具双核,极丝11～12圈,极丝倾斜角约45°。以上生物学性状显示GXM1微孢子虫具有微孢子虫属(Nosema)的基本分类特征。依据GXM1微孢子虫与其它昆虫微孢子虫的SSU rRNA基因序列构建的系统发育树,以及序列相似性和遗传距离分析,进一步证实GXM1微孢子虫属于Nosema属。GXM1微孢子虫对蚁蚕的半数感染浓度(IC50)为6.06×105mL-1,对家蚕的胚种传染率可达23.28%,是一株具有较强致病性和危害性的家蚕病原性微孢子虫。 相似文献
10.
基于ITS-1基因序列的隐孢子虫种群分类 总被引：2，自引：0，他引：2
本试验以内转录间隔区1(ITS-1)基因作为研究对象,用PCR技术分别对广东(GD)禽源、广东(GD)和安徽(AH)牛源3个隐孢子虫分离株ITS-1基因进行扩增、克隆、序列测定和分析.将扩增序列用DNAStar(4.0)和ClustalX1.81软件与GenBank上登录的参考序列比对,用Phylip3.67构建种群发育进化树,以确定分离株与其他隐孢子虫虫种之间的亲缘关系.通过对ITS-1基因全序列分析,结果表明:禽源隐孢子虫GD分离株为Cryptosporidium baileyi,牛源隐孢子虫GD分离株和AH分离株均为C.andersoni.因此,ITS-1基因可作为隐孢子虫分离株种群分类的遗传标记,从而为隐孢子虫属的种间鉴定以及进一步的分子流行病学调查和分子诊断学研究奠定了基础. 相似文献
11.
Cytb分子标记技术在物种鉴定中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
细胞色素b（Cytochrome b,Cytb）基因作为一种线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）分子标记,其结构和功能是mtDNA的13个蛋白质编码基因中了解得最清楚的基因。它的进化速度适中,一个较小的基因片段就包含着从种内到种间、属间乃至科间的进化遗传信息,被认为是解决分类及系统进化问题可信的分子标记之一,目前,在很多领域已经得到了广泛的应用。本文将简要介绍Cytb基因及其研究方法,重点总结和归纳Cytb分子标记在物种鉴定中的应用现状并对其应用中的问题及发展趋势做一阐述。 相似文献
12.
根据猫的主要组织相容性复合体Ⅰ类分子cDNA序列设计PCR引物,从基因组上成功扩增并克隆了MHCClassⅠ基因片段,命名为TLA-A。该片段全长2 820 bp,包含MHC ClassⅠ分子基因约85%的长度,包括Exon 1部分序列、intron 1、exon 2、intron 2、exon 3、intron 3、exon 4、intron 4、exon 5、intron 5、exon 6、intron 6和exon 7部分序列。与其他物种的ClassⅠ基因相比,虎与家猫、猎豹、豹猫、大熊猫、狗、马、松鼠猴、人、黄猩猩等物种的同源性依次为93.4%、91.8%、87.3%、86.4%、85.1%、85.1%、84.6%、84.3%、83.7%,种间序列差异主要表现在exon 2、exon 3两个肽结合区。 相似文献
13.
