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猪弓形虫病特异PCR诊断方法的建立 总被引:11,自引:2,他引:11
以核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列作为弓形虫种特异的遗传标记.建立了猪弓形虫病特异PCR诊断方法。应用人工感染的方法建立了猪弓形虫病动物模型.摸索出猪弓形虫病PCR检测的最佳条件。敏感性和特异性试验结果显示,该PCR方法最低能检测到10个弓形虫速殖子的DNA,且与相关的8种原虫和线虫均无交叉反应,证明该PCR方法具有高度的敏感性和特异性。动物感染试验结果证明.在试验猪出现明显临床症状时(感染后第5d).对取材的8个组织样品用该PCR方法检测,有6个组织样品为阳性,其中检出率最高的组织为肺门淋巴结。 相似文献
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欧氏和玛氏对盲囊线虫线粒体nad1基因部分序列的比较研究 总被引:1,自引:0,他引:1
欧氏对盲囊线虫(Contracaecum ogmorhini)和玛氏对盲囊线虫(Contracaecum margolisi)是属于欧氏对盲囊线虫复合种中的两个种,前来自于南半球,后来自于北半球,二在地理分布和宿主特异性方面均有明显的不同。本研究用γ^33P对引物进行标记,通过聚合酶链式反应一单链构象多态性(PCR—SSCP)分析和DNA序列分析技术对来自南半球两个不同地理种群的欧氏对盲囊线虫和北半球种群的玛氏对盲囊线虫在线粒体NADH脱氢酶亚单位Ⅰ基因(nad1)部分序列的差异及种群遗传关系进行了研究。结果显示:南半球两个种群的序列相似性很高,而北半球种群与南半球种群的序列相似性则相对较低,它们之间had1部分序列种间遗传差异大于种内,且存在着2个可作为区分两的遗传标记。种群遗传关系分析也表明:北半球的玛氏对盲囊线虫种群作为一个独立的新种而区别于南半球的两个欧氏对盲囊线虫种群。 相似文献
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应用cDNA微阵列芯片技术筛选猪蛔虫性别差异表达基因的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
采用cDNA微阵列芯片技术,从所构建的猪蛔虫雌、雄成虫cDNA消减文库分别挑取1044和1119个克隆,PCR扩增其插入片段,经纯化后点样于预先处理好的基片上(双点杂交),制备成cDNA微阵列芯片。将分别标记荧光素Cy3-dUTP和Cy5-dUTP的雌虫和雄虫cDNA探针,与制备好的cDNA芯片杂交(平行进行反标杂交试验)。根据每个点杂交后的Ratio值,筛选出双点杂交和正反标中都同时具有表达差异的基因克隆共1559个。将表达差异最明显的前831个克隆进行测序,获得720个有效序列,经生物信息学分析发现,雄虫特异表达的主要精于蛋白和雌虫特异表达的卵巢信息蛋白的基因序列多数与新杆属线虫存在同源性,有31个可能是新的ESTs。性别差异表达基因及其相关生物信息的获得为下一步研究基因功能奠定了基础。 相似文献
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为筛选与线虫感染性相关的基因,本研究以猪蛔虫为对象,构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cDNA文库,为研究线虫期特异性发育的分子机制奠定基础。分别提取感染期幼虫和其它各期幼虫及成虫的总RNA,纯化mRNA后,采用Clontech公司PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交(SSH),构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达的消减cDNA文库,并采用Southern斑点杂交进行消减效率的检测。随机从文库中抽取45个克隆进行测序及在线BLAST分析。试验结果表明,感染期幼虫差异表达的消减cDNA文库具有较强的特异性;在得到的41个表达序列标签(ESTs)中,有40个ESTs与已报道的基因有较高的相似性,主要代表猪蛔虫第三期幼虫基因和成虫头部基因,有1个cDNA片段可能代表新基因。猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cDNA文库的成功构建,为进一步研究幼虫发育差异表达基因的功能奠定了基础。 相似文献
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1 发病情况 2011年4月29日,安阳县崔家桥乡某饲养户饲养的l批罗曼褐鸡3500羽,70日龄时突然发病,传播速度快。病初,病鸡缩头闭眼,呆立,羽毛乍立,排黄白色稀便。眼部流泪、红肿,流鼻液,伸颈张口,呼吸有锣音。发病第4天出现死亡,死亡率达9%。经综合诊断为鸡传染性喉气管炎,及时采取相应的治疗措施使病情得以控制。 相似文献
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片形吸虫第一内转录间隔区DNA多态性的研究 总被引:9,自引:0,他引:9
以不同地区的片形吸虫虫株为研究对象,经PCR扩增出了ITS-1部分基因片段,采用单链构象多态性(SSCP)方法,并结合序列分析研究了不同地区片形吸虫ITS-1 DNA的多态性。不同地区的样品经SSCP分析,显示3种带型,第1种为大片形吸虫的带型,第2种为肝片形吸虫的带型,第3种为2种带形的混合带型。广西区样品和大部分贵州省样品属于大片形吸虫带型;四川省、黑龙江省和部分贵州省样品为混合带型;南京市和甘肃省样品为肝片形吸虫带型或混合带型。测序结果表明,根据ITS-1基因的序列变异位点可区分2种片形吸虫;表现为混合带型的样品在变异位点具有多态性。本研究结果显示,ITS-1片段可作为遗传标记用以区分大片形吸虫和肝片形吸虫,同时也证实,在我国除了这2种片形吸虫外,还可能存在着“中间型”的片形吸虫。 相似文献
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白细胞介素18(IL-18)是一种能诱导IFN-γ产生的新型细胞因子。它具有多种生物学功能.能诱导Th1细胞和自然杀伤细胞产生干扰素γ,促进T淋巴细胞和自然杀伤细胞表达FasL,有较强的抗肿瘤和抗微生物感染的作用。 相似文献