牛Mx1基因位于1号染色体上,含有14个外显子,编码648个氨基酸。研究以346头陕西地区荷斯坦牛为研究对象,根据GenBank所提供的牛Mx1基因序列,设计15对引物,采用混合DNA池扩增测序和PCR-RFLP的方法对牛Mx1基因的14个外显子进行多态性分析。结果表明,4个SNPs,分别位于外显子3（g.843330T〉C,g.843411A〉G）、外显子4（g.844048C〉T）和外显子7（g.851325T〉C）。其中,外显子4（g.844048C〉T）为同义突变;外显子3（g.843330T〉C,g.843411A〉G）两个位点的突变分别导致了异亮氨酸（Ile）向苏氨酸（Thr）、谷氨酸（Glu）向精氨酸（Arg）的突变;外显子7（g.851325T〉C）位点的突变导致亮氨酸（Leu）变为脯氨酸（Pro）。4个SNPs位点都存在三种基因型,但纯合子的突变频率较低。4个SNPs位点共构建了11种单倍型,其中以H6为最主要的单倍型。结果显示,陕西地区荷斯坦牛Mx1基因存在较丰富的多态性,这将为Mx1基因结构和功能的研究以及将来在育种实践中的应用提供基础资料。 相似文献
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DONG Jing ZHANG Quan ZHANG Li LI Yan-qing LI Shan-shan WANG Zhang DU Bing-wang 《中国畜牧兽医》2016,43(11):3003-3010
The study was mainly focused on the genetic characteristics of frizzled feather trait,the phenotype difference between frizzled feather（FF）and incomplete frizzled feather（IFF),and SNP analysis of the candidate gene KRT75 in the frizzle and incomplete frizzle chickens of different feather colors,which could provide scientific gist for the frizzle gene mapping,development and utilization of the two kinds of chicken.The resource population（homozygous Yellow feather Kirin chicken×Huaixiang chicken）of hybrid F2 was established.The back,neck,wing primary and wing-bow feather were observed and the scatter diagram of rachis bending degree was drawn.The blood of 10 white frizzle feather Kirin（WFF）chicken,10 Yellow frizzle feather Kirin（YFF）chicken,10 Royal,25 Yellow feather incomplete frizzle（YFIF）chicken and 15 Black feather incomplete frizzle（BFIF）chicken from homozygous WFF chicken×Royal chicken of hybrid F1 were extracted,then the DNA of those samples were extracted.The primer of KRT75 was designed,the PCR products were also sequenced after purification,Chromas 2.22 and DNAMAN software were used to analysis of sequence peaks photos and sequence alignment,respectively.The amount of orthogonal and reciprocals cross in hybrid F1 was 127 and 139, respectively, which all were the slight（incomplete）frizzled feather phenotype,with no different penetrance.The resource population of hybrid F2 were consisted of 55 frizzle chicks including some hens and cocks,106 incomplete frizzled and 68 contour feather chicken,the proportion of which was coincided with Mendelian segregation ratio of 1:2:1 by χ2-test（P>0.05),therefore it preliminary verified that the frizzle gene F was autosomal incomplete dominant inheritance.FF and IFF curved upward deviating from the skin,and the line slope of trend line of FF was 3.5 times than that of IFF.It found that there was no 69 bp deletion mutation in exon 5 region of KRT75 gene in WFF and YFF chicken,but 3 SNPs（T71C,T83C,C95T）were deleted in the 69 bp,which were homologous CC in WFF and YFF chicken,of two were heterozygous in YFIF chicken,while all were heterozygous in BFIF chicken.2 SNPs（T662C and T770C）were also deleted in exon 6,heterozygous of which were only deleted in BFIF chicken.The haplotype analysis indicated that 9 haplotypes were detected in 60 individuals,hap1/hap1 was specific genotype of WFF and YFF chicken.The haplotypes of two incomplete frizzle feather chicken were apparently different,hap4 was specific haplotype of YFIF chicken,while hap6,hap7,hap8 and hap9 were specific haplotypes of BFIF chicken.The frizzle gene F was autosomal incomplete dominant inheritance,there were obvious differences between FF and IFF traits,5 SNPs in exon 5 and 6 of KRT75 gene probably were the reference of molecular markers as distinguishing between frizzle and incomplete frizzle chicken. 相似文献
15.
本试验通过对卷羽性状遗传特性和卷羽、半卷羽差异及对不同羽色卷羽、半卷羽鸡的候选基因KRT75序列SNP分析,为进一步对卷羽性状基因的定位和卷羽、半卷羽鸡的开发利用提供科学依据。以纯系黄色卷羽麒麟鸡和片羽怀乡鸡为素材,正反交构建F2代资源群体,对24周龄卷羽、半卷羽和片羽鸡背羽、颈羽、翅膀主翼羽和翼肩羽观察并绘制背羽羽轴弯曲程度散点图。随机抽取25周龄黄羽、白羽麒麟鸡和贵妃鸡各10只,F1代黄羽半卷羽鸡25只,以及白羽麒麟鸡×贵妃鸡杂交F1代黑羽半卷羽鸡15只的血样提取DNA,设计引物,PCR扩增纯化后测序,Chromas 2.22和DNAMAN软件用于分析测序峰形图和序列比对。结果显示,杂交F1代正交组127只,反交139只,不论公、母表型较一致,无外显率不同,均呈现轻度卷羽（半卷羽）,F1代间交配产生的F2代资源群体：卷羽鸡55只,半卷羽鸡106只,片羽鸡68只,公、母鸡均有卷羽,经过卡方适合性检验符合孟德尔遗传分离比1∶2∶1（P>0.05）,因此初步验证了控制卷羽基因F呈常染色体不完全显性遗传;卷羽、半卷羽鸡羽毛均背离皮肤向上弯曲,卷羽趋势线直线斜率是半卷羽的3.5倍;白羽和黄羽麒麟鸡外显子5处均不存在69 bp缺失,此69 bp发现3个SNPs：T71C、T83C、C95T,其中片羽鸡无突变,黄羽和白羽麒麟鸡均为纯合子,黄羽半卷羽鸡2个位点为杂合子,黑羽半卷羽鸡3个位点均为杂合子;外显子6处检测到了2个SNPs分别为T662C和T770C,仅在黑羽半卷羽鸡中为杂合子,其他均为纯合子,单倍型分析从60个个体中检测到了9种单倍型,hap1/hap1纯合型是黄羽和白羽麒麟鸡特异性的基因型,黄羽和黑羽半卷羽鸡的单倍型存在明显差异,hap4单倍型是黄羽半卷羽鸡特有的单倍型,hap6、hap7、hap8、hap9为黑羽半卷羽鸡特有的单倍型。卷羽性状基因F为常染色体不完全显性遗传,卷羽和半卷羽存在明显差异,KRT75基因序列外显子5和6处的5个SNPs可能作为区别卷羽和半卷羽鸡的分子标记参考。 相似文献
16.
利用真核生物18S rRNA基因的PCR通用引物对寄生于中国水牛的巴贝斯虫（已命名为东方巴贝斯虫-BnbPsia orientalis）基因组DNA进行扩增，得到其18S rRNA全基因片段，测序后blast分析表明该虫种属巴贝斯虫无疑。将该基因1700bp长片段序列与GenBank中15种已知巴贝斯虫的相应序列进行比较分析，建立系统发育树。结果表明，东方巴贝斯虫与南非未定种的巴贝斯虫亲缘关系最近，与羊巴贝斯虫亲缘关系较近，与牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫的亲缘关系较远。这一结果说明水牛东方巴贝斯虫是一独立种。 相似文献
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Inci A Yildirim A Njabo KY Duzlu O Biskin Z Ciloglu A 《Veterinary parasitology》2012,188(1-2):179-184
Assessing vector-parasite relationship is important in understanding the emergence of vector-borne diseases and the evolution of parasite diversity. This study investigates avian Plasmodium parasites in mosquitoes collected from Kayseri province in Central Anatolian, Turkey and determines the haemosporidian parasite lineages from these mosquito species. A total of 6153 female mosquitos from 6 species were collected from 46 sites during June-August of 2008 and 2009. Each mosquito's head-thorax and abdomen were separated, categorized with respect to species and collection area and pooled for DNA extraction. A total of 1198 genomic DNA pools (599 thorax-head, 599 abdomen) were constituted of which 128 pools (59 thorax-head, 69 abdomen) were positive for avian haemosporidian parasites (Plasmodium and Haemoproteus) by Nested-PCR analysis. Culex pipens, Aedes vexans, Culex theileri and Culiseta annulata were positive with minimum infection rates (MIRs) of 16.22 and 18.15, 4.72 and 5.98, 5.18 and 10.36, 10.64 and 10.64 in their thorax-head and abdomen parts, respectively. No avian haemosporidian DNA was detected from Culex hortensis and Anopheles maculipennis. Phylogenetic analyses of the partial cytb gene of avian haemosporidian mt-DNA from 13 positive pools revealed that 11 lineages in four phylogenic groups were Plasmodium and the other two were Haemoproteus. Our results suggest that Cx. pipiens could probably be the major vector of avian Plasmodium in Central Turkey. This is the first report of molecular detection and characterization of avian Plasmodium lineages from mosquitoes in Turkey. 相似文献
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白细胞介素-12对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用 总被引：1，自引：0，他引：1
犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白。利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为进一步提高VP2DNA疫苗的免疫应答水平,本研究在小鼠体内尝试了利用白细胞介素12（IL-12）基因表达载体提高VP2DNA疫苗的免疫应答水平。首先采用RT-PCR方法从小鼠脾淋巴细胞中分别扩增IL-12大亚基（P40）和小亚基（P35）cDNA基因;然后在真核表达载体pcDNA3.1A上通过引入内部核糖体进入位点（IRES）序列,分别将P40基因和P35基因插入到IRES序列的上下游,构建成IL-12（P40和P35双亚基）基因表达载体,pcDNA-P40-IRES-P35。将上述表达载体与本室构建的VP2表达载体通过磷酸钙方法转染HEK 293T细胞进行瞬时表达,以确定构建的表达载体能否介导相应基因在真核细胞中进行分泌表达。然后用VP2载体单免疫和VP2载体和IL-12载体共免疫方法对小鼠进行免疫（用pcDNA3.1A作为对照）。免疫后在特定时间通过ELISA方法检测小鼠血清抗VP2蛋白的抗体水平,并通过淋巴细胞增殖实验检测免疫后35d小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应。结果表明,扩增的小鼠IL-12P40和P35亚基基因与GenBank的参考序列基本一致。Western-blot检测结果表明,重组IL-12和VP2均能够在HEK293T细胞中进行分泌性表达。ELISA检测结果表明利用IL-2载体与VP2载体共免疫小鼠,其血清中抗VP2的抗体水平明显高于VP2载体单免疫组（P〈0.01）,抗体水平在第35天高达1：5120。淋巴细胞增殖试验结果表明,免疫小鼠的淋巴细胞刺激指数均明显高于对照组（P〈0.01）,VP2载体与IL2载体共免疫组的刺激指数明显高于VP2载体单免疫组（P〈0.05）。由此可见,在小鼠体内,IL-12基因表达载体可明显提高CPV VP2基因疫苗的免疫应答水平。 相似文献
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根据禽流感病毒的HA基因,设计特异性的引物,而后从尿囊液提取病毒的RNA,应用RT-PCR技术扩增该流感病毒的HA全基因序列,将该基因克隆到pMD-18T载体,并进行鉴定和测序,应用生物学分析软件进行同源性比对和绘制HA基因的进化树,并推导其氨基酸序列。结果表明：HA基因全长1701 bp,共编码567个氨基酸,与Genbank中选择的27株禽流感病毒基因的HA基因序列相比较,核苷酸序列和氨基酸序列同源性均在92%以上。通过对HA基因的同源性比对,可以明确毒株间的进化关系,从而为禽流感的遗传进化研究提供参考。 相似文献
20.
实验采用PCR和克隆测序方法首次从黑熊基因组中获得一全长为1019 bp的苦味受体Tas2R2基因DNA序列（GenBank登录号：JQ239035）.该序列含有完整的1个外显子（无内含子）,大小为915 bp,编码304个氨基酸残基.其蛋白质等电点为9.49,分子量为34.80 kDa.拓扑结构预测显示黑熊Tas2R2蛋白上含有3个N糖基化位点、4个丝氨酸磷酸化位点、3个色氨酸磷酸化位点和1个酪氨酸磷酸化位点.整个蛋白质多肽链含有7个跨膜螺旋区,细胞外区和内区均为4个.亲水性/疏水性分析表明,黑熊Tas2 R2蛋白质为疏水性蛋白,其亲水性区段所占比例较小.种间同源性比较显示,黑熊Tas2R2基因与大熊猫、猫、犬、马和小鼠的cDNA序列同源性分别为98.3％、91.5％、62.9％、58.7％、52.6％;氨基酸序列同源性分别为96.7％、85.5％、49.3％、44.7％、36.1％.黑熊、大熊猫、犬、猫、马和小鼠的Tas2R2基因外显子核苷酸序列构建的基因树与其物种树的拓扑结构是相一致的,表明Tas2R2基因适合于构建不同物种间的系统进化树. 相似文献